生物药物分析

1、生物药物分析概论药物、药品现代药、传统药中药、天然药物生物技术药物化学合成药物药物分析生物药物分析1药物：能够预防、治疗、诊断人的疾病的物质。2药品的定义是“用于预防、治疗、诊断人的疾病，有目的地调节人的生理机能并规定有适应症或者功能主治、用法和用量的物质，包括中药材、中药饮片、中成药。化学原料药及其制剂、抗生素、生化药品、放射性药品、血清、疫苗、血液制品和诊断药品等。” 中华人民共和国药品管理法（自2001年12月1日起施行）十章第一百零二条3药物分类:传统药药品分类:生物药物化学药物现代药中药、天然药物生物制品化学药品4“现代药”一般是指通过化学合成、生物发酵、分离提取以及生物或者基因工程

2、等现代科学技术手段获得的药品。 “传统药”是指按照传统医学理论指导用于预防和治疗疾病的物质。其主要来源为天然药物及其加工品，包括植物药、动物药、矿物药及部分化学、生物发酵制品。 药品管理法第一章总则第三条 国家发展现代药和传统药，充分发挥其在预防、医疗和保健中的作用。 5药品注册管理办法经国家食品药品监督管理局局务会审议通过，现予公布，自2005年5月1日起施行 。修订后于2007年6月18日经国家食品药品监督管理局局务会审议通过，自2007年10月1日起施行。 6附件一：中药、天然药物注册分类及 申报资料要求中药是指在我国传统医药理论指导下使用的药用物质及其制剂。 天然药物是指在现代医药理论

3、指导下使用的天然药用物质及其制剂。1、未在国内上市销售的从植物、动物、矿物等物质中提取的有效成分及其制剂。2、新发现的药材及其制剂。3、新的中药材代用品。7 4、药材新的药用部位及其制剂。5、未在国内上市销售的从植物、动物、矿物等物质中提取的有效部位及其制剂。6、未在国内上市销售的中药、天然药物复方制剂。7、改变国内已上市销售中药、天然药物给药途径的制剂。8、改变国内已上市销售中药、天然药物剂型的制剂。9、已有国家标准的中药、天然药物。8附件二：化学药品注册分类及申报资料要求 1、未在国内外上市销售的药品：（1）通过合成或者半合成的方法制得的原料药及其制剂；（2）天然物质中提取或者通过发酵提取

4、的新的有效单体及其制剂；（3）用拆分或者合成等方法制得的已知药物中的光学异构体及其制剂；（4）由已上市销售的多组份药物制备为较少组份的药物；9 （5）新的复方制剂；（6）已在国内上市销售的制剂增加国内外均未批准的新适应症。2、改变给药途径且尚未在国内外上市销售的制剂。3、已在国外上市销售但尚未在国内上市销售的药品：（1）已在国外上市销售的制剂及其原料药，和/或改变该制剂的剂型，但不改变给药途径的制剂；（2）已在国外上市销售的复方制剂，和/或改变该制剂的剂型，但不改变给药途径的制剂；10 （3）改变给药途径并已在国外上市销售的制剂；（4）国内上市销售的制剂增加已在国外批准的新适应症 。4、改变已

5、上市销售盐类药物的酸根、碱基（或者金属元素），但不改变其药理作用的原料药及其制剂。5、改变国内已上市销售药品的剂型，但不改变给药途径的制剂。 6、已有国家药品标准的原料药或者制剂。11 附件三：生物制品注册分类及申报资料要求 1、未在国内外上市销售的生物制品。2、单克隆抗体。3、基因治疗、体细胞治疗及其制品。4、变态反应原制品。5、由人的、动物的组织或者体液提取的，或者通过发酵制备的具有生物活性的多组份制品。6、由已上市销售生物制品组成新的复方制品。7、已在国外上市销售但尚未在国内上市销售的生物制品。12 8、含未经批准菌种制备的微生态制品。9、与已上市销售制品结构不完全相同且国内外均未上市销

6、售的制品（包括氨基酸位点突变、缺失，因表达系统不同而产生、消除或者改变翻译后修饰，对产物进行化学修饰等）。10、与已上市销售制品制备方法不同的制品（例如采用不同表达体系、宿主细胞等）。11、首次采用DNA重组技术制备的制品（例如以重组技术替代合成技术、生物组织提取或者发酵技术等）。13 12、国内外尚未上市销售的由非注射途径改为注射途径给药，或者由局部用药改为全身给药的制品。13、改变已上市销售制品的剂型但不改变给药途径的生物制品。14、改变给药途径的生物制品（不包括上述12项）。15、已有国家药品标准的生物制品。14生物药物是运用生物学、医学、生物化学等的研究成果，从生物体、生物组织、细胞、

7、体液等综合利用物理学、化学、生物化学、生物技术和药学等学科的原理和方法制造的一类用于预防、治疗、诊断人类疾病的制品。15生物药物的概述一、生物药物及其分类1、生物药物是利用生物体，生物组织或组成生物体的各种成分，综合利用多门学科的原理和方法，特别是利用现代生物技术，进行加工，制造而形成的一类用于预防，治疗，诊断的药物。16广义的生物药物包括：从动植物和微生物中直接制取的各种天然生理活性物质。人工合成或半合成的天然类似物2、生物药物的研制发展过程173、生物药物分类按其来源和生产方法大致分为三类a) 生化药物b) 生物技术药物c) 生物制品18按生物药物的化学本质和化学特性来分类（1）氨基酸及其

