杀灭分枝杆菌试验

1、杀灭分枝杆菌试验以验以验目的在实验室内测定消毒剂杀灭悬液中或载体上分枝杆菌所需剂量，证对分枝杆菌(包括结核杆菌)实用消毒剂量。试验器材试验菌株龟分枝杆菌脓肿亚种ATCC93326。培养基分枝杆菌干燥培养基(上海奥普生物医药有限公司试验菌及其菌悬液或菌片的制备。中和剂(根据所示方法鉴定合格者)。稀释液0.1%胰蛋白胨的生理盐水溶液。消毒剂稀释用硬水：见附录A。有机干扰物质：见附录A。刻度吸管(0.1ml、1.0ml、5.0ml)。恒温水浴箱。喷雾装置(用于喷雾消毒试验)。电力混合器。计时装恒温培养箱。龟分枝杆菌脓肿亚种ATCC93326菌悬液的制备（1）取冻干菌种管，以无菌操作打开，用毛细吸管吸

2、加适量营养肉汤于管中，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散。取含5.0mllO.OmIMAD（肉汤或罗氏肉汤试管，滴入少许菌种悬液，置37C培养18h24h。用接种环取第1代培养的菌悬液，划线接种于分枝杆菌培养基平板上，于37C培养72h。挑取上述第2代培养物中典型菌落，接种于分枝杆菌培养基斜面，于37C培养72h，即为第3代培养物。密封后，在4C保存，时间不得超过6周。（2）试验时取第3代斜面培养物，在分枝杆菌琼脂斜面上连续传代，培养方法与第3代相同。取第5代6代的分枝杆菌培养基斜面新鲜培养物（72h）,用5.0ml吸管吸取3.0ml5.0ml稀释液加入斜面试管内，反复吹吸，洗下菌苔。随后，用5.0

3、ml吸管将洗液移至一含有6-7g玻璃珠的无菌圆锥底试管中，在电动混合器混合至少5min。然后将菌液吸入到另一试管内制成菌悬液。（3）将制成的菌悬液，进行活菌培养计数（见），按其结果用稀释液稀释至所需浓度。（4）菌悬液保存在4C冰箱内备用。当天使用不得过夜。试验分组试验分为下列各组:（1）试验组，按规定，选定消毒剂浓度与作用时间。阳性对照组，以硬水代替消毒剂溶液，按规定程序进行试验。所得结果代表试验体系中所含受试菌的初始浓度，并以其计算消毒因子对受试菌的杀灭对数值。阴性对照组，观察同次试验用相关溶液和培养基有无污染。试验程序常用杀灭试验有:悬液定量杀灭试验、载体浸泡定量杀灭试验、载体喷雾定量杀菌

4、试验等。其操作程序详见，。接种后的平皿应放入干净的塑料袋内，在37C中培养1周，观察最终结果。评价规定产品监督检验，按产品使用说明书指定的使用浓度和作用时间，重复试验3次，要求悬液定量杀灭试验各次试验的杀灭对数值均4.00，要求载体定量杀灭试验，各次试验的杀灭对数值均3.00,可判定该产品对分枝杆菌污染物消毒合格。产品鉴定检验，按产品使用说明书指定的使用浓度和3个作用时间，重复试验3次，在产品使用说明书规定使用浓度与最短作用时间，以及最短作用时间的1.5倍时，各次试验的杀灭对数值均应4.00,在产品使用说明书规定使用浓度与最短作用时间的0.5倍时,允许杀灭对数值V4.00,可判为实验室试验该产品对分枝杆菌污染物消毒的有效剂量。用载体浸泡定量杀灭试验评价杀菌效果时，在产品使用说明书规定使用浓度与最短作用时间，以及最短作用时间的1.5倍时，各次试验的杀灭对数值3.00,在产