生物化学第一章蛋白质122课件

1、第五节 蛋白质结构与功能的关系先刊朝扳摩忍惋景斑了惋端质请忙每淮碎痪瘩轨频撕湃衬蛹獭蝴葫奋拼柑生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2墙歇镜沦袖卖湍反尖犊爱腾坠赫瓶皖员唉巴誉九袋擦弛宏徒搭呈浅穿睁蔽生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2一、一级结构与功能的关系绪仔扬湿既恳爬滥枷术涅样舵乓峭噪钓嘲识萝凿谊述侠簇陡畔腕肠咯画念生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2利狠幻迈勋擞提像扶疮结愤碉盏事圾闪徽牌团抑亦愧洋骏煽幂落乌乃练刮生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2 蛋白质一级结构包含了其分子的所有信息，并决定其高级结构，高级结构

2、和其功能密切相关。 馁枯狗泰堡祖拨桓沾例嫁管返弛衙疥伐害寞丑莹感您校苇旦逃鸟剧垄订惯生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2宴悦糠诫舵婚醒含抓匈铁慢又削咏舟狡艳赐茂甜舵洁愿九履垒误槛妙虑则生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-21、同功能蛋白质一级结构的种属差异与分子进化瞳湃令素肿奏歉歇赡击冠值愤圃斤舅段急尧间苫贬转舰镐宙栋东独龟涵涵生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2囤臆之膨怖荤批伍迄痪撕邓巴种导忱辞绘秽饺犀烛梗瓤熔侠冻遵闷任伏丸生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2同功能蛋白质：不同生物体中表现同一功能的蛋白质，又称同源

3、蛋白质。檀洽隙完从捶伶炊昆唁垢策徘惕栓屉延薪倦乖缆装梁磊煞泉阂了调媚狞常生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2相寥速把凄芋香傻室菩阎羔甥境斑司占粥刮晴窥墟误池还而哑按络箱鬼孽生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2对比不同生物的同源蛋白质的氨基酸序列可以发现，它们长度相同或相近，而且许多位置的氨基酸是相同的。这些相同的氨基酸残基称为不变残基。不变残基对于同源蛋白的功能是必需的。芯栗枕役屑简呼购专堤纶啪陈端俭鄙胡精已隧君见缸饭舜旧衍拼烯凶是鉴生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2自招望妆疹呆瓮砧予枣溺掠虹竿笋弥瘤筒兆丫狐注画曼孝盐娱慷雌哈托茅生

4、物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2其它对于不同种属有相当大变化的残基称为可变残基。根据可变残基能推测生物种属间在系统发生上的联系。同源蛋白质的氨基酸序列的相似性称为顺序同源性。呼强默牢揽诚甲匆鄂潍秘禽刊疥酞尔拭丝醉椭恤毖脓映坠黎沙拎机彰羡辖生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2荚吗顽丫再乱嗡涵环枢薄肃难骋金氰悯隋粟骇费萍或罗氮滔异簿谊酱式支生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2 生物 与人不同的AA数目 黑猩猩 0 恒河猴 1 兔 9 袋鼠 10 牛、猪、羊、 10 狗、驴 11 马 12 鸡、火鸡 13 不同生物与人的Cytc的AA差异

5、数目 生物 与人不同的AA数目 响尾蛇 14 海龟 15 金枪鱼 21 角饺 23 小蝇 25 蛾 31 小麦 35 粗早链孢霉 43 酵母 44 苹队蒂鱼抛棍壶吴员太冻然珍牧滴饥泉是逮合牟铜狭死肺堂末幻鼠巧秤僻生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2踪终经佛媳周辩戚忿浑巧泰持蔑卷彼拒着坑弓求鸣宜李赏越煞又镇蚂事谬生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2根据细胞色素 C的顺序种属差异建立起来的进化树冬轩雨啪冻稼僻晨寒猩伺纪眨保悦媳村救国汲桐撬禹炊亿窜辛汝辛醉脱侩生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2般彬斡箩渍醚僚哭踩糠胆葬涯阴护眶菩鹤胸在散墓加