8、衍生物药物（2）有机酸，醇酮类（4）酶及其调节剂（3）维生素a) 消化酶类b)消炎酶类c) 心脑血管疾病治疗酶类d) 抗肿瘤类e) 氧化还原酶类19(5) 脂类药物（6）多肽和蛋白质类（7）核酸类及其降解物和衍生物（8）糖类（9）生物技术药物类（10）生物制品类20 按生物药物的用途分类（1）治疗药物（2）预防药物（3）诊断药物（4）用作其他生物医药用品二、生物药物的性质21（1）在化学构成上，生物药物十分接近于人体内的正常生理性质，进入人体后也更容易为机体所吸收利用和参与人体的正常代谢与调节。（2）在药理上，生物药物具有更高的生化机制合理性和特异诊疗有效性。（3）在医疗上，生物药物具有药理活

9、性高，针对性强，毒性低，副作用小，疗效可靠及营养价值高等特点。22（5）生物药物常常是一些生物大分子，它们不仅相对分子质量大，组成结构复杂，且具有严格的空间构象，以维持其特定的生理功能。（6）生物药物对热，酸，碱，重金属及PH变化都比较敏感，各种理化因素的变化易对生物活性产生影响。（4）生物药物的有效成分在生物材料中浓度很低，杂质的含量相对比较高。23（4）效价测定（5）生化法确证结构三、生物药物的分析特点：（1）相对分子量的测定（2）生物活性的检查（3）安全性的检查24生物制品：是以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成，用于人类疾病的预防、治疗、诊断，包

10、括疫苗、抗血清、血液制品、细胞因子、生长因子、抗原、单克隆抗体、变态反应原的活性制剂。25生物技术药物：采用DNA重组技术或其他新生物技术生产的治疗和预防药物。 重组DNA药物（基因药物） 重组蛋白质药物（基因工程药物）26药物分析：是运用化学、物理化学或生物化学的方法和技术研究化学结构已经明确的合成药物或天然药物及其制剂的质量控制方法，也研究有代表性的中药制剂和生化药物及其制剂的质量控制方法。是一门研究药品质量控制的方法学科。27 药物分析的任务1. 基本任务（1）药物成品的化学检验工作（2）药物生产过程的质量控制（3）药物贮存过程的质量考察（4）临床药物分析工作 282. 药物分析学科还应

11、为相关学科的研究开发提供必要的配合和服务。（1）体内药物分析（2）药物分子与受体的相互作用29第一章 绪论第一节 药物分析的性质和任务第二节 药品质量标准与药典第三节 药品检验工作的基本程序第四节 全面控制药品质量的科学管理药物分析学目录30第二章 药物的杂质检查第一节 药物的杂质及其来源 一、药物的纯度指药物纯净程度，反映了药物质量的优劣，含有杂质是影响药物纯度的主要因素。 二、药物中杂质的来源三、杂质的分类31第二节 药物的杂质检查法第三节 一般杂质检查第三章 定量分析样品前处理与测定方法的效能指标第一节 定量分析样品的前处理方法第二节 药品质量标准分析方法验证32第四章 巴比妥类药物分析

12、第五章 芳酸类药物分析第六章 胺类药物分析第七章 杂环类药物分析第八章 生物碱类药物分析第九章 维生素类药物分析第十章 甾体激素类药物分析33第十一章 抗生素类药物分析第十二章 药物制剂分析第十三章 中药制剂分析第十四章 药品质量标准制定34生物药物分析是运用现代生物技术或方法研究、结构已经明确的生物药物及其制剂质量控制方法的学科。生物药物分析:药物体内研究和临床应用期间，测定药物在生物样品中的含量的，目的是为了药物临床应用的安全性和有效性。是一门研究药品质量控制的方法学科。35生物药物分析第一章 绪 论第二章 生物药物质量标准的制定第三章 药物分析方法的选择、建立与认证第四章 生物药物分析技

13、术各论第五章 各类生物药物分析检验36药物分析与生物药物分析的关系 生物药物分析是药物分析的一个分支。药物分析研究小分子之间的反应较多。特点：A 比较快的反应B 比较简单的体系C 化学键的断裂，组合或重排 研究对象不同 D 在反应体系中做布朗运动无序碰撞而反应37生物药物分析研究大分子与大分子或着大分子与小分子之间反应。生物药物与化学药物的区别 a) 在结构上大分子药物、化学结构不明确、分子量不是定值。b) 在检查项目上热源检查过敏实验异常毒性实验38c) 在分析方法上化学药物测定方法：重量法，滴定法，比色法，HPLC生物药物测定法： HPLC，电泳法，酶法，免疫法，生物检定法39生物药物分析

14、 白秀峰主编 生物药物分析与检验 杨汝德 编著生物药物分析与检验朱德艳等编著 生物药物分析-应用于新药体内研究和 治疗药物监测的理论与技术 药物分析 刘文英主编 生物技术药物研究开发和质量控制 王军志主编，科学出版社出版40药物分析绪论 一、药物分析的性质、任务及地位药物分析：是运用化学、物理化学或生物化学的方法和技术研究化学结构已经明确的合成药物或天然药物及其制剂的质量控制方法，也研究有代表性的中药制剂和生化药物及其制剂的质量控制方法。是一门研究药品质量控制的方法学科。药物分析学是一门研究药品及其制剂的组成、理化性质、真伪鉴别、纯度检查及其有效成分的含量测定等内容的一门学科。41药物分析学是

