3200QTrap液质联用仪作业指导书

1、ABI3200QTrap高效液相色谱串联质谱联用仪作业指导书（草稿）*食品检测中心实验室（2008年12月修订）本作业指导书依据高效液相色谱仪方法通则（JY/T024-1996）、有机质谱分析方法通则（JY/T003-1996）和美国应用生物系统公司3200QTRAP液质联用仪操作手册有关内容编写。一、检测仪器1、仪器名称高效液相色谱串联质谱联用仪（简称LC-MS-MS）。型号：3200QTRAP（美国AppliedBiosystems公司）。2、仪器组成液相色谱部分：Agilent1200RRLC，配有在线脱气机、超高压二元泵、自动进样器；串联质谱部分：ABI3200QTRAP，配有Turb

2、oVTM离子源、串联四级杆/线性离子阱。3、主要性能指标离子化方式：ESI和APCI电离质量范围：（51700）amu分辨率：6900质量稳定性：0.1amu/12h灵敏度：1pgreserpine,ESI+,MRM扫描（m/z:609/195），信噪比S/N120:1扫描速度：4000amu/sec质量准确度：0.01%（全质量数范围）4、方法原理高效液相色谱二元泵将流动相泵人系统并混合，自动进样器将待测样品注入流动相中，随流动相进入色谱柱，由于样品不同组分在色谱柱中保留时间不同，各组分被分开，依次进入离子源。在离子源中，各组分以ESI或APCI方式电离，被加速后进入质量分析器。3200QT

3、RAP的质量分析器主要由Q1、Q2、Q3三组四级杆串联组成（如图1所示）。Q1可将分子离子按质荷比（m/z）大小分开；Q2是碰撞室，可将母离子进一步破碎为碎片离子；Q3具有四级杆和线性离子阱两种功能，作为四级杆时可将分子离子或碎片离子按质荷比大小分开，作为离子阱还可富集离子从而提高检测灵敏度。各组分的不同离子在质量分析器中被破碎、分离，并按质荷比大小依次抵达监测器，经记录即得到按不同质荷比排列的离子质谱图。3200QTRAP通过串联四级杆/线性离子阱两种不同质谱技术的结合，可以在单次分析中对复杂样本中的单个成分同时进行定性和定量，也可以对多个化合物进行定量分析。整台仪器的控制、数据采集、数据处

4、理、结果输出均由PC计算机WindowsXP操作系统支持下的Analystl.5软件控制完成。离子源质量分析器监测器图13200QTRAP质量分析器示意图二、样品1、样品要求本仪器适合分子量在51700amu范围内的有机样品的定性及定量分析。待测样品必须能溶解于水或其它有机溶剂中。若样品或配制的样品溶液发生沉淀、挥发、变质等异常现象时，应重新取样或重新配制溶液。2、试剂要求所有的试剂均选用色谱纯级，所用水的电导率应大于18KQ。流动相必须用0.2pm或0.45pm滤膜过滤后方可使用。3、分离条件要求在液相色谱仪上确定分离条件，使待测组分能完全分离，且该色谱条件中流动相不应含有不挥发性盐，如磷酸

5、盐。三、操作步骤实施检测操作的人员，必须熟悉该仪器的操作规程，仪器的工作状态、包括检测灵敏度和分辨率，必须满足检测项目的要求。1、开机前准备开机前应检查仪器室内电、气的供应情况及空调机的工作状态是否稳定，检查真空机械泵泵油是否需要更换。只有当UPS工作正常，Gas1/Gas2、CurtainGas和ExhaustGas的压力分别稳定在0.35、0.35和0.7Mpa,环境温度为1030C，相对湿度小于70%时才能开机。2、开机1）打开真空机械泵上的电源开关。2）真空机械泵继续工作至少15分钟后，打开MS电源主开关。3）等真空度达到2x10-5Torr（绿色指示灯不闪）后，打开PC计算机电源。3

6、、仪器调谐参照3200QTRAP操作指南和3200QTRAP安装指南进行调谐校准，使得到的标准谱图的质量准确度、质量稳定性、扫描分辨率和灵敏度达到要求的指标。4、建立分析方法双击Analyst图标打开软件，建立或选择Project，在Configure模式中双击HardwareConfiguration，打开HardwareConfigurationEditor，激活MassSpectrometryOnly。双击TuneandCalibrate模式中的ManualTuning，用针泵进样，然后手动优化DP、EP、CEP、CXP、CE、CAD等Compound-dependent参数，保存质谱方

7、法。打开HardwareConfigurationEditor，激活MassSpectrometry、Pump、Autosampler和Oven，在Acquire模式中双击BuildAcquisitionMethod，在File菜单中点击Open，打开保存的方法，在AcquisitionMethod右上角，点击鼠标右键出现Add/RemoveDeviceMethod，添加Pump、Autosampler和Oven。根据液相色谱仪上确定的分离条件设置相关参数，选择采集同步模式，然后保存该方法，在方法名中加入“LC”以示区别。双击TuneandCalibrate模式中的CompoundOptimi

8、zation，然后用FIA进样方式自动优化CurtainGas、Gas1、Gas2、TEM等Source-dependent参数，此时不用接色谱柱，优化完成后保存方法，连接色谱柱，试运行该方法，根据实际情况对方法进行修改和完善。5、分析样品双击Analyst图标打开软件，选择Project，在Configure模式中双击HardwareConfiguration打开HardwareConfigurationEditor，激活MassSpectrometry、Pump、Autosampler和Oveno在Acquire模式中双击BuildAcquisitionBatch，打开BatchEdito

9、r，添加Set，然后添加sample，选择检测方法，更改样品名称，选择样品盘类型，设置样品瓶在样品盘上的位置，这样就建立了一个Batch。进入submit选项卡，选择要提交的样品，点击submit提交。点击ViewQueue图标，打开QueueManager窗口，查看提交后待测样品的状态。点击Equilibrate平衡钮，选用采集方法，设置预平衡时间510分钟，进行预先平衡：待柱压平衡后，点击StartSample开始数据采集。采集完成后，冲洗色谱柱及流路至少30分钟。打开HardwareConfigurationEditor，灭活系统。6、关机(无特殊情况不关MS主机，只关闭PC计算机即可)

10、关闭PC计算机系统。关闭MS电源主开关停止分子涡轮泵系统。待机械泵继续工作至少15分钟，然后关掉机械泵上的电源开关。等待至少15分钟让仪器“自然”卸真空，然后通过仪器后部真空管接口卸掉全部真空。四、测试结果1、分析数据调出谱图，根据定性及定量分析的需要，分别打开离子流图和质谱图，进行分析。若谱图未达到要求，需检查仪器并重新优化色谱、质谱条件。2、实验报告按要求填写实验报告，附原始谱图，注明仪器型号，电离方式，测试日期，测试条件(电离方式、扫描形式、质量扫描范围等)等。五、维护与保养1、离子源的维护1)每天检测完后冲洗离子源流路；2)每周清洗一次离子源腔体和CurtainPlateOrifice；3)发现喷雾针、PEEK管堵塞时要及时更换。2、真空机械泵的维护1)每周检查泵油的油量；2)每三个月更换一次泵油，以保持仪器性能稳定与长寿。3、其他项目每三个月进行一次仪器除尘，清洗或更换空气过滤网、倾倒废液收集瓶；每次开关机时用PPG进行质量校正；发现灵敏度下降时需要清洗InterfaceQ0；色谱柱用完后及时冲洗，保存时按说明书要求充满甲醇或乙腈。六、出现故障及处理方法1、若出现异常现