好《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》课件

1、1.无菌技术除了用来(yn li)防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适(hsh)的方法。培养细菌用的培养基与培养皿玻棒、试管、烧瓶和吸管实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。P1516旁栏思考共一百零一页课题2土壤中分解尿素的细菌(xjn)的分离与计数共一百零一页一、课题(kt)背景1、尿素(nio s)的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、细菌能利用尿素的原因土壤中的细

2、菌分解尿素是因为它们能合成脲酶CO(NH2)2脲酶 + H2O+ CO22NH3共一百零一页3、常见的分解(fnji)尿素的微生物芽孢杆菌、小球菌(qijn)、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。4、课题目的从土壤中分离出能够分解尿素的细菌统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌一.研究思路.筛选菌株.统计菌落数目.设置对照共一百零一页 1、实例(shl)： PCR技术DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量(dling)复制(PCR)的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。.筛选菌株耐高温的酶存在于哪里？美国黄石国家公园的一个

3、热泉中水生耐热细菌Taq中Taq细菌在哪发现的？共一百零一页原因：因为热泉温度70800C，淘汰了绝大多数微生物只有(zhyu)Taq细菌生存下来即被筛选出来。为什么Taq细菌能从热泉中被筛选(shixun)出来呢？而实验室中微生物的筛选也应用了同样的原理 自然界中目的菌株筛选的依据： 根据目的菌株对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。共一百零一页方法： 抑制大多数微生物的生长(shngzhng) 促进目的菌株的生长结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。2、实验室中微生物的筛选(shixun)原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH

4、等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。共一百零一页15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO47H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43、土壤中分解(fnji)尿素的细菌的分离与计数所需培养基：从物理性质(wl xngzh)看此培养基属于哪类？固体培养基共一百零一页在此培养基中哪些(nxi)作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖 氮源：尿素(nio s)该培养基的配方中尿素是唯一的氮源，只有能够合成脲酶的微生物才能利用尿素，才能在该培养基上生长。其他的微生物由于缺乏脲酶不能分解尿素，从而缺乏氮源不能在培养基上生长繁殖，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。5、培养基选择分解

5、尿素的微生物的原理共一百零一页选择培养基： 在微生物学中，允许特定种类(zhngli)的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类(zhngli)微生物生长的培养基。共一百零一页.统计菌落数目：1.显微镜直接计数法：这种方法是利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积(rngj)里样品中微生物的数量。此法的缺点是不能区分死菌和活菌。共一百零一页2.间接计数法(活菌计数法)：常用方法：稀释涂布平板法。原理：在稀释度足够高时，培养基表面(biomin)生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。（1个菌落1个活菌）注意事项每克样品中

6、的菌落数(CV)M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均(pngjn)菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。共一百零一页注意事项为了保证结果准确(zhnqu)，一般选择菌落数在30300的平板上进行计数。为使结果接近真实值每个稀释度取3个平板，经涂布，培养计算出菌落平均数。统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。共一百零一页 例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到(d do)以下两种统计结果。 1、甲同学在

7、该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？ 甲：第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组， （至少涂布3个平板），因此结果(ji gu)不具有说服力。乙：第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。共一百零一页说明设置重复组的重要性。这个实例的启示：在设计实验时，一定

8、要涂布至少3个平板(pngbn)，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。共一百零一页.设置对照：对照实验(shyn)是指除了被测试条件以外，其他条件都相同的实验(shyn)，其作用是比照实验(shyn)组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试和条件引起相应的结果。设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。P22旁栏思考题想一想，如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数

9、的平均值，然后(rnhu)按课本旁栏的公式进行计算。共一百零一页思考(sko)A同学的结果(ji gu)与其他同学不同，可能的解释：（1）土样不同（2）由于培养基污染或操作失误。(或者是混入了其他的含氮物质)请通过设置对照，帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素。阅读课本P2223小字部分共一百零一页小结：通过这个事例可以看出，实验(shyn)结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。方案一：由其他同学用与A同学(tng xu)相同土样进行实验 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果

10、结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。共一百零一页（二）统计菌落数目：活体计数法 （1）操作方法： 稀释涂布平板统计菌落数 （2）原理(yunl)： 1个菌落1个活菌 （3）统计原则 选 30300 个菌落的平板统计 每个稀释度取3个平板取其平均值为什么？共一百零一页1、实验设计的内容包括 , . 2、 观察图示27理解后思考实验流程。实验流程：3、土壤有“微生物的天然培养基”之称。土壤微生物主要分布在距地表(dbio) 的近 的潮湿土壤中，约 为细菌。 二、实验设计：实验(shyn)方案、所需仪器、材料、用具和药品具体的实施步骤以及时间的安排配制土壤溶液，制备培养基，系列稀