15、整个药学科学领域中一个重要的组成部分。目的是为了保证人民用药安全、合理、有效；提高药品质量；促进药品生产发展的正常化、规范化；为合理使用国家资源作出应有的贡献。42药物分析在药学学科中的地位药学四大主干课程: 药物化学、药理学、药剂学、药物分析学。植物化学合成微生物动物合化物药剂学药效药理学毒理临床试验药物化学43药物分析 药物的质量直接关系到人民的健康和生命的安全，为了全面控制药品质量，保证用药安全、合理、有效，在药品的生产、供应、贮藏、调配以及临床使用过程中都必须经过严格的分析检验。必须运用各种有效的方法（包括物理学、化学、物理化学、生物化学及微生物学等方法），在各个环节，人人重视，层层把

16、关，依靠科学管理的理论、程序和方法，全面地保证、控制药品的质量。44药物分析药品质量的全面控制是一项涉及多方面、多科学的综合性工作。他既要与生产单位紧密配合，积极控制药物生产过程的质量，从而发现问题、促进生产、提高质量；又要与供应管理部门密切协作，注意考察药物贮存过程的质量，以便进一步研究、改进药物的稳定性，采取科学合理的管理条件与方法，以保证和提高药物的质量。这不是某一个单位、某一部门的问题，他所涉及的整个内容与问题也不是某一学科可以单独完成的，药物分析只是其中的一个重要方面。45药物分析的基本任务主要有两方面： 一是运用化学、物理化学或其他有关化学的方法和技术来研究化学结构已经明确的合成药

17、物及其制剂的质量问题，其中至少包括： 药物成品的检验工作； 药物生产过程的质量控制（半成品、工艺要点）； 药物贮存过程的质量考察； 新药的研制（药品质量标准建立与修订、药品稳定性研究、药代动力学研究、生物利用度研究）46 二是临床药物分析工作（体内药物分析），其中包括： 运用适当的分离分析方法，测定药物制剂的生物利用度以及动力学数据； 研究药物的作用特性和机制； 分析药物进入体内，吸收、分布、代谢、消除等动力学过程。47药物分析除了研究有关药物质量控制之外，药物分析学科还应为相关学科的研究开发提供必要的配合和服务。48药物分析二、判断药品质量的依据、内容和意义 因为药品不同于一般产品，是用于防

18、病、治病、诊断疾病改善体质、增强机体抵抗力的物质，所以必须对药品质量进行全面地控制。为确保药品本身的质量，应该遵行国家规定的药品质量标准（国家药典、部颁标准、地方标准）进行药品检验和质量控制工作。为此，国家设有专门负责药品检验的法定机构（中国药品生物制品检定所以及省、市、县各级药品检验所）。49药物分析 随着药学科学事业的进步和发展，我国的药品质量和药品标准工作也在不断地提高。应该说：药品标准（特别是国家药典）既是组织生产、提高质量的手段，又是科学管理和技术监督的组成部分，也是联系科研、生产、供应和检验的技术纽带。 50 药品质量标准与药典 一、药品质量标准药品质量标准是国家对药品质量、规格及

19、检验方法所作的技术规定，是药品生产、供应、使用、检验和药政管理部门共同遵循的法定依据。 1. 组织生产提高质量的手段； 2. 科学管理和技术监督的组成部分； 3. 联系科研、生产、供应、使用和检验的技术纽带。 51 药品质量标准体系中国药典企业标准国家标准使用非成熟(非法定)方法标准规格高于法定标准药品标准临床研究用标准(临床研究) 暂行标准(试生产)试行标准(正式生产初期)地方标准整理提高后的品种部颁标准 （疗效确切、广泛应用、质量可控）52 我国制定药品质量标准的指导思想：中药标准立足于特色，西药标准立足于赶超,生物制品基本保持一致。 我国现行药品质量标准 1. 中华人民共和国药典，简称中

20、国药典 2. 中华人民共和国卫生部药品标准，简称部颁标准 53药品管理法中第三十二条规定“药品必须符合国家药品标准”。明确取消了地方药品标准。从2001年12月1日起至2002年11月30日，国家药品监督管理局对药品管理法修订前按照当时实行的地方药品标准批准生产的药品品种，逐个进行审查，经审查，对符合中华人民共和国药品管理法有关规定的，纳入国家药品标准，可以继续生产；对不符合规定的，立即停止该品种的生产并撤销其批准文号。54药品管理法第十二条 药品生产企业必须对其生产的药品进行质量检验；不符合国家药品标准或者不按照省、自治区、直辖市人民政府药品监督管理部门制定的中药饮片炮制的，不得出厂。55二

21、、中国药典（一）中国药典的沿革建国以来，先后出版了八版药典，1953、1963、1977、1985、1990、1995、2000和2005年版药典，现行使用的是中国药典（2005年版）。其英文名称是 Chinese Pharmacopiea，缩写为ChP（2005）。56 药典是一个国家关于药品标准的法典，是国家管理药品生产与质量的依据。具有与其他法令一样的约束力。凡属药典收载的药品，其质量不符合规定标准的均不得出厂、不得销售、不得使用。药典在一定程度上反映一个国家的医药水平。中国药典质量标准所涉及的分析方法根据生产工艺、检验条件和水平及综合国力等多因素来选择、建立。 方法学上要求具有普遍适用

