电化学分析法在黄酮含量测定中的应用

1、摘要 错误!未定义书签。1.电化学分析概述 错误!未定义书签。.定义 错误!未定义书签。.重要特征 错误!未定义书签。.电化学分析法的特点 错误!未定义书签。.电化学分析法的类别 错误!未定义书签。直接电位法 错误!未定义书签。电解与库仑分析法 错误!未定义书签。极谱法与伏安分析 错误!未定义书签。电导分析法 错误!未定义书签。.电化学分析的基本方法： 错误!未定义书签。化学电池与电化学分析装置 错误!未定义书签。电位及电化学参数测量的基本原理 错误!未定义书签。液体接界电位 错误!未定义书签。.黄酮类化合物简介 错误!未定义书签。.定义 错误!未定义书签。根据中央三碳链的氧化程度、B-环连接

2、位置（2-或3-位）以及三碳链是否构成环状等特点 错误!未定义书签。.性质 错误!未定义书签。物理性质 错误!未定义书签。化学性质 错误!未定义书签。.定性鉴别 错误!未定义书签显色反应 错误!未定义书签.作用 错误!未定义书签.电化学测定方法的应用 错误!未定义书签.库伦分析法的应用 错误!未定义书签银杏提取物中黄酮含量测定 错误!未定义书签槐花提取物中黄酮含量测定 错误!未定义书签红花中黄酮含量测定 错误!未定义书签油菜花粉浸液中黄酮含量测定 错误!未定义书签. 极谱分析法 错误!未定义书签单扫示波极谱法快速测定保健食品中的总黄酮含量.错误!未定义书签差示脉冲极谱法测定高良姜中的柳皮素 错

3、误!未定义书签示波极谱法测定银杏叶片中柳皮素的含量 错误!未定义书签. 高效毛细管电泳法 错误!未定义书签毛细管电泳法分析密蒙花中橙皮素、木犀草素和芹菜素.错误!未定义书签4.电化学在黄酮测定领域中的发展趋向错误!未定义书签摘要：黄酮类化合物是一类存在于自然界的、具有2-苯基色原酮结构的化合物，黄酮类化合物多为结晶性固体，少数为无定型粉末。它们分子中有一个酮式跋基，第一 位上的氧原子具碱性，能与强酸成盐，其染基衍生物多具黄色，故又称黄碱素或黄酮。 黄酮类化合物在植物体中通常与糖结合成甘类，小部分以游离态的形式存在。绝大多数 植物体内都含有黄酮类化合物，它在植物的生长、发育、开花、结果以及抗菌防

4、病等方 面起着重要的作用，电化学检测法具有选择性好、灵敏度高、操作方便、分析速度快等 优点。而且可以根据电活性物质的不同特性对电极做不同的化学修饰，大大拓宽了电化 学的应用范围，在黄酮类化合物的检测中具有广泛的应用和发展前景。关键词：黄酮类化合物离子液体电化学盐酸镁粉反应比色法Abstract: Flavonoids are a class exists in nature, a compoundhaving a 2-phenyl chromone structure, flavonoids much as a crystalline solid, rarely amorphous powde

5、r. They molecules have a keto carbonyl group, an oxygen atom on the first with basic, with a strong acid a salt thereof with a carbonyl derivative more yellow, so called yellow base pigment or flavonoids. Flavonoids in the plant are usually combined into sugar glycosides, a small part of the free st

6、ate of form. The vast majority of plants contain flavonoids, which plays an important role in plant growth, development, flowering, fruiting, and disease prevention and other aspects of anti-bacterial, electrochemical detection method has good selectivity and high sensitivity, ease of operation, ana

7、lysis speed and so on.And you can do depending on the characteristics of the electrode electrically active material of different chemical modification, greatly broadens the range of applications of electrochemical, has broad application and development prospects in the detection of flavonoids in.Key

8、words:flavonoidglycosides,ionicliquids, electrochemistry,hydrochloric acid, Magnesium powdercolorimetric method.电化学分析概述定义应用电化学的基本原理和实验技术，依据物质的电化学性质来测定物质组成及含量的分析方法称之为电化学分析或电分析化学。重要特征直接通过测定电流、电位、电导、电量等物理量，在溶液中有电流或无电流流动的 情况下，来研究、确定参与反应的化学物质的量。依据测定电参数分别命名各种电化学 分析方法：如电位分析法、电导分析法；依据应用方式不同可分为：直接法和间接法。电化学分析