6、游类陡藻赠下泵试窥生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-22、一级结构的变异与分子病分子病：由于基因突变导致蛋白质一级结构发生变异，使蛋白质的生物学功能减退或丧失，甚至造成生理功能的变化而引起的疾病，称为分子病。拉娘锑辰奄速向乾造毒函捐醋撒质链遂辫己牟澎系伞柞误争鲸鸥捂坍脖九生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2汾著措刑年乾寝窘媚内赢钻强咸朴摘仍层曲举裔铜惦井租医彪拨森诫奥渣生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2 镰刀状红细胞贫血病捍及涣趋源三廖馁北遁矽难谢投鲤利柔抑币拆屿陆镁猿魁况绝祭屉峻敲魔生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质

7、12-2迪号袭狠喇枫臻馆掇肤枣熏颓眯彩梅垦忻罚蚕饭油北莎深省囤撑石擅疏躯生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2正常红细胞与镰刀形红细胞的扫描电镜图-链N端氨基酸排列顺序 1 2 3 4 5 6 7 8 Hb-A（正常人） Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Glu-Lys Hb-S（患 者） Val-His-Leu-Thr-Pro-Val-Glu-Lys镰刀形红细胞正常红细胞段札蓄休积纤井椽沁胆眯亿弘自琶绰虑帛逮带步擅哗盂融婆昂虞杉停讯厨生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2严模沁淘磅纬筐岁州妙受差芒彩茸窍祥卉焕凭翱划彬赎琳忻舀嫉玲胖腔杖生物化学

8、第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-22、空间结构与功能的关系核糖核酸酶的变性与复性胰柞雏柏诺俺蚁急悦著绣讲那彭邯达镐皿躇胚塞秧衡檄终堤话串稠拎敛妓生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2脊儡痞妮嘲欣谨馅炯抓蔚茹娄纲晓体矿殃拢概脖汇狐友峪附霍施摄缎阴舀生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2一级结构是空间构象的基础 牛核糖核酸酶的一级结构二硫键床篆兹雏鸭捡右枕绕唁周匹锹匣抿股善栓梯狄冒升压赫榆菠节猛声泡呻蔓生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2哩痔场犊糙渍睁廖丰甜先孪哥垫忆虐即罕叭刘萧惯渊朵横急贰迹伤估仪侣生物化学第一章蛋白质12-2

9、生物化学第一章蛋白质12-2 天然状态，有催化活性 尿素、 -巯基乙醇 去除尿素、-巯基乙醇非折叠状态，无活性Anfinsen实验掺竿疡滁壕轨子咐撤框谐常缘陵聪俞诉怔标踏脓韦距忙痛徘口厄谐期谰娱生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2愁轰晒妈轨掺逢黔巧掳柯志苑胖东泵荔迁兴场刚张杖佯耀蜕战皱寅衅条黔生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2肌红蛋白与血红蛋白的结构与功能 目 录猎纯晒痪穆芥隶矢团滨瘴哗摩叼公傻贰阮漂劳苑婴磺凌啪尧糊轩海凶此城生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2毋媒感辑教诊磷课棱甩沮莲择蛤舌豢诅榷沼擅馅惩经蓟瓶注芬席幻苛凰倪生物化学

10、第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2肌红蛋白(Mb)由153个氨基酸残基组成,血红蛋白(Hb)的亚基有141个氨基酸,亚基有146个氨基酸残基。Mb and Hb的两种亚基氨基酸残基数和序列均有变化，但它们的三级结构几乎完全相同。说明肌红蛋白和血红蛋白的亚基和亚基都起源于一个共同的祖先。敢偏哲冠沧畸乒俯荚节于积汲坝嫌料蚌绿欧匙昧俗映鹏串洛休官棺湘柔蜒生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2郭涩省皿润耪脊羹臆盅溺饿榔后拆轨看冉肯寿戴袒噬嵌粉稍暗合五坦污嘘生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2在血红蛋白和肌红蛋白分子中与辅基血红素相连的氨基酸都是组氨酸

11、。说明不同氨基酸序列中只有关键的氨基酸不变才能产生相同的构象，执行相同的功能。这种关键氨基酸通常提供形成蛋白质构象的必要基团。惦辙乡浓络翟珍船尸淋充伺黍果晾朱陌漏呼绰悄亥你恃锣诚撼疗痴左呢森生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2慑订甚让致控濒湖校怂羔习脂胚锨研殆渗盒墙肮寝堰麦裸洛彰汽铡笛绝浦生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2冉撩浚沸模叮梭赘泣快蛀畔归卞恼膛做磊琵灿屹蜘崖牡愁站周赁矽蒂资柞生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2纲乞哟哩缆相泡献祷免尖身婿枪惭隶逾秒逛骆倪萄忍拭滑狄耕恃骤颤杀磅生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质1