22、性。 57中国药典（2005年版）分为一、二、三叁部。另专门出版了药品红外光谱集。 （二）中国药典的基本结构和内容 药典的内容一般分为凡例、正文、附录和索引四部分。58 1. 凡例（General Notices）是制定和执行药典必须了解和遵循的法则，解释和说明中国药典概念,正确进行质量检验提供指导原则。将正文、附录及质量检定有关的共性问题以及采用的计量单位、符号与专门术语等加以规定,避免全书中重复说明。其内容同样具有法定约束力。 59 凡 例1.名称及编排中文药名:中国药品通用名称英文药名:国际非专利药品(INN)命名原则有机药物化学名:有机化学命名原则60 凡 例2.检验方法和限度按规定检

23、验方法进行检验。 标准中规定的各种限度数值的规定,最后一位为有效数字,计算时可多保留一位。61凡 例3.标准品 对照品(1) 标准品 指用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质,按效价单位（或g）计,以国际标准品进行标定。 (2)对照品 指在用于检测时,除另有规定外,均按干燥品（或无水物）进行计算后使用的标准物质。 用于药物含量测定、纯度检查和鉴别试验。.62 4.称取样品的要求 试验中的供试品与试液等“称重”或“量取”的量均以阿拉伯数码表示,其精确度可根据数据值的有效数位来确定。(1)“称取”或“量取”的精密度凡 例63 称取“0.1g”,系指称取重量可为0.06-0.14g

24、称取“2g”,系指称取重量可为1.5-2.5g称取“2.0g”,系指称取重量可为1.95-2.05g称取“2.00g”,指称取重量可为1.995-2.005g凡 例64规定“精密称定”时,系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。规定“称定”时,系指称取重量应准确至所取重量的百分之一。规定精密量取时,系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精密度要求. 凡 例65规定“量取”时,系指可用量筒或按照量取体积的有效数位选用量具.取用量为“约”若干时,系指取用量不得超过规定量的10. 凡 例66 5.温度 温度以摄氏度（）表示： 水浴温度 98100 热水 7080 微温或温水 4050

25、室温 1030 冷水 210 冰浴 0 放冷 系指放冷至室温凡 例672. 正文（Monographys） 是药典的主要内容，为所收载药品或制剂的质量标准，主要内容：名称、性状、物理常数、鉴别、检查和含量测定等。 683. 附录（Appendix） 附录部分记载了制剂通则、检查及测定方法、一般鉴别试验、有关物理常数测定法、试剂配制法以及色谱法、光谱法等内容。 4. 索引（Index） 中文索引（汉语拼音索引）和英文名称索引。 69三、国外药典 进出口药品检验、仿制国外药品检验、赶超国际水平时，可供参考的国外药典有：1美国药典与美国国家处方集 美国药典 The United States Pha

26、rmacopoeia，缩写USP，目前为31版，即USP（31） 美国国家处方集 The National Formulary，缩写NF，目前为26版，即NF（26） 70 二者合并为一册，缩写为 USP（31）NF（26） 2英国药典 British Pharmacopoeia，缩写BP，目前为2008 年版，即BP（2008） 3日本药局方 缩写JP，目前为15 版，即JP（15） 71 4欧洲药典 European Pharmacopoeia，缩写Ph.Eup，目前为第六版。欧洲药典对其成员国，与本国药典具有同样约束力，并且互为补充。 5国际药典 The International Ph

27、armacopoeia，缩写Ph.Int，目前为第三版，由世界卫生组织（WHO）颁布。72药物分析三、药物分析方法的发展趋势 药学科学事业的迅猛发展，各相关学科对药物分析学科提出了很多新的要求。如：药剂学的剂型研究已经由一般的片剂或注射剂向着微囊制剂、控释制剂和靶向制剂等方向发展，对于这些制剂都必须运用适当的分析方法进行药物代谢动力学研究以及制定相应的质量标准。73药物分析 现代药物化学为了研究的化学结构与生物活性之间的关系，为了深入揭示药物分子与作用受体之间的关系，从而进行分子设计、化学修饰和定向合成以及生产工艺流程的优化和工艺过程的质量控制，当然也离不开现代药物分析手段的辅助。 74为了研

28、究确定天然产物或中药的活性成分的化学结构，必须采用多种结构分析方法并进行综合的波谱解析，对于一些中成药质量的综合评价更需要运用各种可能的先进分离分析技术，才有可能打破目前往往难以全面评价的局面，至于，有关药物进入体内后的“命运”、药物及其代谢产物的分离分析以及相应药理学的研究也绝然不能离开现代分离、分析方法。 75药物分析 综上所述，摆在药物分析学科和药物分析工作者面前的迫切任务，不再仅仅是静态的常规检验 ，而要深入到生物体内、代谢过程、工艺流程、反应历程和综合评价上进行动态地分析监控。因而，在方法上应该朝着更加准确、灵敏、快速、多种方法联用以及连续化、自动化、最优化、智能化方向发展。76药物