11、释，涂布平板与培养，菌落计数38cm中性7090共一百零一页 .土壤取样(qyng)（1）取样的位置： 土壤，微生物的天然培养基，含有大量的微生物，其中7090是细菌。细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，在富含有机质的土壤层的38cm处中分布着绝大多数的细菌。 （2）取样要求：先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。应在火焰旁称取土壤10g。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。共一百零一页 准备牛肉(ni ru)膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以

12、作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。.制备(zhbi)培养基： 共一百零一页（三）样品(yngpn)的稀释应在火焰旁称取土壤(trng)10g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。依次等比稀释至106稀释度在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。共一百零一页分离不同(b tn)的微生物采用不同(b tn)的稀释度，其原因是 ，其目的是保证获得 的平板。细菌稀释度一般为 ，放线菌稀释度为 ，真菌稀释度为 。不同微生物在土壤(trng)中含量不同菌落数在30300之间、适于计数104、105、106103 、 104、105102、103、104共一百零一页

13、为什么分离(fnl)不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ 答：这是因为土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得(hud)不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。思考题共一百零一页.取样(qyng)涂布实验时要对培养(piyng)皿作好标记。注明培养(piyng)基类型、培养(piyng)时间、稀释度、培养(piyng)物等。选取适合的稀释范围

14、分别吸取0.1 mL进行平板涂布操作。如果得到了2个或2个以上菌落数目在30300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。共一百零一页.微生物的培养(piyng)与观察在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为(zuwi)结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：3037培养12d 放线菌：2528培养57d 霉菌：2528的温度下培养34d。共一百零一页 将涂布好的培养皿放在30 温度(wnd)下培养。随着培养时间的延长，会有

15、不同的菌落产生。 比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。 共一百零一页 在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及培养时间），同种微生物表现出相同而稳定的菌落特征(tzhng)。这些特征(tzhng)包括菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等方面共一百零一页 关注菌落的形态、大小、边缘、突起(tq)、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 共一百零一页 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要(zhngyo)手段。 共一百零一页 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌(xjn)的重要手段。 共一百零一页 关注(gunzh)

16、菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 共一百零一页思考在研究未知微生物时务必规范操作，以防被 感染，实验后一定(ydng)要洗手。致病微生物三、操作(cozu)提示阅读P25页1、无菌操作2、做好标记3、规划时间共一百零一页四.结果分析与评价1.通过(tnggu)对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。2.提示：选择每个平板上长有30300个菌落的稀释倍数计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。共一百零一页共一百零一页共一百

17、零一页五.课外(kwi)延伸在以尿素为唯一氮源的培养(piyng)基中加入酚红指示剂。培养(piyng)某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。共一百零一页本课题(kt)知识小结:共一百零一页1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（ ） A.在液体培养基上进行 B.至少接种一种细菌 C.接种一个细菌 D.及时补充消耗的营养物质 2.使用选择培养基的目的(md)是（ ） A.培养细菌 B.培养真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( ) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3 C.CO

18、2和尿素 D.葡萄糖和尿素实践(shjin)训练A CD共一百零一页4.下列说法不正确的是（ ） A.科学家从7080度热泉中分离(fnl)到耐高温的TaqDNA聚合酶 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（） A.较多的氮源物质 B.较多的碳源物质 C.青霉素类药物 D.高浓度食盐BC共一百零一页六、例题(lt)解析 例1对细菌

19、群体生长规律测定的正确的表述是A在液体培养基上进行 B至少接种一种(y zhn)细菌 C接种一个细菌 D及时补充消耗的营养物质 解析：细菌群体生长规律的测定是人们在一定条件下进行的。这些条件是：一种细菌、恒定容积的培养基，液体培养基、定时测定细菌总数。在这些条件下，才能测定出细菌的生长规律。测定时只能用一种细菌的子细胞群体的变化规律表达微生物的生长；恒定容积是给微生物提供一定的生存环境；液体培养基才能通过样品推测细菌总数。若接种多种细菌，则会发生种间斗争而不能测定一种微生物的生长规律。在接种时，要保证一定的接种量。答案：A共一百零一页例2在微生物群体生长(shngzhng)规律的测定中，种内斗

