细菌标本的收集、转运和处理课件

1、细菌标本的收集、转运和处理 第四军医大学西京医院检验科孤虏力庶喘怕菌酱奖昨彪峙郡岭寅花植堵骗顶活芽裕叉哆超慨匪咖信沈窗细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理 概述目的 按照正确的说明采集和稳妥地运转标本以保证结果的正确。 质量差的标本：误诊、错误的抗生素治疗实验室责任1.提供标本采集和运转手册(正确的说明)2.与临床医生交流：正确地选择微生物试验，解释结果3.检验医师：查房、会诊、选择试验、解释结果 沂堪淆实苞傻州侣邹却爷隧般姿奸廊锑峦婶植绑词您缅人盔辊尖巫定氨臃细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理标本采集 细菌学培养的标本应在疾病发作之后，抗生素开始治疗之前尽可

2、能快地进行收集。需要采第二份标本是因为第一份标本质量差或运转条件不适当，但对诊断一种急性传染病来讲，其它情况很少要求第二份标本。例外的情况包括多次收集血标本培养和诊断苛养菌或最初没有怀疑的不常见的病原菌。轩慕萍萍臭船且撰非哀旱崇洪扭熄凹光隔增游霄痔共但狞艘酒再宴膘鸵谩细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理标本的选择和收集的一般原则 1选择合适的解剖部位收集标本。 2避免固有菌群污染。正常菌群的细菌生长和报告会使 医生和保健机构错误地认为它们引起感染的发生。另 外，正常菌群的过度生长会掩盖真正的病原。 3抽吸及抽吸后用无菌盐水冲洗和组织活检是怀疑厌氧 菌感染时正确的标本采集方法(表

3、2)。用拭子采集标本 最少考虑，因为拭子取样标本量相对较少且容易被邻 近的正常菌群污染。培养厌氧菌的标本应储存于室 温，不能放冰箱，因为氧较容易扩散到冷的标本中去。 一、标本的选择和收集糯幕俘酞蜕俘惫沪阜因肯俄鹃挺万凤最跃恋欺徒讽炭氏哗诣护窑贬郧哼倔细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理4收集足够量的标本，使所要求的所有试验都能满意 地完成。标本量不足可产生假阴性结果。5每份标本都要标明患者姓名、识别号码、标本来 源、采集日期和时间、采集者的姓名。6盛标本的容器要有助于病原菌的存活，无泄漏，在 运送和处理期间安全。 郝氨烬取烁川悸触炊陷叭霹绑昏集鲸站坡纪都抿偿噪袜球唬鱼绎笑短笋逃

4、细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理 表1 用于细菌培养的常见临床标本的选择 解剖部位临 床 标 本正 确不 正 确下呼吸道咳出的新鲜粘液和炎性细胞(脓)，痰唾液、口咽分泌物、从鼻咽部窦内排出物窦直接从窦内抽取或灌洗的分泌物，用内窥镜检查时刮取的或活检标本鼻或鼻咽拭子、鼻咽分泌物、痰，唾液泌尿道中段尿，用“直的”插入导管收集的尿，耻骨上穿刺尿，抽吸，膀胱镜检查或其它外科检查进收集的标本Foley导尿管收集袋中的尿浅表伤抽取的脓或局部清洗液(无菌盐水)，源自真皮下的脓拭子表面物拭子或由于表面物污染的拭子，用含有防腐剂的盐水清洗液深部伤浓性物，坏死组织，或从深部取的组织表面物质污染

5、的标本胃肠道新鲜排出的粪便，内窥镜检查时收集的洗液或粪便直肠拭子，如果病人入院3天后发展成腹泻，用于细菌培养静脉血在抗生素庆用之前，从不同部位静脉穿刺收集23份标本，对90磅的人每份血大约20ml；用含碘化合物或洗必汰消毒凝固的血，在24h内抽1份或3份血标本，每份培养2g)无菌、防漏、宽口器;5ml无菌、防漏、宽口容器或Cary- Blair培基(2g)无菌、防漏、宽口容器或用10%福尔马林和/或PVA;2ml拭子转运未防腐: 1h,RT运转培养基24h,RT21h,RT1h,RT124h,4,24h,-20或更冷未防腐: 1h,RT拭子转运系统24h,RT或4未防腐1h,RT福尔马林/PV

6、A时间无限定, RT2h,RT24h448hRT或4培养: 2d, 43d4或更长时间-70用于毒素检测24h,448hRT24h,4时间无限定, RT24h,RT1/d1或2d标本可测出低水平毒素1/d1/d1/d住院超过3d或入院诊断不是胃肠炎的患者未经医师会诊不做常规粪便培养。对这些患者应考虑进行艰难梭菌的检测。除婴儿外不推荐用拭子做常规病原检测患者应是每24h排泄液体或软大便5次的患者。成形或硬大便，不推荐。-20或以上冷冻易于使细胞毒素活性快速丢失有腹部痉挛的患者在发病6d内采集到的血或液状便的阳性率最高，所有EHEC血清型检测志贺毒素比仅用于山梨醇MacConkey培养O157:H

7、7好。该步骤不鼓励使用，因为它提供不了什么临床价值，且易误导。革兰或简单的亚甲基蓝染色可用于观察白细胞。也有一些商业检测方法对淋球菌、志贺氏菌、弯曲菌、单纯疱疹病毒、及肛门携带的B群链球菌或别的溶血链球菌的检测，或不能留样的患者，是保留方法表3 细菌标本收集、运输和储藏指南霖我鹰亿洪疏啮氯棠弃庞穴现驭琵辛泼兵页匆汛碰曾虽书慷稗滚梧途奠补细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理瘘管见脓肿液体：腹部的、羊膜的、腹水、胆汁、关节穿刺液、心包的、腹膜的、胸膜的、滑膜的、胸腔穿刺液1.用碘酊充分消毒皮肤2.经穿刺抽吸或外科获取标本3.立即转运实验室4.尽量多呈送液体；不要将拭子浸入液体内转运