29、分析新技术色谱分析法 高效毛细管电泳(HPCE) 气相色谱(GC) 液相色谱(HPLC) 液相色谱(HPLC) 光谱分析法 计算分光光度法 傅立叶变换-红外分光光度法 电感耦合等离子体原子发射光谱77联用技术 气相色谱质谱(GC-MS) 液相色谱质谱(HPLC-MS) 液相色谱核磁共振(HPLC-NMR) 78药物分析四、药物分析的基础知识（一）药品检验基本程序一般原则：药品检验工作是一项与人民健康有密切关系的工作，因此为保证药品检验工作的公正与客观，从业人员应具备：79药物分析1、高度的责任感；2、严谨的科学态度；3、细心、耐心和专心；4、熟练、正确的操作技能及良好的科学作风。80性状鉴别检

30、查含量测定检验报告 工 作 程 序取样81 取样科学性、真实性、代表性 1 取 样均匀性合理性取样原则 根据药物性质、不同剂型,采用不同的取样方法及不同的取样量。82 1 取 样 先进行外观检查包括：品名、剂型、批号、保质期及包装情况等.取样程序83 1 取 样 制剂分析片剂、胶囊剂（非均匀制剂） 每批至少1020 片注射剂（均匀制剂） 一般35支（测定次）一般情况下，样品数量应为一次检验用量的三倍。 84 1 取 样固体原料药当n 3时，每件取样；当n 300 时,按 + 1当n 300时,按 /2 + 185取样量 设样品总件数为x当x 300时， 当x300时， 当x 3时，每件取样86

31、2 性 状性状分析记述药品的外观、臭、味和一般的稳定性情况，溶解度以及物理常数等。 1.外观、臭、味和稳定性； 2.溶解度；87 2 性 状 3.物理常数 物理常数包括相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、吸收系数、碘值、皂化值和酸值等；测定结果不仅对药品具有鉴别意义，也反映药品的纯度，是评价药品质量的主要指标之一。构成法定药品质量标准，测定方法收载于药典附录。883 鉴 别 依据药物的化学结构和理化性质，采用化学法、物理法及生物学方法进行某些特殊反应，或测试某些物理常数或光谱特征及,判断已知药物及其制剂的真伪；采用一组（二个或几个）试验项目全面评价一个药物。893 鉴 别 专属性

32、强 再现性好 灵敏度高 简便快速鉴别方法要求90 化学反应法 色谱鉴别法 光谱鉴别法3 鉴 别91化学鉴别法(1)呈色反应鉴别法(2)沉淀生成反应鉴别法(3)荧光反应鉴别法(4)气体生成鉴别法92 1 紫外光谱鉴别法测定最大吸收波长,或同时测定最小吸收波长.乙胺嘧啶 供试品在0.1mol/L盐酸介质中的紫外吸收在272nm处为峰,216nm处为谷.光谱鉴别法93 光谱鉴别法 规定吸收波长和吸收度比值法 两性霉素在362nm、381nm、405nm波长处有最大吸收，规定362nm与381nm处吸收度比值不大于0.6、 381nm与405nm波长比值不大于0.9.94 光谱鉴别法 己稀雌酚注射液用

33、供试品溶液250450nm波长吸收光谱与对照品是否一致鉴别。 与对照品比较,对比吸收光谱 的一致性95 经化学处理后,测定其反应产物的吸收光谱特性。 规定一定浓度供试品在最大吸收 波长处的吸收度。光谱鉴别法96 2 红外光谱法光谱鉴别法中国药典采用标准图谱对照法BP 采用标准图谱对照法、对照品法USP 采用对照品法JP 规定条件下测定一定波长处特征吸收峰。97色谱谱鉴别法适用于复杂环境下药物有效成分及杂质鉴别,具有分离、分析同时进行的特点。3 色谱法（ HPLC GC TLC)98色谱谱鉴别法（1）高效液相色谱法(HPLC) 供试品和对照品色谱峰保留时间一致.（2）气相色谱法 (GC) 同HP

34、LC要求99色谱谱鉴别法 （3）薄层扫描法(TLC)对照品比较法 供试品斑点与对照品的Rf值及斑点的颜色应一致。100 化学法和仪器法相结合,每种药 品一般选用24种方法进行鉴 别试验,相互取长补短。色谱谱鉴别法 方法要有一定的专属性、灵敏 性、且便于推广。 尽可能采用药典中收载的方法。101 酶法 电泳法 生物法3 鉴 别1024 杂 质 检 查检查：包括有效性、均一性、纯度要求及安全性四个方面。纯度要求即药物的杂质检查，亦称限度检查、纯度检查。药物在不影响疗效及人体健康的原则下,可以允许生产过程和贮藏期间引入的微量杂质的存在. 检查是判断药品纯度是否符合限量规定的要求。1035 安全性检查

35、 生物药物应保证符合无毒、无菌、无热源、无致敏源和降压物质等一般安全性要求。104 （1）异常毒性试验：用一定剂量的药物按指定的操作方法和给药途径给予规定体重的某种试验动物，观察其毒性反应。反应的判断以试验动物的死亡与否为终点。5 安全性检查1055 安全性检查（2）无菌检查：是检查药品及敷料是否染有活菌的一种方法，是药典中比较重要的检查项目之一。1065 安全性检查（3）热源检查：本法是将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内（家兔法），以其体温升高的程度，判定该供试品中所含热源是否符合规定，是一种限度试验法1075 安全性检查（4）过敏试验：是检查异性蛋白的实验。药物中若夹杂有异性蛋白，在临床