9、法的特点a.灵敏度、准确度高，选择性好，应用广泛；b.被测物质的最低量可以达到10-12 mol/L数量级；c.电化学仪器装置较为简单，操作方便，尤其适合于化工生产中的自动控制和在线 分析；d.传统电化学分析：无机离子的分析；e.测定有机化合物也日益广泛；f.有机电化学分析；g.电化学分析在药物分析中也有较多应用；h.应用于活体分析。电化学分析法的类别直接电位法理论基础：电极电位与溶液中电活性物质的活度有关。实验测定顺序：溶液电动势电极 能斯特方程 物质的含量分析方法：用电位测量装置指示滴定分析过程中被测组分的浓度变化。应用方法：浓度变化 电极 滴定曲线 计量点应用范围：研制各种高灵敏度、高选

10、择性的电极是电位分析法最活跃的研究领域之电解与库仑分析法电解分析：在恒电流或控制电位的条件下，被测物在电极上析出，实现定量分离测定目的的方法；电重量分析法：电解过程中在阴极上析出的物质量通常可以用称重的方法来确定；库仑分析法：依据法拉第电解定律，由电解过程中电极上通过的电量来确定电极 上析出的物质量；电流滴定或库仑滴定：在恒电流下，电解产生的滴定剂与被测物作用。极谱法与伏安分析伏安分析：通过测定特殊条件下的电流一电压曲线来分析电解质的组成和含量的一类分析方法的总称;极谱法：使用滴汞电极的一种特殊的伏安分析法。电导分析法普通电导法：高纯水质测定，弱酸测定;高频电导法：电极不与试样接触电化学分析的

11、基本方法:化学电池与电化学分析装置化学电池：原电池和电解电池 电化学基本装置：两支电极、电源、放大与显示记录装置电位及电化学参数测量的基本原理两大类电化学分析方法：无电极反应。如电导，电泳分析法。使用惰性金属铝电极;电极上有氧化还原反应发生。如库仑分析及伏安分析。电位分析原理：E = E+ - E-+ EL电位测量：E 外=E测：外电位随两支电极间电位变化。I = 0 :测定过程中并没有电流流过电极。电极:参比电极：电极电位不随测定溶液和浓度变化而变化的电极;指示电极：电极电位则随测量溶液和浓度不同而变化；由电池电动势的大小可以确定待测溶液的活度(常用浓度代替)大小。液体接界电位定义：在两种不

12、同离子的溶液或两种不同浓度的溶液接触界面上，存在着微小 的电位差，称之为液体接界电位。液体接界电位产生的原因：各种离子具有不同的迁移速率而引起。.黄酮类化合物简介定义黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环 (A-与B-环)通过中央三碳原子相互连结 而成的一系列化合物，其基本母核为2-苯基色原酮。黄酮类化合物结构中常连接有酚羟 基、甲氧基、甲基、异戊烯基等官能团。根据中央三碳链的氧化程度、B-环连接位置(2-或3-位)以及三碳链是否构成 环状等特点结构较简单的， 黄酮类(flavones )、黄酮醇(flavonol )、二氢黄酮类 (flavonones )、二氢黄酮醇类(flavanonol

13、)、花色素类(anthocyanidins )、黄烷-3 , 4 二醇类(flavan-3,4-diols )、双苯叱酮类(xanthones)、查尔酮(chalcones ) 和双黄酮类(biflavonoids )等十五种。结构很复杂的，其中包括榕碱及异榕碱等生物碱型黄酮。根据B环连接位置(2为或3为)、C环氧化程度、C环是否成环等将黄酮类化合 物黄酮和黄酮醇黄酮和黄酮醇指的是狭义的黄酮，即 2-苯基色原酮(2-苯基苯并丫叱喃酮)类, 此类化合物数量最多，尤其是黄酮醇。如芫花中的芹菜素、金银花中的木犀草素属于黄 酮类；银杏中的山奈素和柳皮素属于黄酮醇类。二氢黄酮和二氢黄酮醇他们结构中C环C