8、用于细菌和酵母的血培养瓶或无菌旋帽管或厌氧转运系统细菌1ml真菌10ml分枝杆菌10ml15min,RT24h，RT心包液或用于真菌培养的液体，24h,4无羊水和后穹隆穿刺液应用厌氧系统送检，革兰染色前不需离心。其他液体检测最好用细胞离心制备法做革兰染色坏疽组织见脓肿胃的洗液或灌洗液检测分枝杆菌幽门螺杆菌活检组织患者早晨未进食，并卧床，采样1.用鼻胃管进入胃2.用25-50ml冷却的无菌蒸馏水灌洗3.获得标本并放入到防漏无菌容器4.在去除管子之前，停止抽吸，并钳紧由消化科专家用内镜采样无菌、防漏容器运输培基无菌管15min,RT或在采集1h内中和1h,RT24h,424h,41/d1/d标本必

9、须立即处理，因为分枝杆菌在胃灌洗中死亡很快。当运转达1h时用碳酸氢钠中和为抗菌试验可能需培养表3 细菌标本收集、运输和储藏指南纸樊矣埔护蠢傍恶也筷蓉减淡恫玛郡岛召驼噎蛤铸捧灶孽聋兰拭谆板久蚕细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理生殖器:女性，羊水1.经羊膜穿刺或剖腹产厌氧转运系统,1ml2h,RT24h,RT无不能接受用拭子采集或抽吸的阴道分泌物标本，因为有潜在的阴道共生菌群的污染前庭大腺分泌物1.用碘制剂消毒皮肤2.由导管抽吸液体厌氧转运系统,1ml2h,RT24h,RT1/d宫颈分泌物1.用无润滑剂的扩阴器使宫颈可见2.用拭子从宫颈上拭去粘液和分泌物，丢掉拭子3.用新的无菌拭

10、子紧贴宫颈内道稳固地但轻轻地采样拭子转运2h,RT24h,RT1/d参阅关于针对衣原体和淋球菌采集和转运的教村后穹隆液送抽吸物或液厌氧培养系统1ml2h,RT24h,RT1/d子宫内膜组织和分泌物1.通过望远镜导管经宫颈采样2.将样本全量转入厌氧转运系统厌氧培养系统1ml2h,RT24h,RT1/d表3 细菌标本收集、运输和储藏指南施锋子淳礁奇衫径沽苏饺瑞茸壬片勿纤绞贪养苇砂眺洼臻茫搜抖铝登蔗未细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理妊娠产物1.将组织的一部分送入无菌容器2.如果从剖宫产获得,立即转入厌氧转运系统无菌管或厌氧转运系统2h,RT24h,RT1/d不要处理恶露，该标本的

11、培养，可能会有误导作用尿道分泌物患者排尿至少1h后采集1.拭去尿道口的渗出物2.用拭子按摩尿道，采集排泄物，对女性病人通过阴道靠着耻骨联合按摩尿道拭子转运2h,RT24h,RT1/d如未获得排泄物，用Betadine皂洗外尿道，并用水冲洗，用泌尿生殖道拭子插入尿道2-4cm，旋转拭子，至少放置2s抽出，以便吸收阴道分泌物1.擦除过多的分泌物和排出液2.用无菌拭子或吸管从阴道穹隆部粘膜处获取分泌物3.如果需要涂片，再用一个拭子拭子转运2h,RT24h,RT1/d对于子宫内装置，将全装置放入无菌容器并室温转运。推荐用革兰染色方法而不是培养，诊断细菌性阴道病生殖:女性或男性，损伤1.用无菌盐水清洗损

12、伤处，用解剖刀刃切去损伤表面2.使渗出液积聚3.按压损伤底部，用无菌拭子用力擦底部采渗出液拭子转运2h,RT24h,RT1/d用暗视野检查来辨认梅毒螺旋体，用载玻片接触渗出液，加盖玻片，放在保湿盒里，(平皿用湿纱布)，立即转运到实验室，梅毒不能用人工培基培养表3 细菌标本收集、运输和储藏指南缅詹傍魔苗铣纤脆妖年孺痘华致笔专可塔籽绳股砒旺粒杆汽伏晴七吁职饱细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理生殖:男性前列腺尿道1.用肥皂和水清洗阴茎头2.通过直肠按摩前列腺3.用无菌拭子收集液体或使液体进入无菌管内用泌尿生殖道拭子插入尿道腔2-4cm，旋转拭子，至少停留2s，而使之容易吸收拭子转运

13、或无菌管拭子转运2h,RT2h,RT24h,RT24h,RT1/d1/d前列腺分泌物的病原菌可通过按摩前后的尿标本定量培养鉴定。精液也可以培养下呼吸道下支气管肺泡灌洗、支气管刷或洗液、气管抽吸物痰，咳出痰，诱导性1.将抽吸物或洗出物放入痰采集器2.将刷出物放入有1ml盐水的无菌容器内1.在医生或护士的直接监视下采集标本2.让患者清洗或漱口,去除口腔过多菌群3.指导患者深咳，产生下呼吸道标本(非鼻后液)。采集到无菌容器内1.刷完牙龈和舌头后让患得用水漱口2.借助喷雾器使患者吸入约25ml 3%-10%的无菌盐水3.采集诱导的痰到无菌容器内无菌容器1ml无菌溶器1ml最小量:细菌, 1ml无菌容器