36、使用时易引起病人的多种过敏反应。1085 安全性检查（5）降压物质检查：降压物质是指某些药物中可能含有的能导致血压降低的物质。中国药典采用猫（或狗）血压法检查药物中所含的降压物质。1096 含量测定 鉴别用来判定药物的真伪。检查和含量测定可判定药物的优劣。药物在通过鉴别无误、杂质、安全检查合格的基础上,进行含量测定。判断一个药物的质量是否符合要求，必须全面考虑鉴别、检查与含量测定三者的检验结果。1106 含量测定 准确测定有效成分的含量。测定药品的含量是评定药品质量,保证药品疗效的重要手段。采用化学分析方法或物理分析方法。含量测定111 6 含量测定 生物药物的含量表示方法 用百分含量表示，适

37、合于结构明确的小分子药物或经水解后变成小分子药物（理化方法测定）。用效价或酶活力单位来表示。适合于多肽、蛋白质和酶类药物（生物方法或酶学测定）。112 7记录及检验报告 记录完整、无缺页损脚；内容必须真实、简明、具体；宜用钢笔或特种圆珠笔书写；字迹清晰、色调一致,不得涂抹（写错时,划上单线或双线，再在旁边改正重写,并签名或盖章）。检验记录完成后，应由第二人对记录内容、计算过程进行复核。(1)检验记录1137 检验报告记录 (2) 检验报告内容a 供试品的名称、批号、规格、数量、 来源；取样方法、取样日期；外观 性状、包装情况。b 检验目的、项目、方法与依据； 检验数据。c 结论及处理意见。d

38、检验者签名盖章、复核者签名盖章。114检验记录及检验报告：1、检验记录记录要求完整、无缺页损角；内容必须真实、简明、具体；宜用钢笔或特种圆珠笔书写；字迹清晰、色调一致，一般不得涂改（若有写错时，划上单线或双线，而后在旁边改正重写，并签名或盖章）记录的内容应包括供试剂品的名称、批号、规格、数量、供试品来源（取样或送样部门或单位）、取样日期或收到日期、取样方法、外观形状、包装情况、检验目的、检验项目、检验方法与依据、操作步骤、观察到的现象、数据、计算结果、结论，报告日期、检验者签名或盖章、复核者签名或盖章等。115药物分析检验记录完成后，应由第二人对记录内容、计算过程进行复核。复核后的记录，属内容

39、和计算错误的，复核人要负责；属检验错误，复核人无责任。116药物分析2、检验报告报告要求完整，无缺页损角，色调一致；并应注意文字简洁，意思全面。报告一般包括的内容和顺序如下：供试品名称、批号、规格、数量、来源、外观性状、包装情况、检验目的、检验项目、检验依据、取样日期或收到日期、报告日期、检验结果（书写顺序为鉴别、检查、含量测定）、结论（或判定）。 117如结果符合规定，提出符合规定的结论（如本品符合中国药典规定），否则应提出不符合规定的项目及不符合规定的程度，同时应根据具体情况，提出处理该药品的合理办法。最后由检验人员、复核人员及有关负责人签名或盖章，必要时由检验单位盖章（对外单位）。检验报

40、告是对药品质量检验结果的证明书，结论必须明确、肯定、有依据。检验报告上必须有检验者、复核者及部门负责人签名或盖章，签名或盖章应写全名，否则该报告书无效。118 理化检定 安全检定 效力检定生物制品的质量检定生物制品的质量检定119生物制品中的有效成分和无效有害成分，需要通过物理的或化学的方法才能检查出来，是保证制品安全有效的一个重要方面。1.物理性状检查（1）外观检查：制品外观异常往往会涉及制品的安全和效力，因此必须认真进行检查。生物制品的理化检定120（2）真空度及溶解时间冻干制品进行真空封口，可进一步保持制品的生物活性和稳定性。因此真空封口的冻干制品应进行真空度及溶解时间检查，通常可用高频

41、火化真空测定器检查其真空度，凡有真空度瓶内应出现蓝紫色辉光。2、蛋白质含量的测定（1）半微量凯氏定氮法（2）酚试剂法（Lowry法)1213、防腐剂含量测定生物制品在制造的过程中，为了脱毒、灭活、和防止杂菌污染，常加入适量的苯酚、甲醛、氯仿、汞制剂等作为防腐剂或灭活剂。规程中对各种防腐剂的含量都要求控制在限度内。1224、纯度的检查精制抗毒素、类毒素、血液制品以及基因工程产品在制造过程中经过精制提纯后，求检查其纯度是否到达规程要求。检查纯度的方法有区带电泳、免疫电泳、凝胶层析和其它层析技术。1235、其它测定项目（1）水分含量测定（2）氢氧化铝与磷酸铝含量测定（3）磷含量测定烘干失重法、五氧化

42、二磷真空干燥失重法和费休氏水分测定法络合物滴定法测定1241、一般安全性检查包括安全试验、无菌试验和热源质试验2、杀菌、灭活和脱毒情况的检查3、外源性污染检查4、过敏性物质检查生物制品的安全检定125生物制品是具有生物活性的制剂，它的效力一般采用生物学方法测定。生物测定是利用生物体来测定待检品的生物活性或效价的一种方法，它以生物体对待检品的生物活性的反应为基础，以生物统计为工具，运用特定的实验设计，通过比较待检品和相应标准品或对照品在一定条件下所产生特定生物反应的剂量间的差异，来测得待检品的效价。生物制品的效力检定1261、动物保护力试验（或免疫力实验）动物保护力试验是将疫苗或类毒素免疫动物后