20、争最显著最激烈的时期是A调整期 B对数期 C稳定期 D衰亡期解析：种内斗争是一种生态因素。种内斗争反应了种内生物对生存空间和生活资源的争夺。在生活空间充裕，营养充足的时候，种内斗争的程度是比较低的。随着微生物个体数目的增加，每个个体的生存空间越来越少，营养物质也越来越少，每个个体对生存空间和资源的争夺也越来越激烈，种内斗争就越来越激烈。由此可知，在稳定期的种内斗争最激烈。在衰亡期，微生物的数目已经开始减少，pH已经极度不适于微生物的生存，次级代谢产物积累到很高的程度，这时的微生物的生存斗争主要(zhyo)是与无机环境的斗争。答案：C共一百零一页例3（2005年江苏）抗生素作为治疗细菌感染的药物

21、，其高效性和巨大的经济价值使抗生素工业经久不衰。其中青霉素的发现(fxin)和应用具有划时代的意义。青霉素发酵产生青霉素。青霉菌的新陈代谢类型是 ，青霉素是青霉菌的 代谢产物。在生产和科研中，常选用处于 期的青霉菌作为菌种或研究材料，因为此时的青霉菌代谢旺盛， 和 比较稳定。对青霉菌菌体生长情况的测定：取一定体积的发酵液，经离心分离、反复洗涤后， ，再计算发酵罐中菌体的总重量。异养需氧型次级(c j)对数个体的形态生理特性称菌体的湿重 （称烘干后的重量）共一百零一页例题：统计(tngj)菌落数目的方法有 （ ）A. B. C. D.D涂布平板法 重量法 直接计数法 比浊法 生理(shngl)指

22、标法 膜过滤法共一百零一页四、实验(shyn)案例 实验的具体操作步骤如下: 1.土壤取样 从肥沃(fiw)、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。土壤中某样品细菌的分离与计数共一百零一页 准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显(mngxin)多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为103107。每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基，因此

23、共需要15个选择培养基，5个牛肉膏蛋白胨培养基。此外，还需要准备8个灭菌的试管和1个灭菌的移液管。 2.制备(zhbi)培养基 共一百零一页共一百零一页 将10 g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中（锥形瓶体积为250 mL），充分摇匀，吸取上清液1 mL，转移至盛有9 mL的生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀释至107稀释度，并按照由107103稀释度的顺序(shnx)分别吸取0.1 mL进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。 3.微生物的培养(piyng)与观察共一百零一页 将涂布好的培养皿放在30 温度下培养。随着培养时间的延长，会有不同的菌落产生。

24、 比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态(xngti)等，并做好记录。 挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养基的斜面中，观察能否产生如课本中图2-10的颜色反应。共一百零一页共一百零一页共一百零一页 4.细菌(xjn)的计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在30300的平板进行计数。在同一稀释(xsh)度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。 共一百零一页 关注菌落的形态、大小(dxio)、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 共一百零一页 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色(yns)、质地等等，都是区

25、分细菌的重要手段。 共一百零一页 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等(dn dn)，都是区分细菌的重要手段。 共一百零一页 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分(qfn)细菌的重要手段。 共一百零一页一无菌操作1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。二做好标记注明培养基种类、培养日期、平板培养样品(yngpn)的稀释度等。三规划时间共一百零一页六、课题成果(chnggu)与评价 （一）培养物中是否有杂菌污染以及(yj)选择培养

26、基是否筛选出菌落 对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。共一百零一页伊红美蓝培养基是鉴别培养基，可以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，因为的代谢产物与伊红美蓝结合，使菌落呈深紫色并带有金属光泽，使大肠杆菌的菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌的生长(shngzhng)和抑制其他微生物的生长(shngzhng)。例如：鉴别(jinbi)大肠杆菌培养基共一百零一页大肠杆菌(d chn n jn)呈 黑色中心 ,有或无金属光泽大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型(dinxng)特征 共一百零一页