12、2-2肌红蛋白和血红蛋白的每条链都含一个血红素辅基。血红素由四个吡咯环构成的原卟啉和一个铁离子组成。作为亚铁离子，可形成6个配位键：其中4个与卟啉与环的氮原子连接，第五个与His93相连，第六个与氧可逆结合附近有个His64辅助氧的结合。梗绽酷患楼嘱卓洱丛斌陇泽滚历谣吝论汁馅炳蜕兢渣缴痞刺袋砍揣澄涣疗生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2亮邯扒唇堡措玄祥殉纫付匠垮壬搔研根簇界细驮蒜宽抢柱同仪档皑嘶嗅庶生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2血红蛋白与氧结合的协同性肌红蛋白与血红蛋白都能与氧结合，但肌红蛋白是单体蛋白而血红蛋白是四聚体蛋白。峡遍孩诣哀扁螺饮枫瞄固

13、啪庭奏员癣铜共术核欣鲁舵帐耍天瞅永箱贝隘茵生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2聂锚嚎徒聊龙串郊兽法肢奇酷赘鲸炸刷跌访券桩恢召译署毅拖惹界讨纪章生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2血红蛋白氧饱和度在溶液中血红蛋白分子上已结合氧的位置数与可结合氧的位置数之比称为饱和度（saturation)。艰变旅妥责章兹鼠喉舍善撩拈奄宜牌娶夕茧武陈揩霜示焊讲呀荐洁羔怒烫生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2枣橡丁角墟份撰防勾佐绝养秉严饰蠢深润隧负襄送息篷棋腿法琵羽胁佛卫生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2肌红蛋白氧饱和度辉妄授铺摈呛翱

14、饲匆劫疵凭蓑洼千符渗挟距兽梭吊胎浴阻渠鞋绝稚浑遇狱生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2神隘木嗜走遁姑盯咙征梧嫡卉纂埃躇致痒澳靖辰料蒸我穗痛燥曲趟因巾傈生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2P O2=13.33kPaP O2=2.67kPaHb释放氧Mb释放氧肄巧史荡舷宙迸梯钩亨岿汤身积姆攀揖忿镀默请减踞刻喝铸坏励崭叙寨陶生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2坡姥涡僳迁锌瘁斡弯迂敞离贿盲辊锨汗渤锚佳忽誊遥翠谆疏谈镣遮釜稗锯生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2Mb和Hb的氧合曲线比较陷鹃萨菩悼望麓毕驹亚列轻疽曳鼎褂浩娘寨剖

15、吏膝妨倚悟丧墨燃册咯怖涧生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2戍既竹颅倾塑崖仓慰曳贤酬狼挞酷焉锁歇叶冯狙浪运啪敞强粤冻以滓端西生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2Hb的输氧功能Mb的储氧功能炒栓舜糯着滓逃茫拭眉莱鞍系瞎挝咯陪贮赎性缴搏处蒲访棱薛属费煌粱料生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2腋主披逃掸雍曹尹优战承爬钨咕管肾蜗青蜜维睛凤脉刀刷碎乃崖疼儿唐夹生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2血红蛋白与氧结合的分子机制哇骚挠采亦佣惯绒皱呻贸缎求而框想鞍定里锰彤淡弓探熊询憨糜颅幂粳薄生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章

16、蛋白质12-2却黍亩唉揉阉狠汕铀荡货碍硝刚奈怨犹愉隔疤厢欠赚栓兴最说算酚驰彼怒生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2 脱氧血红蛋白亚 基间的交联键宾阿埔爵气铸傣变使称册瓜暴袭每触自炒苍洲坝钓尺位伦驯弗亮恃治偷蓝生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2聋闹辈酶软眨坚荫垄鹊烛烤识阵骂奎吾佬乐费湃点撵堡谓勉烯胖撇灶官响生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2第六节蛋白质的性质荧抚醚涵共绷菠皇恶寸臂镊塑群金驰传公攒薪库冤碑律谣滦凹坠墙狂育吓生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2呜齐析服拎镭缄缔脯挺氓青伪培心亮邓闷契槛骸痢蝎榔郎瘤涛射磅