14、2-C3位双键被饱和，在植物体内常与相应的黄酮和黄酮醇共存。 如甘草中的甘草素、橙皮中的橙皮昔均属于二氢黄酮类；满山红中的二氢柳皮素、桑枝 中的二氢桑色素均属于二氢黄酮醇类。异黄酮和二氢异黄酮异黄酮类为具有3-苯基色原酮基本骨架的化合物，与黄酮相比其 B环位置连接不 同。如葛根中的葛根素、大豆甘及大豆素均为异黄酮。二氢异黄酮类可看作是异黄酮类 C2和C3双键被还原成单键的一类化合物。如中药广豆根中的紫檀素就属于二氢异黄酮 的衍生物。查耳酮和二氢查耳酮类查耳酮的主要结构特点是 C环未成环，另外定位也与其他黄酮不同。其可以看作是 二氢黄酮在碱性条件下C环开环的产物，两者互为同分异构体，常在植物体内

15、共存。同 时两者的转变伴随着颜色的变化。二氢查耳酮在植物界分布极少。中药红花中的红花甘 为查耳酮类。红花在开花初期时，花中主要成分为无色的新红花甘（二氢黄酮类）及微 量红花甘，故花冠是淡黄色；开花中期花中主要成分为黄色的红花甘， 故花冠为深黄色; 开花后期则变成红色的酿式红花甘，因此花冠为红色。橙酮类可看作是黄酮的C环分出一个碳原子变成五元环，其余部位不变，但 C原子定位也 有所不同。是黄酮的同分异构体，属于苯骈味喃的衍生物，又名噢喳。如黄花波斯菊花 中含有的硫磺菊素就属于此类。花色素和黄烷醇类花色素类是一类以离子形式存在的色原烯的衍生物。广泛存在于植物的花、果、叶、 茎等部位，是形成植物蓝、

16、红、紫色的色素。由于花色素多以甘的形式存在，故又称花 色甘。如矢车菊素、飞燕草素、天竺葵素等属于此类。黄烷醇类生源上是由二氢黄酮醇 类还原而来，可看成是脱去C4位谈基氧原子后的二氢黄酮醇类。黄烷-3-醇在植物界分 布很广，如(+)儿茶素(catechin)和(-)表儿茶素(epicatechin )。故又称为儿茶素 类。其他黄酮类：此类化合物大多不符合 C6-C3-C6的基本骨架，但因具有苯并丫 -叱喃酮结构，也将 其归为黄酮类化合物。双黄酮类是由二分子黄酮衍生物通过 C-C键或C-O-C键聚合而成 的二聚物。如银杏叶中含有的银杏素即为 C-C键相结合的双黄酮衍生物。高异黄酮：和异黄酮相比，其

17、 B环和C环之间多了一个一CH2-,如中药麦冬中存 在的麦冬高异黄酮A(ophiopogononeA)。味喃色原酮：即色原酮的 C6-C7位并上一个味喃环。如凯刺种子和果实中得到的 凯林属于此类。苯色原酮：即色原酮的 C6-C7位并上一个苯环。如决明子中含有的红镰酶素属于 此类。性质天然黄酮类化合物多以昔类形式存在，并且由于糖的种类、数量、联接位置及联接方式不同可以体现出不同的理化性质。物理性质黄酮类化合物多为结晶性固体，少数为无定形粉；末交叉共腕体系，并通过电子转 移、重排，使共腕链延长，因而显现出颜色；由于其母核内形成黄酮甘一般易溶于水、 乙醇、甲醇等极性强的溶剂中；但难溶于或不溶于苯、氯

18、仿等有机溶剂中。化学性质酸性：黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显酸性；碱性氧原子的性质：1-位氧原子，微弱的碱性，与强无机酸生成洋盐（加水即水解）， 常用于鉴别花色素。定性鉴别显色反应a.盐酸-镁粉反应可用于鉴别的黄酮物质：黄酮类 、黄酮醇、二氢黄酮类、二氢黄酮醇类；反应中的现象：橙红色变为紫红色。b.金属盐类试剂的配合反映可用于鉴别的铝盐：三氯化铝、硝酸铝；反应中的现象：黄三色并且荧光色出现。可用于鉴别的铅盐：醋酸铅、碱式醋酸铅；反应中的现象：黄色变为红色沉淀。作用黄酮的功效是多方面的，它是一种很强的抗氧剂，可有效消除体内的氧自由基，如 花青素可以抑制油脂性过氧化物的全阶段溢出，这种阻止