43、，再用同种的活菌、活毒或毒素攻击，从而判定制品的保护水平。动物保护力试验可分为以下三类：（1）定量免疫定量攻击法（2）变量免疫定量攻击法50%有效免疫剂量 ED50的测定法（3）定量免疫变量攻击法保护指数（免疫 指数）测定法1272、活疫苗的效力测定（1）活菌数测定（2）活病毒滴度测定3、抗毒素和类毒素的单位测定（1）抗毒素单位（U）测定与一个100倍LD100量（致死限量）的毒素混合作用后注射小鼠，仍能使该小鼠存活96小时以的最小抗毒素量。称为一个抗毒素单位。目前国际上都采用国际单位（U）数表示抗毒素的效价。128antitoxic unit 抗毒素单位；表示抗毒素效价的单位，白喉抗毒素单位

44、大约相当于体重250克的豚鼠混合皮下注入100倍最小致死量的白喉毒素以后可保护该豚鼠至少存活4天的抗毒素。实际上该单位等于保存在华盛顿的标准单位。破伤风抗毒素单位大约相当于体重350克的豚鼠混合注入100个最小致死量的破伤风毒素后可保护该豚鼠至少存活96小时的十倍量的抗毒素。猩红热抗毒素单位可中和50个皮肤试验剂量的猩红热毒素(美国公共卫生署)。简称为A. E.(德antitoxineinheit)129根据类毒素与相应抗毒素在适当的含量比例及一定温度条件下经一定反应时间，可在试管中发生抗原抗体结合，产生肉眼可见的絮状凝集反应。利用已知效价单位的絮状反应抗毒素国家标准品（简称：标絮抗）测定待检

45、类毒素的絮状单位（Lf）值。本方法适用于白喉、破伤风类毒素的测定。（2）絮状单位（Lf）测定：能和一个单位抗毒素首先发生絮状沉淀反应的类毒素量称为一个絮状单位。1304、血清学试验血清学试验主要用来测定抗体水平或抗原活性。预防制品接种机体后，可产生相应抗体，并保持较长时间，接种后抗体形成的水平，也是反映制品质量的一个重要方面。基于抗原和抗体的相互作用，常用血清学方法检查抗原活性，并多在体外进行试验，包括沉淀试验、凝集试验，间接血凝抑制试验、反向血凝试验、补体试验和中和试验。131（二）计量仪器认证要求计量器具是指能用以直接或间接测出被测对象量值的装置、仪器仪表、量具和用于统一量值的标准物质，包

46、括计量基准、计量标准、工作计量器具。计量检定是指为评定计量器具的计量性能，确定其是否合格所进行的全部工作。计量认证是指政府计量行政部门对有关技术机构计量检定、测试的能力和可靠性进行的考核和证明。 132药物分析国家对社会公用计量标准器具，部门和企业、事业单位使用的最高计量标准器具，以及用于贸易结算、安全保护、医疗卫生、环境检测方面的列入强制检定目录的工作计量器具，实行强制检定。未按照规定申请检定或者检定不合格的，不得使用。实行强制检定的工作计量器具的目录和管理办法，有国务院制定。133规定以外的其他计量标准器具和工作计量器具，使用单位应当自行定期检定或者送其他计量检定机构检定，县级以上人民政府

47、计量行政部门负责进行监督检查。 134药物分析使用实行强制检定的计量标准的单位和个人，应当向主持考核该项计量标准的有关人民政府计量行政部门申请周期检定。使用实行强制检定的工作计量器具的单位和个人，应当向当地县（市）级人民政府计量行政部门指定的计量检定机构申请周期检定。当地不能检定的，向上一级人民政府计量行政部门指定的计量检定机构申请周期检定。135企业、事业单位应当配备与生产、科研、经营管理想适应的计量检测设施，制定具体的检定管理办法和规章制度，规定本单位管理的计量器具明细目录及相应的检定周期，保证使用的非强制检定的计量器具的定期检定。计量检定工作应当符合经济合理，就地就近的原则，不受行政区划

48、和部门管辖的限制。属于强制检定范围的计量器具，未按照规定申请检定和属于非强制检定范围的计量器具未自行定期检定或者送其他检定机构定期检定的，以及经检定不合格继续使用的，责令其停止使用。 136计量标准器具的使用，必须具备下列条件：经计量检定合格；具有正常工作所需的环境条件；具有称职的保存、维护、使用人员；具有完善的管理制度。医药行业常用的实行强制检定工作计量器具有以下这些： 尺；电度表；玻璃液体温度计 ；体温计；心、脑电图仪；热量计；照射量计（含医用辐射源）；砝码；天平；活度计；称；激光能量、功率计（含医用激光源）；定量包装机；137药物分析 （14）超声功率计（含医用超声源）； （15）轨道衡

