实验一蛋白质两性电离以及等电点测定

1、关于实验一蛋白质的两性电离及等电点测定第一张，PPT共十一页，创作于2022年6月【教学目标】1、独立操作，一丝不苟地作实验。2、仔细观察不同阶段试剂颜色变化及沉淀的出现和消失，通过现象观察能分析蛋白质两性电离的性质，正确填写实验报告。3、通过往五支不同pH值溶液的试管内加入酪蛋白，观察沉淀出现的情况，确定其等电点。4、共同讨论测定等电点的原理。第二张，PPT共十一页，创作于2022年6月一、蛋白质的两性电离 多肽链中氨基酸残基中有可解离基团，如：末端-COO-、-NH3+，酸性氨基酸侧链- COO- ，Lys的-NH3+，Arg的胍基，His的咪唑基。*蛋白质的等电点(pI) 当蛋白质溶液处

2、于兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。第三张，PPT共十一页，创作于2022年6月 NH3+ NH3+ NH2P P P COOH COO- COO-正离子 兼性离子 负离子 pHpI pH=pI pHpI+OH-+OH-+H+H+各种蛋白质的氨基酸组成不同，解离情况不同，等电点不同。多数接近5.0。蛋白质的性质之一：两性电离与等电点第四张，PPT共十一页，创作于2022年6月【实验原理】 蛋白质分子是两性电解质。蛋白质在溶液的pH值为等电点时游离为两性离子，溶解度最低，容易沉淀析出。若在大于或小于等电点的溶液中，因蛋白质分子带有同种电荷而相互排斥，不易产生沉淀。第五张，P

3、PT共十一页，创作于2022年6月【试剂】1、0.5酪蛋白醋酸钠2、0.01溴甲酚绿指示剂 变色范围是pH3.85.4。指示剂的酸色型为黄色，碱色型为蓝色。3、0.02molL盐酸溶液 4、0.02molL氢氧化钠溶液5、1.00molL乙酸溶液 6、0.10molL乙酸溶液7、0.01molL乙酸溶液第六张，PPT共十一页，创作于2022年6月【操作】1、蛋白质的两性电离 （1）取一支试管，加入0.5酪蛋白醋酸钠溶液20滴和0.01溴甲酚绿指示剂2滴，摇匀。观察溶液颜色，记录，并分析原因。（2）用细滴管缓慢加入0.02mol/L盐酸溶液，、边滴边摇，直至有明显的大量沉淀发生，此时溶液的pH值

4、接近酪蛋白的等电点。观察溶液颜色的变化，记录，分析原因。（3）继续滴入0.02molL盐酸溶液，观察沉淀和溶液颜色的变化，记录，分析原因。 （4）再滴入0.02molL氢氧化钠溶液进行中和，观察是否出现沉淀，记录，解释原因。当继续滴入0.02molL氢氧化钠溶液时，观察沉淀和溶液颜色的变化。解释其原因。作好记录。第七张，PPT共十一页，创作于2022年6月 结果及分析 操作 实验结果 简要分析在酪蛋白溶液中加入指示剂滴入HCL至出现大量 沉淀继续滴入HCL滴入NaOH溶液继续滴入NaOH溶液至沉淀溶解第八张，PPT共十一页，创作于2022年6月2、酪蛋白等电点的测定（1）取5支试管，编号后按下表的顺序准确地加入各种试剂，然后混合均匀(每管加入酪蛋白醋酸钠溶液后，须立即摇匀该管)。第九张，PPT共十一页，创作于2022年6月 试剂(ml)及管号12345蒸馏水（ml)1.6_3.01.53.40.01mol/L醋酸溶液_2.50.60.10mol/L醋酸溶液_4.01.0_1.0mol/L醋酸溶液2.4_酪蛋白醋酸钠溶液1.01.01.01.01.0溶液的最终pH3.24.14.75.35.9沉淀出现的多少(2)静置约20 min，观察每支试管中溶液的混浊度，以-，+，+