19、氧化的能力是维生素 E的十倍以上，这种抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生。黄酮可以改善血液循环，可以降低胆固醇，向天果中的黄酮还含有一种PAF抗凝因子，这些作用大大降低了心脑血管疾病的发病率，也可改善心脑血管疾病的症状。被称为花色甘酸的 黄酮化合物在动物实验中被证明可以降低 26%勺血糖和39%勺三元脂肪酸丙酯，这种降 低血糖的功效是很神奇的，但更重要的是它对稳定胶原质的作用，因此它对糖尿病引起 的视网膜病及毛细血管脆化有很好的作用。黄酮可以抑制炎性生物酶的渗出，可以增进 伤口愈合和止痛，株素由于具有强抗组织胺性，可以用于各类敏感症。绿茶中所含的黄 酮服用或者注射黄酮后，肝

20、脏中微量的黄酮能在一定程度上抑制药物代谢酶的活性；其 心脏病的发病概率是那些不喝茶的人的一半；致命性心脏病发病率只有三分之一。但是 高浓度的黄酮能诱导很多药物代谢酶的表达，使药物代谢酶增多。.电化学测定方法的应用库伦分析法的应用库伦分析法是在电解分析法的基础上发展起来的，通过测量物质在100%1流效率下电解所消耗的电量进行定量分析。库伦分析有两种形式：一种是恒电位库仑法，也称作 库伦滴定法。黄酮的定量分析采用的通常是库伦滴定法，通常用的是澳库伦滴定法，它 是利用黄酮结构中的酚羟基可与澳发生取代反应的原理来对黄酮化合物进行定量测量。银杏提取物中黄酮含量测定以铝电极作为指示电极，鸨电极作为参比电极

21、，在KBr的盐酸介质中，以KBrO 3标准液为滴定剂，根据示波器荧光屏上荧光点的最大位移指示来确定滴定终点，再由所 消耗的KBrO 3的量计算出银杏提取物中黄酮含量（以产丁计）。产丁标准溶液的配置产丁标准溶液称取110c干燥恒重的产丁对照品0.2g ,加60%S醇加温溶解，冷却 并稀释至100mL这种溶液中含产丁 0.2g/L ;用时用水稀释至0.1g/L。磷酸氢二钠溶液（L）,方法是称取磷酸氢二钠（Na2 Hp012H2O） 35,8160g,加水溶解后移入 500mL容 量瓶中，稳定后，刻度定容。磷酸二氢钾溶液（L）,称取磷酸氢二钠（Na2HPQ） 6,8045g , 加水溶解后移入100

22、mL的容量瓶中，定容至刻度。硝酸盐底液（），吸取L Na?HPQ与 KH，P04溶液混合。实验水为蒸储水或去离子水。测试结果表明：本法与紫外分光光度法结果无显著性差别（99%勺置信度），并且具 有仪器操作简单，操作方便，测定快速并且准确。可以避免色素和其它杂志的干扰等特 点。但需要注意的是底液盐酸的浓度，支持电解质KBr的用量及速度。乙醇回流法提取杏叶中的总黄酮，先用聚酰胺净化所提取物质，以2mol/LHCL-1mol/LKBr-无水 EtOHV （HCL ：V （KBr） :V （EtOH） =3:3:2混合液为电解液，用 死停法确定滴定终点，测定精密度 RSD=%回收率为槐花提取物中黄酮含

23、量测定以KBr-HCL的溶液作为电解液，在阳极发生澳的取代反应进行滴定测试，每分子产 丁与2分子澳发生反映，n=4.标准溶液的配置准备好100mL干燥洁净的容量瓶，将配制好的 L PH的（CH） NOH-HPQ缓冲液10mL缓慢导入容量瓶，缓慢加入无水乙醇 10mL再加入一定量的样品溶液，保操作环 境为在室温。测试结果表明：该方法简便、快速、准确，可用于测定微量的样品。红花中黄酮含量测定许多黄酮类化合物一般不带电，但因其具有邻羟基而可以与硼砂复合成带电粒子而 用于高效毛细血管电泳分析，这也是采用电导滴定法测定黄酮含量的依据原理。在含有 黄酮类化合物的溶液中加入硼砂溶液后，由于具有邻羟基的黄酮类