49、；（16）容量器；（17）计量罐、计量罐车；（18）有害气体分析仪；（19）酸度计；（20）酒精计；（21）火焰光度计；（22）密度计；（23）分光光度计；（24）比色计；（25）烟尘、粉尘测量仪；（26）水质污染检测仪；（27）流量计；（28）血球计数器；（29）压力表；（30）血压计等。138药物分析（三）药品质量标准分析方法验证方法验证的目的是证明采用的方法适合于相应的检测要求。在起草药品质量标准时，分析方法需验证；在药物合成方法变更、制剂的组成变更、原分析方法进行修订时需验证。139（四）药物分析的统计学知识、测量误差 1. 绝对误差 绝对误差 = 测量值真实值 2. 相对误差 相对误

50、差= 绝对误差/真实值100% 140例如：我们对甲硝唑样品进行测定，测定值：99.12%真实值（理论值）：99.21%那么：绝对误差= 99.12%99.21% = 0.09%相对误差= 100% =0.091%1413. 真实值4. 系统误差误差分为系统误差、偶然误差 。 系统误差包括方法误差、试剂误差、仪器误差、操作误差，有固定的方向和大小。 偶然误差无固定的方向和大小 。142（1）方法误差 由于分析方法本身不完善或选用不当所造成的。（2）试剂误差 由于试剂不纯而造成的误差称为试剂误差。（3）仪器误差 由于仪器不准确造成的误差叫仪器误差。 （4）操作误差 由于分析者操作不符合要求造成的

51、误差叫操作误差。（5）偶然误差 也称不可定误差或随机误差，由偶然的原因引起的。143、准确度与精密度1. 准确度 指测量值与真实值接近的程度。2. 精密度 精密度是指测得的一组测量值彼此符合的程度。144（1）偏差 偏差是指测量值与平均值之差。 偏差 = 单个测量值 平均测量值例：一组数据： 4 5 9 平均测量值：6 偏差 = 46 = 2 偏差 = 56 = 1 偏差 = 96 = 3145（2）平均偏差 各单个偏差绝对值的平均值。上例：偏差 = 46 = 2 偏差 = 56 = 1 偏差 = 96 = 3平均偏差 = = 2146（3）相对平均偏差 平均偏差与平均值之比。上例：平均偏差

52、= 2 平均值 = 6 相对平均偏差= 100% =33.3%147（4）标准差标准差是反映一组供试品测定值离散程度的统计指标。 S = 上例： S = = 2.64148 （5）相对标准差 也称变异系数（RSD) RSD = 100% 上例： RSD = 100% = 44% 149、准确度与精密度的关系一组测量值的精密度高，其平均值的准确度不一定就高；一组测量值的精密度低，其准确度往往较低，即使它的平均值与真实值很接近也是出于偶然，并不可取。只有精密度和准确度都高的测量值才最为可取，结果才准确。150测量值的准确度表示测量的正确性，测量值的精密度表示测量的重现性；精密度是保证准确度的先决条

53、件，只有在消除了系统误差后，才可用精密度同时表达准确度。151、提高分析准确度的方法要得到准确的分析结果，必须设法减免在分析过程中带来的各种误差。a. 选择合适的分析方法各种分析方法的准确度和灵敏度是不同的。例如，重量分析和容量分析灵敏度虽不算高，但对于高含量组分的测定，能获得比较准确的结果，相对误差一般是千分之几。见下表比较：152 方法数据容量法K2CrO7滴定铁含量直接比色法准确值40.20%40.2%相对误差0.2%2%含量范围40.12%-40.28%39.4%-41.0%153对于低含量组分的测定，重量法和容量法的灵敏度一般达不到要求，就要用其他分析方法，例如仪器分析法等；在选择分

54、析方法时，除考虑方法的灵敏度外，还要考虑共存组分或杂质的干扰问题。总之，必须根据分析对象、样品情况及对分析结果的要求来选择合适的分析方法。154b.减少测量误差为了保证分析结果的准确度，必须尽量减少各步骤的测量误差。（1）在称量过程中，一般分析天平的称量误差为0.0001g, 用减重法称量两次，可能引入的最大误差是0.0002g，为了使称量的相对误差小于0.1%，取样量就不能小于0.2g。155（2）在滴定步骤中，一般滴定管读数可有0.01ml的误差，一次滴定需要读两次数，可能造成的最大误差是0.02ml，为了使滴定的相对误差小于0.1%。消耗滴定液的体积就必须在20ml以上。（3）增加平行测

55、定次数在消除系统误差的前提下，增加平行测定次数可以减小偶然误差。156（4）消除测量过程中的系统误差校准仪器天平、移液器、pH计、分光光度计等；做对照试验对照试验是检验系统误差的有效方法，是把含量已知的标准试样或纯物质当作样品，以所用的方法进行定量分析，由分析结果与其已知含量的差值，便可得出分析的误差，用此误差值对测定结果加以校正。157做回收试验在没有标准试样或纯物质进行对照时，可以往样品中加入已知量被测物质，用同法进行分析，由分析结果中被测组分的增大值与加入量之差，便能估计出分析的误差并对分析结果加以校正。158做空白试验在不加样的情况下，以样品相同的方法、步骤进行分析，把所得的结果作为空白值从样品分析结果中减去，这样可以消除由于试剂不纯或容器不符合要求所带进的误差。有时验证试验方法的可靠性也做空白试验。159、有效数字的处理1.有效数字在实验中，对于任一物理量的测定，其准确度都是有一定限度的。测量值的记录，必须与测量的准确度相符合。在分析工作中实际能测量到的数字就称为有效数字