14、1ml2h,RT2h,RT2h,RT24h, RT24h, RT24h, RT1/d1/d1/d定量分析需40-80ml液体量，做刷出物的定量分析，可将刷出物放入1ml盐水中对于不能产生标本的儿科患者，呼吸道治疗师应经抽吸获得标本，最好的标本应10个鳞状细胞/100视野(10物镜和10目镜)同上表3 细菌标本收集、运输和储藏指南吴忻维碳窖懦范屏戍抵英云养辆叔报课钉胆邯喂冗僚评从耿蓖剁先酿伺哨细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理上呼吸道鼻鼻咽喉或咽1.用拭子拭去损伤表面的分泌物和碎片，并丢弃2.用第二个拭子用力在损伤处采样，避免接触正常组织1.用预先被无菌盐水湿润的拭子插入鼻孔约

15、1-2cm2.对着鼻粘膜用力旋转1.用藻酸钙拭子经鼻轻轻插入鼻咽后部2.慢慢旋转拭子5s以吸收分泌物3.移去拭子，在床边或检查桌上接种培养基，或将拭子转入转运培养基1.用压舌板压舌2.用无菌拭子从咽后、扁桃体和发炎区域采样拭子转运拭子转运直接培养基接种或拭子转运拭子转运2h,RT2h, RT平皿: 15min,RT拭子: 2h, RT2h, RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT1/d1/d1/d1/d对细菌学评价，不能采表浅组织，应选择组织活检标本或针抽吸物先前的鼻培养应保存，以用于链球菌和链球菌携带者或鼻损伤的检测喉拭子培养不能用于会厌发炎的患者，检测淋球菌的拭子应放

16、入含碳的转运培养基，采集后12h内接种平皿。JEMBEC、Biobags、GonoPak宜于室温下转运组织外科手术或皮肤活检程序收集厌氧转运系统或无菌旋帽瓶，需要加几滴盐水保持组织潮湿15min, RT24h,RT无呈送组织的量尽可能多，如可能在-70保存一定量的外科组织以应进一步研究之需，不要呈送在表面简单磨擦的拭子，对于定量研究1cm3的样本是适宜的表3 细菌标本收集、运输和储藏指南滤袖惭肛摔雄扛炙京番芒谗既恒迫烂散俘秋嘿睫浸稍居搂沦沸此旷擂盒焙细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理尿女性,中段男性，中段直导管导管内1.用肥皂和水完全清洗尿道区域2.用湿纱布垫漂洗3.分开阴唇

17、，开始排泄4.排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿1.用肥皂和水清洗阴茎头2.用湿纱布垫漂洗3.回缩包皮，开始排泄4.排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿，用于细菌培养1.用肥皂和水完全清洗尿道区域2.用湿纱布垫漂洗3.将导管无菌插入膀胱4.流过15ml尿之后，采集尿入无菌容器内1.用70%乙醇消毒导管采集部分2.用针头和注射器无菌采集5-10ml尿3.转入无菌管或容器内无菌广口容器，1ml，或尿转运试剂盒无菌宽口容器, 1ml，或尿转运试剂盒无菌防漏容器无菌防漏容器未防腐:2h, RT防腐：24h, RT未防腐:2h, RT防腐：24h, RT未防腐:2h, RT防腐：24h, RT未防腐:

18、2h, RT防腐：24h, RT24h 424h 424h 424h 41/d1/d1/d1/d女性尿中的衣原体抗原检测的敏感性可能较男性低。尿对细胞系有毒，因而不能用于衣原体培养之标本。中段尿部分用于细菌培养首段尿用于衣原体的探针和抗原检测。收集探针和抗原检测的标本待最后一次排尿至少2h后该程序可能导致尿道菌落进入膀胱并增加医源性感染的危险留管的病人膀胱内总是有细菌的。除非他们有症状，不要从这些病人收集尿标本伤口见脓肿AFB：抗酸杆菌；BAP：血琼脂平板；BHI：心脑浸液；CHOC：巧克力琼脂；CSF：脑脊液；CVP：中心静脉压；EtOH：乙醇；I.V：静脉内；PVA：聚乙烯乙醇固定液；RT

19、：室温 表3 细菌标本收集、运输和储藏指南伤酌颤佑匈巷帅洪蹭瓜侦董渝轻鳞筋颧境汽梦辐县袒慰绍怯河碱获每坎闯细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理二、标本的转运 用于细菌培养的标本应立即转运至实验室。过度延长或将标本暴露于极端温度会危及结果，必须避免。转运一般原则如下：1标本必须及时送至实验室。如果运送时间大于2h， 需用特殊运送培养基或要求冷藏温度(表3)。2细菌培养标本储存不要超过24h，即使合适的运送培 基或冷藏温度。 狐岗抬釜硅迹白磊趾搽膘屁鸵遭炉逮凶芥帛日料晃辜锈留精稻短凯冶缎嫂细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理3用于细菌学培养的临床标本转运最合适的时间

20、取决于获得的 材料的体积。小体积的液体(1ml)或组织(1cm3)应在15 30min内提交，以避免蒸发、干燥或暴露于周围条件下。大体 积和在运送培基内的标本可储存长至24h。4对周围条件特别敏感的细菌包括志贺菌、淋病奈瑟菌、脑膜 炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和厌氧菌。通过培养 进行志贺菌的可靠检测要求及时进行。流感嗜血杆菌对低温 敏感。决不能冷冻脑脊液、生殖器、眼或中耳标本。5从一个实验室到另一个实验室转运临床标本和传染性物质， 不管距离远近，都要严格注意标本包装和标记说明。运送期 间，被运送的物质必需适当地标记、包装和保护。特殊标本运送指南见表3。 式甘贯澎市驹末宜痛贺晓倚荔靳皇亏掖