24、化合物与硼砂符合、 带电粒子的产生，可使电中性的黄酮类化合物带电，而使溶液的电导率发生变化。精密称取生药粉末（粒径 0.45mm 50mg加入60%JI 5mL超声提取30min, 400r/min离心5min,取上精液备用；净化时，精密取上述提取液，减压浓缩近干，加入聚酰胺（径粒 0.14mm 50mg拌 合，50c干燥，转入500m咪酰胺的小柱中，以氯仿洗去杂质后，在用甲醇洗涤，直至 洗脱液无黄酮反应为止。合并甲醇洗脱液，减压浓缩近干，加甲醇定容至 1mL摇匀备 用；总黄酮含量的测定：在H型电解池中倾入适量电解液预电解后，精密吸取上述所备 用溶液100uL注入电解池阳极区进行测定。以死停法

25、指示终点，记录电解时间，计算生i * t * M药中总黄酮含量C, C=i t M v。公式中i为电解电流（单位 mA, t为电解时间（单 n* F* W位s）,n为反映电子数，F为法拉第常数，Mv为对照晶相对分子质量（612）, W为注入 电解池样品量（mg o提取条件的选择：由于红花中一些黄酮体化合物对热不稳定，因而采用超声波提取方法提取。净化：净化是为了消除非黄酮化合物的干扰，在测定前先以聚酰胺色谱法除去杂质，并进 行了对照品的柱层析回收率，其回收率为 %油菜花粉浸液中黄酮含量测定大多数的黄酮类化合物一般不带电，但因其具有邻羟基而可以与硼砂复合成带电粒子而用于高效毛细血管电泳分析，这也是

26、采用电导滴定法测定黄酮含量的依据原理。在 含有黄酮类化合物的溶液中加入硼砂溶液后，由于具有邻羟基的黄酮类化合物与硼砂符 合、带电粒子的产生，可使电中性的黄酮类化合物带电，而使溶液的电导率发生变化。 再次条件下，随着体系中硼砂溶液的加入而未达到滴定终点之前，溶液的电导率值不断 增大；当达到滴定终点时，电导率值有突越（明显的增大）。假如看电导率值一硼砂滴定溶液体积作图绘制滴定曲线，在滴定终点一定会出现一个拐点。因此，我们就可以用 电导滴定的方法来间接测定黄酮的总含量了。试剂和仪器的选定产丁（化学对照品）、油菜花（采用洁净的）、硼砂、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠 （试剂为分析纯）；DDSJ-308型电

27、导率仪、681型磁力搅拌器、722光栅分光光度计。产丁标准溶液的制备将产丁对照品减压干燥到恒重，绕后精准的称取恒重的产丁 20mg放置在烧杯中加 入大约50mL乙醇溶液，用微热的火候使它完全溶解，然后等待冷却到室温状态之后导 入100mL容量瓶中，定容得*10-4mol/L的产丁标准的溶液。总黄酮含量的测定精确的称取10Na2B407 10H2O,放置到烧杯中等待溶解后，然后定容到 250mL盛溶液的容瓶量中，得到L的硼砂溶液，再将该硼砂溶液稀释至*10-3 mol/L ;准确称取25mL产丁标准溶液并且准备两份，分别转移到 100mU勺锥形瓶中，在室温下用*10-3mol/L的 硼砂溶液分别

28、进行电导滴定。根据滴定数据来绘制滴定曲线图，从而根据滴定曲线图来 计算出含量。注意事项注意事项1:本实验中产丁对照品溶解速度较慢，用微热来加快产丁的溶解速度， 但在加热过程中加热温度如果太高会导致花粉迸溅，因而加热温度不应该太高注意事项2:由于电导率和温度变化有关。 又由实验表明，温度在15至30 C之间 变化时，电导率基本保持不变。因此我们要选择在室温下进行实验。注意事项3:稀释效应的影响在电导滴定过程中，为了尽可能减小“稀释效应”对电导滴定的影响，硼砂溶液的 浓度应该为产丁溶液浓度的10倍左右为宜。注意事项4:滴定曲线依据电导滴定时消耗硼砂溶液的体积及电导率的变化值，绘制滴定曲线。极谱分析