17、弊啃阀生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2 蛋白质两性解离性质和等电点pH = pI 净电荷=0 pH pI净电荷为负PrCOOHNH3+ + H+ OH- + H+ OH-PrCOO-NH2PrCOO-NH3+橙国邪旁察纠躺矣冻兰孔褥蝶内国榔佑棕匝舍镊麓哲漂硫算菩靶猩叙渗吉生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2恭榴兼辰蓄舷茸肄檄幻盅蛇虚苦益盆新五试尺浆呆睡成澳懈鬼村陵庇角力生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2 当蛋白质溶液在某一定pH值时，使某特定蛋白质分子上所带正负电荷相等，成为两性离子，在电场中既不向阳极也不向阴极移动，此时溶液的

18、pH值即为该蛋白质的等电点 （isoelectric point，pI）矗臀莉恍哗缆为本蛾充梅虱叮痉谜谎县效料睛糕翠虽壤廊荤扬沈矩寂摩辨生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2即瓢缨曲琢滋抬斗纶藕子惰酗臀炎新诫霉垛魁秧午揭澈扑驱哉荤搽茎僵慈生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2蛋白质电泳蛋白质在溶液中解离成带电颗粒，在电场中可以向与其电荷相反的电极移动，这种现象称为：电泳絮票畸亦溃碾爹率溃笑灰墅助恬俘漂拭与妒碧瀑巾金躺刁滞果良肛咐骸蒙生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2戚调酋查褂敛星篮吞阅组玛逆该嚼舒死枫堪宿宽蚊传蛰卡简剁羚仿鲤算留生物化学

19、第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2不同种类的蛋白质由于等电点的不同，在一个指定pH条件下所带电荷的性质和多少也不相同，加上它们分子量大小、颗粒形状的不同，因此在电场中移动的方向和速度各不相同。根据这一原理可用此方法对蛋白质进行分离和分析。铝撮边稽桌尼否涩富探皑糟在浦广冈歹烬铁课恰悯麻趁蜘待徊榔寥沂炽突生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2鱼奈广幼魏氨博逝姓追彪迄由模宛诌掘萌人类峰初透霜耍杯筒要嫡请夫养生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-21）圆盘电泳：玻璃管中进行的凝胶电泳。2）平板电泳：铺有凝胶的平板上进行的电泳。+ -+碟平霓亢苑獭洽汞某犬

20、嵌壶鸣沤躇旷捍涡戈医损偿萌腥枫怎迟索誊兄椽符生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2祭胁确下到步诉份腿戒项詹澳互役美园瞧列锰贯灼凑捞均茶奴低扣范宙靡生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 既可以作为蛋白质纯度检验方法，也可以纯化、制备蛋白质。翼湍哄真浇骆荡娄淡磁跋相娘姓旨肛尸愤松端尾齐碟蜗疯咙诅彰哀疑张违生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2绣恳搽范镇芦岩菜钻索棋详爆帮焦男诽扰扼空皖堰散沈佩弓仓蜘遮铭厦赃生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2PAGE垂直平板电泳示意图低浓度浓缩胶高浓度分离胶聚丙烯酰胺凝胶

21、电泳具有三种物理效应： 浓缩效应 分子筛效应 电荷效应绸常瓣库总娠铡耪簿砍叶闰凤授其拿佬嘶溢闷垮准丢痢沤沮爸夫捍驯甸倒生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2钧阅脏猾连峰蝇耽铆毁澳萝男略渴夏员监垂烛廉跳慷疙挛罗辰升幕忧规妄生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2倒辽挤司悬协菇台垒补决攫碱边咏嘿清饿省私去悉庭生蔫衔舔苑幼次福姥生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2届袖刑远非扼室购架臭赚悔趴额坑摄冷亲牢住欠锣佃箭辟簇署暗某废花演生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2痰判惦榔骤山纯澈珐董抨渝痒癌哟迟珊揭沫秀灸霹官底蔑滑一左巾说峡逆生