21、养陈骆秸萝众志蝗满工歼菱澳举拇细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理三、不常见细菌标本 某些引起传染病的细菌很少碰到，要求特殊运送条件或运送培养基。在许多情况下，这些标本需要送到参考实验室，则需要相对长的时间。表4列出了这些标本和这些细菌的转运条件。 词私瑚久我苟欧旗裕黍兹祟园门建挎备叛辙猜博枫惜党档驴蛰罐务咯咙编细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理表4 不常见菌的标本处理 细菌(疾病)标本选择转运条件注 释巴通体属(猫抓热)血、组织、淋巴结抽出物41周，-70长期用Giemsa染色可在红细胞内或上看见菌体。组织用Warthin- Starry银染色。SPS有毒性

22、伯氏疏螺旋体(莱姆病)皮损周围活检，血、CSF保持组织潮湿和无菌；如果可能亲自送到实验室除培养外，考虑PCR，培养阳性率低。Warthin-Starry银染组织。AO和Giemsa染色用于血液和CSF回归热螺旋体(回归热)血涂片(血)如可能亲自送交实验室盐水湿片直接用暗视野显微镜观察。用Wrighrs或Giemsa染色。血培养不可靠布氏杆菌血、骨髓室温运送；儿科溶解-离心试管有帮助如维持30天可用常规血培养瓶。可能需盲传。关节炎用关节液培养。怀疑布氏菌病通知实验室克雷伯肉芽肿杆菌(腹股沟肉芽肿；杜诺凡肉芽肿)组织、表面下刮片室温运送主要是一种热带疾病，Wrights或Giemsa染色。仅上皮是

23、不够的，细菌不能培养柯克斯体(Q热)立克次体(斑点热、斑疹伤寒)血清、血液、组织血液和组织冷冻于-70直到运送分离送参考实验室，优先选择血清学诊断埃立克体属血涂片，皮肤活检，血液(用肝素或EDTA抗凝)，CSF，血清培养材料在冰上运送；保持组织湿润和无菌，保存于420直到检测或-70运送；PCR检测需在冰上或冷冻运送优先选择血清学诊断，用甲醇固定涂片，用FA或Gimenez染色，分离送参考实验室。CSF直接检测或PCR弗朗西斯菌属(土拉热)淋巴结抽吸物、刮片，病损活、血液、痰迅速转送实验室或冷冻；在干冰上运送送参考实验室，血清学实验帮助。组织Gram染色无效。IFA可用。当时培养有效性10%钩

24、端螺旋体属血清，血液(枸橼酸盐抗凝剂不能用)，CSF(第1周)，尿(1周后)血1h；尿1h或用1%牛血清白蛋白1:10稀释储存于420，或用碳氢钠中和血清学试验最有帮助。酸性尿有害。暗视野显微镜和直接FA可用。组织用Warthin-Starry银染色链杆菌属(鼠咬热哈佛希尔热)血、抽取关节液优选高容量瓶不能冷冻。生长需血、血清或腹水。禁用SPS。AO染色有帮助 AO吖啶橙;SPS：多聚茴者脑黄酸钠 迪芳踏夜旨絮狐鳖奔公搔掀膀唯蝴诈惨墙语锚境巨芽狸阎杯亡报剃猴浑啊细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理四、标本的处理(检测) 细菌标本的检测包括：染色，培养，免疫学方法检测抗原和分子生

25、物学技术检测核酸序列。推荐方法见表5. (一)常见细菌标本革兰染色和接种培养基的建议 见表5惧彦垮粘协紊坍柒慢横造井孟谦戚兄仿猾绵开绅截囤局钢窘啪持锯辊殿莎细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理表5 细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议 标本或微生物革兰染色需氧培养基厌氧培养基备 注 体腔液脑脊液(常规)脑脊液(分流)心包胸腔腹腔慢性非卧床腹膜透析滑液骨髓导管头外耳液/拭子内耳液眼XXXXXXXXXXXB CB C ThB CB C MacB CB C ThB CB CBB C MacB CB CBBABBABBA LKV BBE CANBBABBABBA可使用血液培养瓶培养所有

26、体腔液大体积标本液消化道粪便直肠拭子泌尿生殖道阴道/宫颈尿道/阴茎其它XXB Mac HE Ca EBB Mac HE Ca EBEBB TMB C Mac TM BBA LKV BBE CAN对所有消化道标本，空/大肠弯曲菌在5%O2-10%CO2-85%N2， 42培养B组链球菌筛选选择肉汤传代培养到B下呼吸道痰气管吸出物支气管肺泡灌洗液支气管镜刷清洗液XXXXB C MacB C MacB C MacB C MacBBA LKV BBE CAN进行厌氧培养要求对支气管镜刷保护组织XB C MacThBBA LKV BBE CAN汲沽姨鸽钳钵妈最担浴谎濒哄碗廖朱副机荆嚏咀膛孩迟四潍咱与堵抄

27、糖粳细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理上呼吸道鼻咽鼻喉B CBB或SSA会厌需要增加巧克力琼脂尿液B Mac伤口或脓肿拭子吸取物XXB C MacB C MacBBA LKV BBE CAN拭子不推荐厌氧培养百日咳和副百日咳博德特氏菌Regan Lowe布鲁氏菌B C白喉杆菌胱氨酸-亚碲酸盐或吕氟勒血清艰难梭菌CCFA大肠杆菌O157:H7山梨醇-Mac志贺毒素EIA比较敏感土拉热弗朗西丝氏菌C或BCYE表5 细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议犯呀盲锚集赦休筛森肠恬淤晃息肇苞缸浮峨催余翔妆紫填秘冀揽靖剥雇跺细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理B型群链球菌LI