29、法极谱分析法是在对试液进行电解时，根据极谱仪上得到的电流-电压曲线（极谱图）来确定待测组成分及其含量，是一种特定条件下的电解分析。它的特殊性表现在两个电 极的面积差别很大，即采用一个面积很大的参比电极和一个面积很小的滴汞电极进行电 解。单扫示波极谱法快速测定保健食品中的总黄酮含量黄酮类化合物是很多保健食品中的重要成分，研究快速测定黄铜化合物的分析方法对于该类保健食品的市场质量监控具有重要的意义；为测定保健食品中的总黄酮含量，探讨用单扫示波极谱分析法测定黄酮的快速方法，研究发现2 4 2 4底液中，峰电位Ek（vs SCE处黄酮化合物产生灵敏度的极谱原波，以产丁做对照品，该波的二阶导数电流（ip

30、）与卢丁浓度在至L范围内呈良好直线关系，检出限为 Lo本法操作简便、快速、 准确。用于保健食品中总黄酮含量的测定，结果令人满意。仪器的选定MP-2型溶出分析仪，三电极系统：滴汞电极、甘汞电极和铝电极。产丁标准溶液的配置产丁标准溶液称取110c干燥恒重的产丁对照品0.2g ,加60%加温溶解，冷却并稀释至100mL这种溶液中含产丁 0.2g/L ;用时用水稀释至0.1g/L。磷酸氢二钠溶液 （L）,方法是称取磷酸氢二钠（Na2HPQ 12H2O） 35.8160g,加水溶解后移入 500mL容量瓶中，稳定后，刻度定容。磷酸二氢钾溶液（L）,称取磷酸氢二钠（Na2HPQ） 6.8045g ,加水溶

31、解后移入100mL的容量瓶中，定容至刻度。硝酸盐底液（），吸取L Na?HPQ与KH, PQ溶液混合。实验水为蒸储水或去离子水。操作方法对于实验用到的试液，我们取 2mL于50mLM瓶内，加蒸储水至刻度处。固定或半 固定试样：准确称取至0.5g于100mL容量瓶中，力口入沸腾的蒸储水 50mL置于沸水中 提取30min。取出放冷至室温，加水到达刻度，混合均匀。用干滤纸过滤，收集滤液供 测定。测定方法观察样品试剂中黄酮含量，用微量进样器准确吸取试样提取液至和产丁标准溶液0、1、2、4、4、8、10ug置于10mL容量瓶内，各加水至。然后各加 9mL磷酸盐底液，混 匀，放置20min。将溶液移入到

32、极谱池内，以为起始电位作为阴极化扫描，记录极谱波 的二阶导数峰电流。绘制校正曲线或计算回归方程，试样的峰电流与校正曲线比较或带 入方程求出含量。X=1*100.V1m2* *1000*1000V2X为样品液体中黄酮的总含量，单位为g/100g； m1为测得试样相当于产丁的质量, 单位为ug； m2为样品液体稀释体积，单位是 mL v是测定时试样体积，单位是 mL差示脉冲极谱法测定高良姜中的奥皮素高良姜是一种温中散除寒气、通行气血、停止疼痛 ，它是一种难得重要的温热性中 草药物，高良姜中所包含的黄酮类化合物主要是柳皮素。 能皮素检测与定量方法通常有 分光光度法、荧光法、光度法和色谱法等等，但测定

33、过程和方法都很繁琐。因此，我们 采用差示脉冲极谱法测定高良姜中的奥皮素，测试灵敏度较高、测试方法简单易懂。我 们不需要分离手续样品中的各种液体物质，就可以很方便的在样品的混合液中完成测定 测试结果均良好。仪器的选定F-78型脉冲极谱仪（一般建议选用复旦大学电子仪器厂制造）、三电极系统：滴汞 电极、对电极为玻态石墨电极、参比电极为 Ag-AgCl。标准溶液的配置准备好100mL干燥洁净的容量瓶，将配制好的 L PH的（CH） NOH-PQ缓冲液 10mL缓慢导入容量瓶，缓慢加入无水乙醇10mL再加入一定量的样品溶液，保操作环境为在室温。操作方法缓慢通入纯净氮气，该氮气一定要除去氧气，并且不间断通

34、入氮气持续时间长达 5min。在电压为至区间内，在保持电压灵敏度在 5Mv/s的情况下，尽量保持脉冲电压问 隔为2s,同时保持脉冲振幅为50MV/CR!我们一定要详细记录随着电压值的变化，并且 记录电压值的不同峰值，所对应的柳皮素的浓度关系，作好记录，并保持周围内环境温 度室温。测定方法基于上述的各项条件，我们在保持柳皮素浓度在 *10 5 mol/L至*10 5mol/L范围内, 柳皮素浓度与极谱峰值的大小之间存在着一定的线性关系，但相对误差依然避免不了（相对误差大约保持在十%该值为多次测定的平均值）。我们可以通过观察电压峰值与 电解液（柳皮素样品试液）的浓度来推算出浓度与电压峰值之间的关系

