生物《基因工程的基本操作程序》

1、 基因工程(jyn gngchng)的基本操作程序共二十八页思考(sko):转基因抗虫棉的大致培育过程? 基因工程(jyn gngchng)的基本操作程序一、目的基因的获取二、基因表达载体的构建三、将目的基因导入受体细胞四、目的基因的检测与鉴定共二十八页一、目的基因(jyn)的获取主要是编码(bin m)蛋白质的结构基因现代获取方法：1、从基因文库中获取目的基因2、利用PCR技术扩增目的基因3、化学方法人工合成初始目的基因的来源从生物中直接获取人工合成共二十八页外显子内含子与RNA聚合酶结合位点编码区非编码区非编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点编码区原核生物(shngw)基因真核生物

2、(shngw)基因共二十八页1、从基因文库中获取目的(md)基因 将含有某种生物不同(b tn)基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同(b tn)基因，称为基因文库。基因文库 基因组文库部分基因文库(CDNA文库)共二十八页某生物体内全部(qunb)DNA 许多(xdu)DNA片段受体菌群体1、从基因文库中获取目的基因限制酶与运载体连接 导入基因组文库某种生物某个时期的mRNAcDNA反转录受体菌群体与运载体连接 导入部分基因文库（cDNA文库）共二十八页2、利用PCR技术扩增目的(md)基因 聚合酶链式反应，在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。可

3、以获得大量(dling)的目的基因。共二十八页循环(xnhun)变性退火延伸共二十八页缓冲液需要(xyo)为PCR反应提供的物质DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，热稳定DNA聚合酶，存在(cnzi)于缓冲液中，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。Taq DNA聚合酶的应用高温解决了打开双链的问题，但又导致DNA聚合酶失活的问题，耐高温的Taq DNA聚合酶解决了高温导致DNA聚合酶失活，促成了PCR技术的自动化。共二十八页 PCR的反应(fnyng)过程1、PCR的反应(fnyng)步骤PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为三个基本步骤变性、复性和延伸

4、变性（模板DNA解旋）模板DNA经加热至900C以上。一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解链，使成为单链，以便于它与引物结合，为下轮反应作准备。2、循环过程共二十八页靶序列靶序列PCR 循环第一步：高温(gown)变性共二十八页复性（退火(tu hu)） 低温复性模板DNA经加热变性成单链后，温度(wnd)降低，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。共二十八页延伸(ynshn) 中温延伸DNA模板引物结合物在Taq DNA聚合酶的作用下以脱氧核苷酸为原料，以母链为模板，按碱基互补配对的原则(yunz)与半保留复制的原理，合成一条新的DNA链。共二十八页靶序列靶序列引物

5、引物53553533Taq DNA聚合酶PCR 循环第三步 ：引物延伸共二十八页循环次数DNA数量122438201,048,576301,073,741,8243、30次循环后靶序列(xli)扩增的数量共二十八页二.基因表达载体(zit)的构建-核心共二十八页基因(jyn)表达载体的构建过程质粒DNA分子(fnz)限制酶处理两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种一个切口两个黏性末端共二十八页复制原点+启动子+目的(md)基因+终止子+标记基因基因表达载体(zit)的组成共二十八页三、将目的(md)基因导入受体细胞转化常用(chn yn)的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草

6、杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。将目的基因导入受体细胞的原理借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。共二十八页三、将目的(md)基因导入受体细胞1.将目的(md)基因导入植物细胞-农杆菌转化法转化农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法共二十八页三、将目的(md)基因导入受体细胞1.将目的(md)基因导入植物细胞转化农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法2.将目的基因导入动物细胞显微注射技术提纯基因表达载体体外显微注射入受精卵受精卵移植共二十八页三、将目的(md)基因导入受体细胞1.将目的基因导入植物(zhw)细胞转化农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法2.将目的基因导入动物细胞显微注射技术3.将目的基因导入微生

7、物细胞Ca2+处理共二十八页四、目的(md)基因的检测与鉴定检测(jin c)鉴定检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因检测目的基因是否转录出了mRNA检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等DNA分子杂交DNA-RNA分子杂交法分子杂交（注意与上不同之处）抗原抗体杂交共二十八页基因工程(jyn gngchng)的基本操作程序目的基因(jyn)的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定1、从基因文库中获取目的基因2、利用PCR技术扩增目的基因3、化学方法人工合成复制原点 + 目的基因 + 启动子 + 终止子 + 标记基因农杆菌转化法、基因枪

8、法、花粉管通道法、显微注射法、Ca2+处理法DNA分子杂交技术、分子杂交技术、抗原抗体杂交技术分子检测外的个体水平鉴定共二十八页巩固(gngg)练习:1.人们常选用的细菌质粒分子往往带有一个抗生素抗性基因,该抗性基因的主要作用是 ( )A.提高受体细胞在自然环境中的耐药性B.有利于对目的基因是否导入进行检测C.增加质粒分子的分子量D.便于与外源基因连接2.在遗传工程技术中,限制性内切酶主要用于 ( )A.目的基因的提取和导入B.目的基因的提取和检测C.目的基因与载体的结合和导入D.目的基因的提取与载体结合BD共二十八页3.在遗传工程技术(jsh)中,下列何种目的基因一般以直接分离的方法获得 (

9、 )A.人的胰岛素基因 B.蚕的蚕丝蛋白基因C.芽孢杆菌的抗虫基因 D.菜豆储藏蛋白基因4.1976年,美国的科学家首次将人的生长抑制素释放因子的基因转移到大肠杆菌,并获得了表达,此文中的表达是指该基因在大肠杆菌 ( )A.能进行DNA复制B.能传递给细菌后代C.能合成生长抑制素释放因子D.能合成人的生长素CC共二十八页5.基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的,在基因操作的基本步骤中,不进行减基互补配对的步骤是 ( )A.人工合成目的基因B.目的基因与载体结合(jih)C.将目的基因导入受体细胞D.目的基因的检测和表达C共二十八页内容摘要基因工程的基本操作程序。将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。与运载体连接 导入。DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，热稳定DNA聚合酶，存在于缓冲液中，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。PCR一般经历三十多次循