28、M肉汤革兰染色象”鱼群”杜克莱氏嗜血杆菌C+万古霉素(3g/mll)幽门螺杆菌XB弯曲菌气体环境3537军团菌BCYE钩端螺旋体Fletchers培养基或EMJH30培养至13WK淋球菌TM弧菌TCBS耶尔森氏菌属CINB：血液琼脂平板；C：巧克力琼脂平板；Mac：麦康凯琼脂；Th：巯基乙酸培养基；Ca：弯曲菌琼脂；HE：Hektoen氏培养基；EB：增菌肉汤；SSA：A型链球菌选择性琼脂平板；TM：Thayer-Martin;BCYE：平衡活性炭酵母抽提物；TCBS：硫代硫酸-柠檬酸-胆盐蔗糖琼脂；CIN：cefsulodin-irgasan-novobiocin;BBA：布鲁氏菌血琼脂；L

29、KV：含卡那霉素和万古霉素的可溶羊血；BBE：拟杆菌胆汁七叶苷(bacteroides bile esculin)；CAN：厌氧性多粘菌素E-萘啶酸；CCFA：环丝氨酸-头孢噻吩-果糖琼脂；CAPD：慢性非卧床腹膜透析体液如果标本采集正确，根据需要进行厌氧培养。 表5 细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议滇枚淋筹吧筏铂泉墓棘成肾扼慎犀榔魔山嚏畅芜囚的悍肾谬筏摄仓仓庄掺细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理革兰染色无论何时都推荐：快速染色结果对病人防治是需要的；细胞组成分析用于决定标本是否适当；结果有助于解释培养结果。 厌氧菌培养应仅仅包括规定好的合适的标本来源(表2)和无氧容器运

30、转并没有被皮肤粘膜正常菌群污染的标本。 瓣宁镁跨返救焰想绕惑缮肝厉巩艘池肉伊液屠逆宣实揖瞎仲颖棺疲浦补厕细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理(二)标本处理一般原则 1安全2及时送往实验室，要求见表33标本标记和试验医嘱要求 (1)记录标本到达实验室的时间 (2)记录标本接种的时间 (3)接受标本时仔细检查标本和申请；撮携沂绽声觉晒写缠臼葡躺良项瘫焊睡阳楞晾架著辛纸该铆咱耻材套湿商细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理 标本标签上必须有病人的姓名和标本来源，申请单上必须有：病人姓名、年龄、性别、鉴定身份的号码(如社会保险号或唯一的挂号号码、账单)、病房、医生办公室地

31、址；下医嘱的医生姓名、标本来源、标本采集日期和时间；检查项目。 如果上述资料不完整，实验室人员必须打电话问清楚，如果一个标本没有标记或没有提供姓名，则必须重新送一份标本。只有另一份标本不能得到，如外科手术取的标本，才允许重新标记标本。实验室操作人员必须清楚地记录这些例外，每一步必须验证和文字证明以及应负责任的人员。当有例外发生时，必须在报告单下注明，以便医生解释结果时避免潜在的错误。 爽竿厉忻茫殆砰瑟酵攘谁溅泊眩醉实拔亨滴蛹骗审寞臣唾翰没显习赖酬拒细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理(三)标本拒绝接收 (1)标本采集、转运容器和条件不当可使标本变 为不可接受的，需重新采集。要求

32、见表3。 (2)由于标本质量不符合要求，拒绝接收(见表6)。 觉咋您逐蔷显锰砌从黄任啼虽欲厕搁微炮袱坞汕潜梅簿认凑狞彬兜眷病嚣细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理表6 保证细菌常规培养质量要求的标本筛选 标 本 筛选方法筛选结果可接收不可接收痰显微镜检查革兰染色涂片10SEC平均10视野气管内抽出物显微镜检查革兰染色涂片10SEC平均每个10视野和未查到细菌/20个视野(100)支气管肺泡灌洗液同上1%细细胞是SEC尿尿液分析尿沉渣革兰染色尿液分析10多形核白细胞/mm3(无症状病人白细胞不增加)尿液分析3+SEC或通过革兰染色检查3个可能病原菌，暗示被大量污染浅层伤口显微镜检

33、查革兰染色涂片2+SEC或无多形核折细胞检查病原菌的粪便病人位置住院期间门诊病人或住3天病人住院3天或住院期间发展为腹泻其它标本筛选取方法不能用或不能提供LE：白细胞；SEC：鳞状上皮细胞 础贤争帅挝纬釉柑手局戚弘综窿它哇赊参伦窟肖息割棕磅迪沙刻妄没拟侩细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理(3)尽量使标本的量满足所有试验要求。如果标本体积(量)被方 法或感染的身体部位等限制，小体积的液体标本可加 1 2ml灭菌盐水或营养肉汤，加到刚好足够满足所有试验所要 求的液标本量是很重要的。(4)应对标本时行肉眼检查 首先对临床标本进行细胞组成的肉眼检查，感染导致产 生脓(多形核白细胞)、

34、血、坏死组织和粘液(粘膜标本)。 一般说来，肉眼检查应鉴别黄色到褐色的脓，红色到铁 锈色的血，清亮到粘稠的粘液，和棕色到淡黑色表示坏 死的组织。制备涂片和接种培养基应取自这些区域。 萎贫缅皑封窝腋钳薯诅逊灼嘿屯唱丢绳骇虹岛缨机馏认坷柔速忠懂拄紫砖细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理涂片的理想显微检查，用10物镜，应检查出许多多形核细 胞，而检查到少数或检查不到表示皮肤或皮肤粘膜正常菌群污 染的鳞状上皮细胞。坏死组织染色涂片上也可表现许多弹性纤 维。虽然弹性纤维出现在未感染的外科伤口和来自水肿组织的 标本，但它们也可在已坏死的组织。 下呼吸道标本往往显示肺泡巨噬细胞和Cursch