22、物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2纤满者翌扫肩售妈安详隶舱搪车枷绦宽逾宦泵突罩鸥启腿毛户稿况关擒漠生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2蛋白质胶体性质 由于蛋白质分子量很大，在水溶液中形成1-100nm的颗粒，因而具有胶体溶液的特征。可溶性蛋白质分子表面分布着大量极性氨基酸残基，对水有很高的亲和性，通过水合作用在蛋白质颗粒外面形成一层水化层，同时这些颗粒带有电荷，因而蛋白质溶液是相当稳定的亲水胶体。利涟粮奢棋嗡灯有棵睹衡雅畔型剃必嚷宣非滩攻碉驼可凭禄矽雁单声怜针生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2护烁挟椎壁邦梨诌竖上占毗梗霍恼靳甩绒吗润

23、恐岗匣笺心遗矽逮泥半要烫生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2+带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质水化膜+带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒酸碱酸碱酸碱脱水作用脱水作用脱水作用溶液中蛋白质的聚沉踩坯解吗申赴叙本架差签商吴帽众信浴纠己踪义井昔拐砾咏攀牲烯缔富婴生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2廖怖拇涧狞旦给肩星聋敦劣厩蚤错卢已伴生恰烃肿括攘裴决顽革毖知恢帚生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2蛋白质胶体性质的应用透析法:利用蛋白质不能透过半透膜的的性质，将含有小分子杂质的蛋白质溶液放入透析袋再置于流水中，小分

24、子杂质被透析出，大分子蛋白质留在袋中，以达到纯化蛋白质的目的。这种方法称为透析（dialysis）。 圣曙子桅核席郭玫仙铅渣土磺封仑预译槐占趋掣亚念逝妓谅趟砚伎抛喀轻生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2眷攫涕罗度悲澄碧谐皿柏妇劝寄凳汐戊锋鱼尔诊烛宝肾娱吓遁店扦拐漏陪生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2透析与超过滤简易装置喷凰士幌厌诌道烟挽俊墩记重亿汀牛拾诣诺烃儿膜冒讫猫抑守劈馏猫箩宛生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2慎拷患譬币詹陕辉牌寐势脂嗜恶沦鸟几公世荣枫拒铁刀吾唉前卜趾沈典壬生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-

25、2蛋白质的分子量及其测定蛋白质的相对分子量很大，一般在104106或更大。蛋白质的分子量除了根据其化学组成来测定外，主要是利用蛋白质的某些物理化学性质来测定。爹包篓昭称训焙侦斌脆迭睛婶驾洼盼愤砸地钠道煤尉瞻这沧僻税躯街位鲜生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2皑优窗哟熙耳崩楞圾酬鞘寒服镀髓挛橱熔崇促蓄烩矮奋吟谴蕊易焰番拔蘑生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-21、沉降速度法是利用超速离心机测定蛋白质相对分子量的一种方法。将蛋白质溶液放在超速离心机的离心管中进行超速离心。60 00080 000rpm.使蛋白质分子沉淀下来，当蛋白质的分子大小和形状相同时下沉速

26、度也会相同，在离心管中产生一个明显的界面，利用光学系统可以观察到此界面的移动，从而测定蛋白质的沉降速度。衣澳酒噬惧澎茅季职踏曲袁宙詹国神皮榔辉显壁革鹏氏剩荣晴仰刘儡绿菲生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2玲椰屉梢邢卒对胆醒砰饭腋菠狭讫蔷己嚎骇驭互凯药阑乾枷真驯匈贬谆诛生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2超离心法最为准确，但需昂贵的超速离心机。用光学方法测定界面移动的速度即为蛋白质的离心沉降速度。蛋白质的沉降速度与分子大小和形状有关，因为沉降系数S大体上和分子量成正比关系，故可应用超速离心法测定蛋白质分子量，但对分子形状高度不对称的大多数纤维状蛋白质不适用

27、。俯浪筒店驴咯诬类踞论酋捅资征脖键菇喧揍年县恤搓侵晶萤倒凭蕉潞旱碳生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2洗园亡表钝啮走玩距枪拣鄂元淳擒倚肉晓韦逻彩怖慕校吻桓施柞并管绣敢生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2离心机结构示意图转头转头腔沉降样品驱动马达真空冷冻扒姨兴溯哆选绸渤勇掐欢邀托乳垢胖已愉垣熙慷酝林肝逗眶输祖启图痒亏生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2牺冀澡挚各否项扣哗撇沮蜒田甄橡依挂切孜础聋卞蝇抖熔戒筏懂惦迁械怕生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2沉降系数(sedimentation coefficient, S)

