莱克多巴胺Rac定量检测试剂盒ELISA

1、莱克多巴胺（Rac）定量检测试剂盒（ELISA）利用说明书一、概要P兴奋剂是一种人和兽医作为医治哮喘的药物。在家畜中超剂量利用能够脂肪组织转化为肌肉组织，由于能够显著改善脂肪率和生产效率，B兴奋剂往往被滥用于畜牧养殖生产中。已经有克伦特罗或其他。兴奋剂中毒的病例报导，近来乂有一些非法利用莱克多巴胺（Rac）来替代克伦特罗作为饲料添加，并存在滥用现象。通常情形下，HPLC或GC-MS是克伦特罗残留检测的确证方式，可是其前处置步骤繁琐、费用昂贵。酶联免疫快速检测试剂盒具有本钱低廉、操作简便、一次处置样本量大等优势，已成为常规的初步筛查方式。本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代药物残留检测产品，

2、与仪器分析技术相较具有快速、简便、准确和灵敏度高等特点，能最大限度地减少操作误差和工作强度。二、用途定量检测动物尿液中莱克多巴胺（Rac）的残留。三、检测原理本试剂盒采纳竞争酶联免疫实验。检测的基础是抗原抗体反映，微孔板预包被羊抗鼠IgG捕捉抗体，加入鼠抗莱克多巴胺抗体后，会与捕捉抗体连接。通过孵育及洗板后，加入标准品、样品及莱克多巴胺酶标记物（Rac-HRP）,游离的莱克多巴胺（Rac）与莱克多巴胺酶标记物（Rac-HRP）竞争莱克多巴胺抗体结合位点。通过孵育及洗板后，加入底物并孵育。结合的酶连接物将底物转化为蓝色的产物。加入反映终止液后使颜色由蓝转变成黄色。在450nm处测量，吸光度值与样

3、品中的莱克多巴胺浓度成反比，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数即可得出样品中莱克多巴胺的含量。四、检测限检测限:ml（）五、特异性交叉物交叉率（）DobutamineRitodrineRactopamineRactopamineGlueB384(IS,3S)-Ractopamine(1R,3S)-RactopamineIsoxsuprineSalmeterolFenoterolClenbuterolSalbutamol六、试剂盒组成每一个盒中的试剂足够进行96个实验(包括标准测定)，试剂盒中的组份如下：一、96孔酶标板1块(12孔义8条)：预包被羊抗鼠IgG二、标准液X6瓶(1ml/瓶)：O

4、ng/mL、mL、mL、mL、mL、mL3、酶连接物(6mL)：辣根过氧化物酶标记的莱克多巴胺工作液4、莱克多巴胺抗体(6mL)：鼠抗莱克多巴胺单克隆抗体工作液五、底物液A(6mL)：过氧化肥6、底物液B(6mL)：四中基联苯胺(TMB)7、终止液(6mL)：2NH2SO,8、浓缩洗涤液(25X)(25mL)：含Tween-20的磷酸盐缓冲液(PBST)9、其他：封板膜3张，自封袋1个，说明书1份七、样本处置处置任何样本，必需利用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要改换吸头。取50UL清亮尿样直接测定，如尿样浑浊3000转离心lOmin,取上层清亮尿液测定，暂不利用的样本应于-20冷冻保留。八、检

5、测步骤认真的洗涤超级重要。幸免在操作进程中微孔显现干燥。1、将所需试剂从冷藏环境中掏出，置于室温(20-25)平稳30min以上。2、预备：掏出需要数量的微孔板，将用剩的微孔板放入自封袋，保留于2-8。将微孔板条插入微孔架，标准品和样品做两个平行实验，记录下标准品和样品的位置。3、加抗体：每孔加入100UL稀释后的抗体溶液，37c恒温箱孵育30分钟。4、洗板：倒出孔中的液体，将微孔架倒置在干净吸水纸上拍打，以保证完全除去孔中的液体。每孔加满稀释后的洗涤工作液，静置20秒钟，甩去液体，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次。5、加标准品/样品：加入50UL标准品或处置好的样品到各自的微孔中，标准品和样品

6、做两个平行实验，然后加入50UL稀释后的酶连接物到微孔，警惕地充分混合，37c恒温箱孵育30分钟。6、重复3的操作。7、显色:每孔先加入底物液A50UL,再加入底物液B50UL,37c避光孵育15min（若是显色过浅，可适当延长孵育时刻，反之亦然）。8、测定：每孔加入终止液50UL,设定酶标仪于450nm处，测定每孔0D值。九、结果判定（1）仃分吸光率的计算，标准品或样本的仃分吸光率等于标准品或样本的仃分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%,即百分吸光度值BX100%（%）=B0B一标准溶液或样本溶液的平均吸光度值Bo-Oppb标准溶液的平均吸光度值（2）

7、标准曲线的绘制与计算以标准品百分吸光率为纵坐标，以莱克多巴胺标准品浓度（ppb）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的仃分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中莱克多巴胺的实际浓度。假设利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）十、注意事项一、严格依照说明书操作时刻，每加一种试剂前需要将其摇匀，各操作步骤紧凑进行。二、室温低于20c或试剂及样本没有回到室温（20-25C）会致使所有标准的0D值偏低。3、在洗板进程中若是显现板孔干燥的情形，那么会显现标准曲线不成线性，重复性不行的现象。因此洗板拍干后应当即进行下一步操作。4、试剂变质的迹象底物有任何颜色说明变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于（A450nm）时，表示试剂可能变质。五、不要利用过了有效日期的试剂盒；也不要利用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂利用过了有效期的试剂盒会引发灵敏度的降低；不要互换利用不同批号试剂盒中的试剂。6、在加入底物液A液和底物液B液后，一样显色20min即可