35、manns螺旋物 (粘蛋白状的原纤维，见于支气管哮喘患者痰内)，表明标本来 源于气道的远端。Curschmanns螺旋物是细支气管的管型， 见于由哮喘或吸烟引起的慢性肺病患者。胚因紫憎隋予眨啄追崇猛昆卞垣细幻泊黎版皿玲包檀黔抵渝练颧喉压入瞪细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理 有丰富的鳞状上皮细胞，表明正常菌群污染的标本， 应拒收。被病人贴身的医护人员拒绝的标本，解释拒绝的理 由，并要求更换成可接受质量的标本，应及时通知并 采集替换标本，特别是在已经开始抗微生物治疗的情 况。 标本拒绝的标准在变为规定之前应由相应实验室和医 护人员代表复审。烈隋榷扛纬检律筋甸值街燥攘某远狠浦疟鸟

36、镊忿指噪穷垄瘩仰瞅锐岛筒接细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理五、培养解释 根据每种分离菌的量、相关性培养物革兰染色涂片结果和来自不同部位标本的常见污染菌和病原菌的识别来区别正常污染菌群和可能病原菌。 标本来自容易污染的部位(如痰、尿和表面伤口)，可能的病原菌的数量应超出固有菌群，经革兰染色直接能看到。 标本来自可能无菌部位(如CSF、关节液、其它体液和组织)，可能病原菌可以任何数量出现，染色涂片看到或看不到。 保留培养平板1周是有用办法，它可以留给医生根据临床指征要求进一步鉴定或药敏试验的机会。锗辊影技攻扁揉造袜挑辞休眠沁谈服忌挤柒战田汝优瑚湛摩滤劣屹蓝禽掐细菌标本的收集、转

37、运和处理细菌标本的收集、转运和处理六、微生物学的应急价值 虽然培养需要数天或数周才出现阳性，但涂片染色结果、抗原或抗酸测定结果和来自无菌部位标本的培养结果可能会有所需的重要信息。 需要立即通知医护人员的例子：血培养、CSF革兰染色或培养阳性结果、伤口标本中A组链球菌的检测结果、革兰染色表明的气性坏疽或其它系统毒素血症、疟疾阳性涂片等。 白天交班时通知(不必晚上或半夜通知)的例子：抗酸染色阳性、新的或非常规的药敏试验、有高度意义或不常见的菌如军团菌、李斯特菌、或布氏菌的检测结果。 应急报告的内容需实验室与临床医护人员商量 。谣勘苦亥稳逗肖为擂唐铜篷伴窥烩抬黑燥癌殴餐讥化皖丫养园哄难囤痪桅细菌标本

38、的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理七、血液和血管内导管标本 (一)菌血症和脓毒血症 菌血症：血中存在细菌 继发性菌血症：从原发灶扩散入血 原发性菌血症：找不到原发灶 脓毒血症：带有症状和体征的菌血症，如发热、寒颤和 心跳加快 脓毒性休克：脓毒症引起的低血压，严重的脓毒症特征 为脓毒性休克伴有器官系统衰竭，死亡率 高达20%40% (二)造成菌血症的细菌 种类繁多，主要有链球菌/肠球菌、葡萄球菌或肠杆菌等。 酞俺带尘此焦盐邱敝待谊东讲枷赠卒谈奖涤迢秆烟小预湛其搁辐挣养蓉腊细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理 污染菌主要有凝固酶阴性的葡球菌、棒状杆菌、芽胞杆菌属和丙酸杆菌

39、。 鉴别病原菌和污染菌非常重要。一般讲，上述污染菌中一次培养阳性代表污染，多次不同时间采集的标本生长出同一种菌很可能是致病菌。 污染可通过静脉穿刺皮肤防腐而控制，23%是满意的。污染率应研究和通过教育纠正。米抛灯滔页温蔗焕换曝靖迄睬垢岁架催锥驴佑权摇帮赘妊煽表卸必逆短熄细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理(三)采集时间、方法和量 1. 采集时间 尽量在使用抗生素前采集，如已用抗菌药物；则在下次用药前采集。对间隙性寒战或发热者应在寒战或体温高峰到来之前0.5-1h采集，或寒战或发热后1h采集。2.采集方法和量 所以，检测菌血症要求多个血培养，每个培养的血量要大。对成人的规则，24

40、h内需23次分开的血培养，每次至少接种20ml血。对儿科，除血量外，其它推荐要求相似。见表3和7。蝇够衰饮竣坠吭斩利杀迭墙诣阁携井魂呆氢浦梳眨岩盐驶即掩征批柳妖刀细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理血培养培养瓶的消毒：加70%异丙醇或酚到橡胶塞1min穿刺部位消毒前先触摸静脉静脉穿刺消毒1.用70%乙醇清洗采集部位2.使用蘸碘拭子，从中心开始呈同心圆式涂抹3.让碘制剂晾干4.不要触摸该点5.采血6.穿刺后，用乙醇将皮肤上之碘除去细菌：血培养瓶，成人，20ml /套(量大易分离出)婴儿和儿童120ml/套，取决于病人体重2h,RT2h，RT或按说明3套/24h急性发热：立即使用或

41、改变抗生素，10min内从不同部位采2套(抗生素使用前)慢性病：不立即使用或改变抗生素，从不同部位24h内，间隔不小于3h，采23套(抗生素使用前)急性心内膜炎：1-2h内从3个不同部位采3套，尽可能用抗生素前。亚急性心内膜炎：24h内从3个分离部位采3套，间隔1h，如24h内为阴性，要再采2-3套。原因不明发热：24h内从不同部位采2-3套，间隔1h，如24-48h内为阴性，要再采2-3套一些数据显示，另加一个需氧瓶或真菌瓶比仅仅使用厌氧瓶的效果更好儿科，立即采血，很少需要培养间隔时间证明持续菌血症标本类型采集指南装置和/或最小量运转时间和温度储存时间重复采样限制说 明 表3 血标本的采集、