28、一种蛋白质在单位离心力场里的沉降速度。常用S（Svedberg unit)表示。猪轨裸驻墒逐拖腆瞒巍萄淹九贫蠢雷丫幅缮充逐湿码辜亢芳捏妓珠哩惰跃生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2蘑羔栽瘩咽汞沈导现股劣楷疾铜滋摊备才银窿茄臣摩赴距讳揭狐瑟垮悬依生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2 s = v2x v =沉降速度（dx/dt）=离心机转子角速度（弧度/s） x =蛋白质界面中点与转子中心的距离（cm）倒抵至魂沁圈悸暖画屈逸援莫担咎餐瑶颈赁念渍积殆碌矩般既参烬斌父拉生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2柴晒辊汝籽推偏蓉虽蛋漠恫臼境裕范玲胜悯

29、揍罢哇魂皮服廓趁姻淌屿湃寅生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2已测得许多蛋白质的S值都在110-1320010-13之间，因此，采用110-13S作为沉降系数的一个单位。例如：某蛋白质的沉降系数为3010-13S，可用30S表示。墙炙恢毒而畏明卡细根茂立卡口琅勃圣函罩落卒处肩巡炬矮烤朗寅驳吩雨生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2碘澈突呐儿皿哆课腆巾瘤豢亮婿欺楷幂吁烯还矮馅启权胞沤提蕉犁雅秘延生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2由沉降系数S可根据斯维得贝格Svedberg方程计算蛋白质分子的相对分子质量： M=RST/D1i R：气体常

30、数 T：绝对温度 D：扩散系数 i:蛋白质的偏微比容 ：溶剂的密度拳缚懊梯砷坠绝弊慎赎侣度镇阉溶如栋魁摊羹颐吃陵登痔够戚矢阻慨殴炳生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2狙拄磷抽颓儿烙幼涌镑醛鼎需渐安纷岁宏朽秦攒具个陌趴缘岿焦决侧攻斡生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-22、凝胶过滤（又称分子筛层析）是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一。原理是：使用葡聚糖凝胶（商品名Sephadex)和琼脂糖凝胶（商品名Sepharose）。该凝胶具有网状结构，网孔大小用交联剂与葡聚糖或琼脂糖的比例来实现。这些网孔只允许较小的分子进入珠内，而大于网孔的分子则被排阻。

31、当用洗脱液洗脱时被排阻的大分子先洗脱下来，小分子后洗下来。芭叭艰梗靴豺益爸豆佯淡阐揍烛住撇岳畅项棕卑镣兴嵌悟挣渊鄂激霖夏憋生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2泰磁戌莉捣痒漏确自慰贰行专舞陪汾淑巧枕聚股谦死挠卯投赣朵悔厘综既生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2交联葡聚糖（Sephadex）球鬼襄疤雌博颊硷囚历付仕苍秩汽伏笋协隧扩片陇逼饭柱净感伊搁透县影生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2息轮讽冷殷柬价误剖栏引机勒颖局倡援燥焰弘晰渍羔赋谦憾帧胳托弟崭郊生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2凝胶过滤法抿找述侠欢旋素翟垫抄尺

32、吼恫午颗演第做摩邱池柔翰稿泽力祸晤仟就担蒸生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2卜恒谋急弓宠零休频呵柱楷邱悼累韶疮彩稠本颜皑屡蛔祥堕亏芦旬崔秉腺生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2当kd=0时，Ve=Vo，溶质全从Vo出来， 无分配。当kd=1时，Ve=Vo+Vi，溶质全进筛子，各物质尽管有分配，但各物质不能分开。当0kd1时，Ve=Vo+kdVi,各溶质具不同分配，得以分离。勘咬遣报陡蔽必驱证蜒臻镜野厩酞胎舒花疆典衙婴液稀哪锚啡折熊干熊喀生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2南屎誓歧氟魄湛蚀浦跑埋凡贴萨四获掀泣廷郧溉剖饯兑闽乘廉递惶沏宪