35、。从而更广泛的 推断不同含量的浓度样品所含的柳皮素（主要成分为黄酮含量）。绘制校正曲线或计算回归方程，试验样品的峰电压与校正曲线比较或带入方程求出柳皮素含量。示波极谱法测定银杏叶片中柳皮素的含量银杏叶片中的主要成分是黄酮醇甘和银杏苦内酯，黄酮醇甘经过水解后的产物主要为甘元柳皮素、山蔡素和鼠李素。其中黄酮醇甘是黄酮类化合物具有代表性的一种成分， 这种化合物是含有多种生物活性物质以及强大的药理疗效作用。本次使用的示波极谱法具有分析速度快、灵敏度高、仪器简单和使用方便的优点。仪器与实验药品选定LS-1A型交流示波极谱滴定仪器（一般选用山东电讯七厂），银电极、汞膜电极和恒温磁力加热搅拌器（一般选用常州

36、国华电器有限公司）；对照品（选用上海试剂二厂,生产批号F,生化试剂)，银杏叶片(广西亿康业股份有限公司，生产批号040223,规格含银杏片提取物40mg其中黄酮醇甘片)。L (CrO,标准溶液；L NH,OAcNH 40H (pH )极普缓冲溶液；L NaOAc-HOAc ()。标准溶液的配置对照品溶液：严格准确称取在 60c减压到恒重的对照品(如上所述的)适当质量， 放置在100mL棕色量瓶中，缓慢加入甲醇溶解并定容样品，我们将会得到ml的对照品溶液。供试品溶液：取样品银杏片10片，除去包裹着的糖衣，用干燥的器具研细，放在 容量瓶中，缓慢加入甲醇，使其充分溶解并用漏斗过滤，给滤液中加入25%

37、fc酸50mL放在100摄氏度水中进行水浴和回流，时间上持续一个小时。将样品试液放冷后加入 L NaOAc-HOAc () 30ml,静止放置2h,随后离心(10000r/min ) 10min,将沉淀物取 出放置在100ml棕色容量瓶中，再用甲醇溶解后定容。实验方法量取LNHOAc-NHOH缓冲溶液20ml放置在50ml烧杯中，精密加入供试品液20ml 置于50ml烧杯中，准确精密加入供试品溶液 4ml,缓慢摇匀。在插入电极，将温度控制 在35摄氏度，再将恒温磁力加热搅拌器开启。 然后使用(CrO4标准溶液来滴定样品溶液，直至CrO42-示波极谱图上切口刚好出现，那么就确认为滴定终点。然后准

38、确读出滴 定液体消耗的体积V (ml),按照计算黄酮醇甘公式(m: m=2*C*V*M,其中公式中的3M为黄酮醇昔的相对分子质量()0实验中注意事项样品在使用前溶液的pH如果大于或pH小于时，示波极谱图将发生变形，比如切口 变化迟钝。经过大量反复测试实验发现，以 LNH,OAcNH 40H (pH )作为缓冲底液， 可以很好的避免上述现象。在做该实验时，温度的控制同样重要，当在室温下反应时发现速度较慢，测试结果 发现会偏低；当温度超过 40摄氏度时，我们可以看到黄酮醇甘将会被氧化，样品成分 减少，从而会引起不必要的误差；经过大量实验反复测试发现，当温度在30至40摄氏 度时，可以起到催化剂的效

39、果，将加速实验进程，且不不会给实验带来任何不必要的误 差。高效毛细管电泳法高效毛细管电泳法，它是一种离子域和带电离子在电场的电场力驱动下，在毛细血 管中按淌度和分配系数不同而进行分离的技术。被分离组通过在线检测方式进行检测。 高效毛细管电泳法具有高效快速、分辨率高、检测方便、进样量少、分离模式多的许多 优点，因此高效毛细管在生命科学、生物技术、药物和环境科学等领域有着更广泛的应 用。毛细管电泳按照电泳迁移技术的不同可以分为：毛细管区带电泳、胶束电动毛细管 色谱、毛细管等速电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等电聚焦五种类型。其中，毛细管区 带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等速电泳和毛细管等电聚焦的分析对