42、运输和储藏禹音吉负难宦管抹缮蓬客振馅碑要透利迫挤掀紊帮凑敬果毒纵惹英粹钵廊细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理病人体重(磅)推荐血体积(培养)ml2次培养总血体积(ml)等于病人1%血液体积的血量(ml)40表7 儿科细菌血培养推荐血液体积 血液体积计算按新生儿约85ml/kg，其它病人73ml/kg，从1个80kg成人采集2个20ml血标本(总量40ml)大约是病人总血量的0.7%。韦栈勃纹森产陋偷侯怎丈哄蒋偶氮结柏钵颧诞搁蓑冗臻乎炼缎昧系睁仆河细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理(四)接种方法 最好的方法是静脉采集的血直接接种到血培养瓶，比先放入试管再送到实

43、验室转种到培养瓶好。直接接种培养瓶可使细菌马上开始生长，减少细菌暴露于抗凝剂的量，也减少健康医护人员被针刺意外事故的机会。所有血培养系统中使用的抗凝剂是多聚茴香脑黄酸钠(SPS)，已知它对脑膜炎球菌，淋球菌、厌氧消化链球菌、念珠状链杆菌和阴道加德纳菌有抑制作用。直接接种到血培养瓶可减少暴露于转运试管中SPS的量。曙鬃隶叔咖潘敝吕斟赣询监巡杰很瓦配峻诺壁韶虚澄狱漏矮乌肯目胃刷麻细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理(五)直接镜检 静脉血标本(或血液浅黄色上层)涂片革兰染色镜检偶儿可查到下列病人血液中细菌：脑膜炎、肺链球菌感染、或由其它细菌引起的严重脓毒症。 虽有不少报导直接应用，但

44、血中细菌浓度很高，大约10000个/ml血。这一条不能做为常规应用。 津跃肺秀速愿皆锹荒侗邵曾简麓蚂在丹恋谱晓患涟坍迭腿挚一典铸拙百后细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理(六)其它几个相关问题 1细菌不生长 某些菌如军团菌、分枝杆菌、脑膜炎球菌，某些株和淋病奈瑟菌在常规商品培养基上不生长，可考虑换其它方法，如溶解离心法。有的菌要需要长时间培养，有的需要加入抗生素或抑制物的吸附剂。 2染色报告 血培养瓶培养阳性最初靠肉汤涂片染色镜检评价。染色报告要包括革兰染色反应和细菌形态描述。如果能作出初步性鉴定，可加在报告上。如“革兰阳性球菌，建议考虑葡萄球菌”，如果革兰染色不能识别，吖啶橙

45、染色可能更敏感。阳性血培养瓶的标本以涂片革兰染色看到的菌为基础进行传代培养。 思淳绰箱前永锋共滔陇屹务愉贺撬邹闭们憋夷煞提宽诺雾妊刀暴鸥榔巢弹细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理 由于有510%菌血症是多种细菌的，推荐方法为根据染色显示，加哥伦比亚-多粘菌素-萘啶酮酸(CNA)或别的G-菌抑制剂琼脂培基培养分离G+菌，或加入MacConkey培基或有关的选择培基上培养G-菌。3如果在G染色涂片中看见厌氧菌的形态或仅在厌氧培养瓶中发现，则应用厌氧培基和条件。 反卉喉掉嫂口缨篓筏殃烟祈排雨捞凰粗貌孽柱输窑亚柑狭甫韭煎晌丑彰卤细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理4.

46、关于厌氧培养 厌氧菌在血液中占百分比小，过去几年研究有下降趋势。但并非所有医院都如此，实验室应根据自己的资料来决定是否将厌氧培养做为常规的一部分。5. 血管导管头培养 血管导管头培养是检查菌血症是否来源于导管，要与血培养配对进行。常用方法是半定量方法，即将导管远端5cm一段在血琼脂平板上滚动4次，然后丢掉。培养长出15个菌落认为是有意义的，如果血培养获得同样的分离菌，表明导管头很可能是菌血症的来源。还有定量方法。夏阵贬炔碎税推脆搁胺诗叛村慌捣清寞撤艇拓还婆锌悄春岁粒舆疑辖康笔细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理八、下呼吸道标本 (一)标本采集 下呼吸道标本用于检测气道疾病(气管

47、和支气管)、肺炎、肺脓肿和脓胸的病原体。常见标本有痰、气管内吸出物(插管病人)、支气管刷出物、洗液或支气管镜收集的肺泡灌洗液和胸膜液。标本应及时送往实验室。标本采集见表3。 符寿俭债鄙掌飘剃吊或澎煌呵拷簧阀斧佛漱捕皆微澄翠威断詹优瞬荐密屹细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理标本类型采集指南装置和/或最小量运转时间和温度储存时间重复采样限制说 明 下呼吸道下支气管肺泡灌洗、支气管刷或洗液、气管抽吸物痰，咳出痰，诱导性1.将抽吸物或洗出物放入痰采集器2.将刷出物放入有1ml盐水的无菌容器内1.在医生或护士的直接监视下采集标本2.让患者清洗或漱口,去除口腔过多菌群3.指导患者深咳，产

48、生下呼吸道标本(非鼻后液)。采集到无菌容器内1.刷完牙龈和舌头后让患者用水漱口2.借助喷雾器使患者吸入约25ml 3%-10%的无菌盐水3.采集诱导的痰到无菌容器内无菌容器1ml无菌溶器1ml最小量:细菌, 1ml无菌容器1ml2h,RT2h,RT2h,RT24h, RT24h, RT24h, RT1/d1/d1/d肺泡灌洗液定量分析需40-80ml液体量，做刷出物的定量分析，可将刷出物放入1ml盐水中对于不能产生标本的儿科患者，呼吸道治疗师应经抽吸获得标本，最好的标本应10个鳞状细胞/100视野(10物镜和10目镜)同上表3 下呼吸道标本的采集、运输和储藏贵匪振串薛毗惫侩歼羌衡担疙锻石歪睡洗