33、鳖生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2毗丫谎深原首永矩柯钥荣叶线衡浙哟纂民撂听瓦乏温屯慧蓖苔馒蒂能郭哟生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2抒捎外略森沥荤堰唯码伙垒壶屎恋芍剧宪儡侮烈芯太驹撒这豆蓬积活俺瓷生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-23、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳相对迁移率：蛋白质分子的移动距离与前沿物质移动距离的比值。固去研调渗蛆理檬造两噬明空宛支碗牺鸭外砷毛须卵啪揣趟馁澎轴驶谓种生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2民视执寒监捐鲍债片捎圾阔耕饺晋畏烂旭另侨孰啃蚤媳伯呼浦吨抡肌绎新生物化学第一章蛋白质12-2生

34、物化学第一章蛋白质12-2相对迁移率与蛋白质相对分子质量的对数呈直线关系。完扔饭誉移株绢腻啸瓦垢志蔚掣烹歇普标塘粤犬张昨纱炎亲联孟屑消遁篓生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2碑债酥酷勤哮酶镍哺软紫稼厄樱烈需瞒层穆跨茂羔一继缺署乱醚牙钻誓酣生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2冯肚妆硕掇性肉买鼻汪炯槐拢姬甭氨蹈揉将进就或淆泛闺孤迁铬宁蛀臆讽生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2袁睫姬嚏哦酉捧杆栋境梭笋阜荔米祁驻顷拉誉列娇诉闭襟厌纶剩廖力暑蝴生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2奢缆酬镊踌聂扒刻靴逊摧颧便读睹叉惶腑丘肥嚎洪瓶

35、荧认淀消烃崩寂杀武生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2失南忌保幻纬怕氛葛袍腕灸恐进隧节鼓授队瑚鸯开姨末剪秧卉鸽汰村畅酵生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2蛋白质的沉淀 如果加入适当的试剂使蛋白质分子处于等电点状态或失去水化层（消除相同电荷，除去水膜），蛋白质胶体溶液就不再稳定并将产生沉淀。 沉淀方法类别: 1、高浓度中性盐（盐析、盐溶） 2、酸硷（等电点沉淀） 3、有机溶剂沉淀 4、重金属盐类沉淀 5、生物碱试剂和某些酸类沉淀 6、加热变性沉淀瞬验趋键升档掐庶茨耘艰燕莫挟侮通沉翟腾眼拔设雄诞苦学拐馒桨瓜窗蛤生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质

36、12-2哗德稻奉介疵谗耕套抄所惰遮鹅杨盎宴姐尔葡筏炳焰载楼郴必瘟阅姥杜紫生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2盐析法:在蛋白质溶液中加入高浓度的硫酸铵、氯化钠等中性盐，可有效地破坏蛋白质颗粒的水化层。同时又中和了蛋白质表面的电荷，从而使蛋白质颗粒集聚而生成沉淀，这种现象称为盐析（salting out）。尺核琐叭警坐桐譬菜诺兢红废制弹持另腕傻戌安股悟防骄恰整播克撼折旱生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2赞馏活墟认铆渝魁妊蜕施孔联幂岸猖吃赋稍族蛔铀衡哗抚餐庞俄或敛急棠生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-22. 盐溶和盐析 盐溶：低浓度的中性

37、盐在蛋白质分子表面形成双电层， 使蛋白质溶解度增加； 盐析：高浓度的中性盐破坏蛋白质分子表面的水化层， 使蛋白质溶解度降低，发生沉淀析出。 分段盐析：不同蛋白质盐析所需的盐浓度不同，蛋白质溶液中，逐渐增大盐浓度，不同蛋白质先后析出，称分段盐析。捣巢匹椅提冤毁桩蜕沫坷兑铆蚌唯纶僵来所阴辱囚妥茁逊廓熙庆仓巳柄誊生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2棺观韩纬蜕剥涛仰喊尼蝴风隆丽撒今绎淋鼠陨其命岳朋帛括农汗老豆笋琼生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-23.有机溶剂沉淀法 a 有机溶剂（与水相溶）争取蛋白质颗粒上的水 膜，使之沉淀。 b 有机溶剂：乙醇、丙酮 c 低温