40、象一般是可解离 的物质或带电的物质，而胶束电动毛细管色谱除了可以分析上述的物质以外，它还可以 分析中性分子，并适用于各类物质的分析。通常在黄酮类化合物的分析中，我们一般比 较常使用的是毛细管区带电泳和胶束电动毛细管色谱，但是，毛细管等速电泳在通常的 测定中很少使用。毛细管区带电泳对样品的分离是由于各个分组的淌浓度不同，从而产生一系列的区带。它相当于色谱法中的洗脱色谱。每个区带中的四淌度相同的离子，但有可能是不同 的物质。溶液中的淌度Q/Ma成正比（其中Q是离子的电荷，M是它的相对分子质量，指 数a不是一个定数，与离子形状相关）。毛细管电泳法分析密蒙花中橙皮素、木犀草素和芹菜素密蒙花是马钱科植物

41、密蒙花的干燥花蕾和花序， 其具有清热养肝、明目退翳的作用, 可以用于赤月中痛、多泪目明、眼生懿膜、肝虚目暗、视物昏花等症状，含有包括木犀草 素和芹菜素在内的多种黄酮类化合物。由于其重要的生理作用和药理作用，中草药中黄 酮类化合物的分析是一个非常活跃的研究领域。高效毛细管电泳法具有快速、高效、低 消耗、毛细管柱寿命长、容易清洗等优点，已经被广泛用于中草药成分分析。本次实验 通过系统研究缓冲溶液浓度和酸度、分离电压和进样时间、B-CD对分离的影响建立了一种毛细管电泳法测定密蒙花中橙皮素、木犀草素和芹菜素的方法。仪器和试剂1229型高效毛细管电泳仪器（一般选用北京新技术研究所研发的） 配有固定波长紫

42、 外外检测器；检测波长214nm未涂层弹性石英毛细管柱（55cm*50（i m有效长度42cm, 河北永年光导纤维厂）,使用工作电压14kV,静压力进样（高度10cm时间8s）;背景 电解质为的50mmol/L硼砂缓冲溶液（用L HAcL NaOH溶液调pH）,使用前超生脱气 10min。橙皮素、木犀草素、芹菜素密蒙花，其它试剂均为分析纯，水为二次石英蒸储 水。样品处理将整理好的密蒙花样品放在 60摄氏度的烘箱中，直接烘烤4h,将烘烤后的样品取 出来，然后用粉碎器粉碎，用半径为 74um的筛子进行筛选和过滤。再将筛选后的粉末 整理静置，然后称取3g样品粉末，放入容量瓶中，加入 50ml甲醇在7

43、5摄氏度的水中 进行水浴回流，时间持续5h0将回流的物质冷却后再将残渣过滤，过滤后的残留物，再 用10ml甲醇清洗2次。再将提取物和清洗液合并，在真空状态下，浓缩至大约至10ml, 再将其装入25ml容量瓶中，然后加水稀释至标准刻度。试验方法此次实验中是基于分析样品物的分辨率、峰形、柱效以及和样品中其它成分的分离情况来优化分离条件，分别对缓冲溶液酸度和浓度、工作电压、进样时间和B-CD的影响进行了研究。缓冲溶液pH及其浓度的影响分别在pH8至pH10和20至60mmol/L浓度范围内研究了缓冲溶液 pH和浓度对分离 的影响。实验中我们通过调节pH和缓冲溶液的浓度，随着时间的变化我们可以观察到， 木犀草和芹菜素的分离度在pH8到范围内随着pH的不断增加，分离度在不断降低，当 降低至一定程度时，然后又逐渐慢慢提高。通过大量的实验表明pH小于时实际样品中橙皮素不能与其相邻的峰分开，pH大于或等于时，并且在此时缓冲溶液的浓度大于或等 于50mmol/L时标准和实际样品中3种物质都能实现良好的分离，但是当 pH大于时，在 实际中样品中的木犀草素的峰高会有所降低。我们在做分离物质时考虑到增加缓冲溶液浓度会增加分析时间和焦耳热效应，我们一般会选择pH为，并且溶液的浓度为50mmol/L 的硼砂缓冲溶液。工作电压和进样时间的影响当工作电压在10KV到18KV的范围内变化时来观察和研究工作电