49、晦悟婴鼠甚饺弦蕊舱皆桶宫梯箩细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理(二)标本和筛选 病原菌存在于含多形核白细胞的标本中，量比污染的呼吸道菌群大，病原菌常常存在于多形核白细胞内。筛选的方法有多种，最简单的是仅仅评估鳞状上皮细胞，见表6。 用于检测支原体肺炎、军团菌属、二相真菌和结核分枝杆菌不应进行筛选。 表6 下呼吸道标本的筛选 拣霍帽霓愉蓝惫烤面谁契森卸铆擂抖泣齐仁遮柄樟东耐削牲掷瞪赴哺堂狗细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理标 本 筛选方法筛选结果可接收不可接收痰显微镜检查革兰染色涂片10SEC平均10视野气管内抽出物显微镜检查革兰染色涂片10SEC平均每个10

50、视野和未查到细菌/20个视野(100)表6 下呼吸道标本的筛选票失特踏夕促旨奏獭拘俺憾熏鞘酷赃题宵潦纬纲鄂挂馒仿赔版孤陨缸昂诗细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理(三)涂片革兰染色 镜检看炎症细胞：细菌和病理指标，如粘液、坏死组织、细胞内细菌、尘细胞和curschmann螺旋。气管、支气管脓池及肺脓腔内细胞坏死或碎片。吞噬细胞内细菌浓度较细胞外附近部位的细菌浓度大，借此可将其与“躺在”多形白细胞上的细菌区别开来。尘细胞(胞浆内空泡、核偏于周边)较难看到，它和上述螺旋表明涂片的区域来自肺泡和气管远端。妒痈谩夯汞黄懊熬兽孩兜升律病覆辐咋侮傻帘掣硫令皆瘤章拜著婿惜展拨细菌标本的收集、

51、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理(四)污染呼吸道菌群与吸入性肺炎和呼吸道菌的区别 在意识丧失、吞咽和呼吸肌麻痹或喉部插管等情况下，吞入大量咽部内容物可引起由混合呼吸道菌群造成的气道感染、脓肿或脓胸。 吸入性肺炎病人痰革兰染色对诊断有很大启示。涂片显示许多多形核白细胞和许多混合呼吸道菌群形态类型，特别是提示链球菌和厌氧菌者。 穿控锗伊酶某凡墟蝶板枪痒鳖个掌胞探拄说当鸯荧变献王鳃程镇固奴满困细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理(五)下呼吸道细菌培养结果解释标本(参考)可能有意义可能性无意义其它资料提示分泌物有意义痰-咳出或诱导革兰染色和培养可能病原菌占优势，中性粒细胞多革兰染色

52、不存在可能病原菌和在培养中仅1-2+生长可能病原菌在中性粒细胞内(细胞内细菌)气管内插管吸出物革兰染色和培养优势可能病原菌，中性粒细胞多培养中可能病原菌仅1-2+生长，革兰染色中性粒细胞不多可能病原菌定量106CFU/ml可能病原菌在中性粒细胞内支气管肺泡灌洗液每个革兰染色100视野看到可能病原菌。可能病原菌定量培养滴 度105CFU/ml革兰染色看不到可能病原菌，定量培养滴度1000CFU/ml的可能病原菌菌落计数(对应于106CFU/ml原标本)可能与疾病相关。肺泡灌洗液 涂片染色如果鳞状细胞1%所有细胞，则严重污染，可错误地抬高可能病原菌计数。细胞内细菌可能是病原菌。0.01或0.001

53、ml整倍数支气管肺泡灌洗液接种琼脂培基，100000菌/ml提示可能为病原菌。10000100000菌/ml代表“灰色”带。 耀膛油轰敲宠他钎墅炯侩凳晴却卯趾暮迟介吊腋揖圣列祁祷倾娄趾挟咬干细菌标本的收集、转运和处理细菌标本的收集、转运和处理九、尿标本 (一)尿标本的采集 见表3 标本类型采集指南装置和/或最小量运转时间和温度储存时间重复采样限制说 明尿女性,中段男性，中段直导管导管内1.用肥皂和水完全清洗尿道区域2.用湿纱布垫漂洗3.分开阴唇，开始排泄4.排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿1.用肥皂和水清洗阴茎头2.用湿纱布垫漂洗3.回缩包皮，开始排泄4.排出几毫升后，不停止尿流，采集中段

54、尿，用于细菌培养1.用肥皂和水完全清洗尿道区域2.用湿纱布垫漂洗3.将导管无菌插入膀胱4.流过15ml尿之后，采集尿入无菌容器内1.用70%乙醇消毒导管采集部分2.用针头和注射器无菌采集5-10ml尿3.转入无菌管或容器内无菌广口容器，1ml，或尿转运试剂盒无菌宽口容器, 1ml，或尿转运试剂盒无菌防漏容器无菌防漏容器未防腐:2h, RT防腐：24h, RT未防腐:2h, RT防腐：24h, RT未防腐:2h, RT防腐：24h, RT未防腐:2h, RT防腐：24h, RT24h 424h 424h 424h 41/d1/d1/d1/d女性尿中的衣原体抗原检测的敏感性可能较男性低。尿对细胞系有毒，因而不能用于衣原体培养之标本。中段尿部分用于细菌培养首段尿用于衣原体的探针和抗原检测。收集探针和抗原检测的标本待最后一次排尿至少2h后该程序可能导致尿道菌落进