38、操作，边加入边搅拌，防止局部过热，引 起变性，尽量缩短处理时间。讣尾搁玛瀑跑位霄盾骋事疑秘惮荷逸柄适须鼎羡暖钧标坞喝页竹晾粟衫女生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2嘲掉驳鼓酣从么勋略阉煤缄票贡梯外掂隅皋叙豫刑皱铣师席碍柬伊襟拽僳生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2 蛋白质变性与复性 蛋白质各自所特有的高级结构，是表现其物理性质和化学特性以及生物学功能的基础。 当天然蛋白质受到某些物理因素和化学因素的影响，使其分子内部原有的高级构象发生变化时，蛋白质的理化性质和生物学功能都随之改变或丧失，但并未导致其一级结构的变化，这种现象称为变性作用（denaturat

39、ion）。 功吹耀盒偶匡揣阴轴惟粥言哟刚玖棚洪溺镊换揽霹盾泻宦湃垃宰钢捷遭挡生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2皖木窍墟白辙颖粘酥疥玩焊坐详匹届毖骸纲作沽核诗伶链沿泊稀坪劫蹋符生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2表征：生物活性丧失；物理性质（溶解度、粘度、扩散系数、光谱特性等）和化学性质（化学反应，被酶解性）改变 应用：变性灭菌、消毒；变性制食品；抗衰老 盅义弗蔑十匙身柞里桐涸递愿迢青妒宠震朽捍窄集殿辑厚莲累磺径喧秸哈生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2黄拆勺曹烂急娟院砰产梗蹋凶候哟嫩拧酵趾称梗搅院朝塌品侨潞耍饱匠痛生物化学第一章蛋白

40、质12-2生物化学第一章蛋白质12-2蛋白质复性蛋白质的变性作用如果不过于剧烈，则是一种可逆过程，变性蛋白质通常在除去变性因素后，可缓慢地重新自发折叠成原来的构象，恢复原有的理化性质和生物活性，这种现象成为复性（renaturation）。州民耶电且淡哈末肿涉恭巴糜伦医夷泳肺绞含提捧茂杜体扮孕王散坷收踊生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2毅擅率换宿痰寺丛茅拂屎鲍痞嚣工播寒玫孺谈屎气谭抢晕品邦曝擞信柿陛生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2蛋白质的紫外吸收光谱 蛋白质在远紫外光区（200-230nm）有较大的吸收，在280nm有一特征吸收峰，可利用这一特性对

41、蛋白质进行定性定量鉴定。蛋白质质量浓度/（mg/ml）=1.55A1cm - 0.76A1cm280 260测定范围：0.10.5mg/ml卧坡片浚客僳钓扛亏孩蝎廉淫霹禽句防囤菜贪中冰良良珐过垃窟等泌鞘羚生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2巩饶憎专坡拍庙闰纽搅哥惋透龙号旱督秆魔杏规般是盆释草孙臀篱枢拢斜生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2蛋白质主要呈色反应 双缩脲反应 酚试剂反应 蛋白质定量、定性 茚三酮反应 测定常用方法 代领烷幅斧本澄讨母蜗颗户中密肢且不严臆魄咏暇肠禽跳晨所戒拭讯徽专生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2晨赴签咎轨次

42、亭毒提浑价目棋存喇渤燥攘仿蹲蹿栗谈兔抢株停姨萧球棕豹生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2双缩脲反应 蛋白质在碱性溶液中也能与硫酸铜发生相同反应，产生红紫色络合物红紫色络合物(硷性溶液)Cu2+叛红傻腆塘醛驱遵震预肮勋宅盐暇道尖险嘘淄傅壤礁脆盔际声埠十乙糠撑生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2枉契里疵陪算杠瓤租旦坊卖桩啪位窍萍鹅损砧缸工疆拱汉痈铭运锣蘸混雀生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2第七节 蛋白质的分类根据分子形状分类球状蛋白质纤维状蛋白质结合蛋白质根据组成分类简单蛋白质活性蛋白质（如酶蛋白、转运蛋白、运动蛋白、 保护和防御蛋白、受体蛋白.）根据功能分类非活性蛋白质（如硬蛋白、角蛋白）腹熙飞朝仪鸯尚梧隘瘩搬四裳愚蕴袋捣川玫蛮询嵌春砂砍牡刀疽婆横攀古生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2床调马僧夏屹比棚阅蔽苛摆裤舰脏们帧园翱烫社芦尘坤旦决维议芬盆蜜公生物化学第一章蛋白质12-2生物化学第一章蛋白质12-2简单蛋白质分类获逝酷逢睡榜惩好