27、本课题知识(zh shi)小结:共一百零一页七、例题(lt)解析 例1对细菌群体生长(shngzhng)规律测定的正确的表述是A在液体培养基上进行 B至少接种一种细菌 C接种一个细菌 D及时补充消耗的营养物质 解析：细菌群体生长规律的测定是人们在一定条件下进行的。这些条件是：一种细菌、恒定容积的培养基，液体培养基、定时测定细菌总数。在这些条件下，才能测定出细菌的生长规律。测定时只能用一种细菌的子细胞群体的变化规律表达微生物的生长；恒定容积是给微生物提供一定的生存环境；液体培养基才能通过样品推测细菌总数。若接种多种细菌，则会发生种间斗争而不能测定一种微生物的生长规律。在接种时，要保证一定的接种量

28、。答案：A共一百零一页例2在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著(xinzh)最激烈的时期是A调整期 B对数期 C稳定期 D衰亡期解析：种内斗争是一种生态因素。种内斗争反应了种内生物对生存空间(shn cn kn jin)和生活资源的争夺。在生活空间充裕，营养充足的时候，种内斗争的程度是比较低的。随着微生物个体数目的增加，每个个体的生存空间(shn cn kn jin)越来越少，营养物质也越来越少，每个个体对生存空间(shn cn kn jin)和资源的争夺也越来越激烈，种内斗争就越来越激烈。由此可知，在稳定期的种内斗争最激烈。在衰亡期，微生物的数目已经开始减少，pH已经极度不适于微生物

29、的生存，次级代谢产物积累到很高的程度，这时的微生物的生存斗争主要是与无机环境的斗争。答案：C共一百零一页例3（2005年江苏）抗生素作为治疗细菌感染的药物，其高效性和巨大的经济价值使抗生素工业经久不衰。其中青霉素的发现和应用具有划时代的意义。青霉素发酵产生青霉素。青霉菌的新陈代谢类型是 ，青霉素是青霉菌的 代谢产物。在生产和科研中，常选用处于 期的青霉菌作为菌种或研究材料(cilio)，因为此时的青霉菌代谢旺盛， 和 比较稳定。对青霉菌菌体生长情况的测定：取一定体积的发酵液，经离心分离、反复洗涤后， ，再计算发酵罐中菌体的总重量。异养需氧型次级(c j)对数个体的形态生理特性称菌体的湿重（称烘

30、干后的重量）共一百零一页二.实验的具体操作 .土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌(mi jn)。.制备培养基：制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。共一百零一页.样品(yngpn)的稀释：应在火焰旁称取土壤10g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。在稀释土壤溶液的过程中，每一步(y b)都要在火焰旁进行。分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保证获得菌落数在30300之间、适于计数的平板。细菌稀释度为104、105、106，放

31、线菌稀释度为103、104、105，真菌稀释度为102、103、104。共一百零一页P24旁栏思考题： 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？答：这是因为土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择(xunz)培养的条件。共一百零一页.取样(qyng)涂布实验时要对培养(piyng)皿作好标记。注明培养(piyn

32、g)基类型、培养(piyng)时间、稀释度、培养(piyng)物等。如果得到了2个或2个以上菌落数目在30300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。共一百零一页.微生物的培养(piyng)与观察 在菌落(jnlu)计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当事先规划时间。 培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在3037培养12d，放线菌一般在2528培养57d，霉菌一般在2528的温度下

33、培养34d。共一百零一页思考与讨论在微生物培养过程中，为什么每隔24h统计一次菌落数目？菌种鉴定的依据是什么？答：不同种类的微生物，往往需不同的培养温度和培养时间，每隔24h统计1次菌落数目，选取菌落数目稳定时记录作为结果(ji gu)，这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。不同种类的细菌形成的菌落，在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一度的特征，菌落特征可作为菌种鉴定的重要依据。共一百零一页三.结果分析与评价1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解(fnji)尿素的微生物。2.提示：选择每个平板

34、上长有30300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。共一百零一页四.课外延伸 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入(jir)酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。测定饮水中大肠杆菌数量的方法(fngf)是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红美蓝 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。共一百零一页二 实验设计1. 实验设计的内容(nirng)包括：实验方案、材料用具(yngj)、实施步骤和时间安排等。共一百零一页二 实验设计1. 实验设计

35、的内容(nirng)包括：2. 实验(shyn)流程：实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。共一百零一页二 实验设计1. 实验设计的内容(nirng)包括：2. 实验(shyn)流程：实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。（1）土壤取样共一百零一页二 实验设计1. 实验设计的内容(nirng)包括：2. 实验(shyn)流程：（1）土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。共一百零一页二 实验设计（2）样品(yngpn)的稀释共一百零一页二 实验设计（2）样品(yngpn)的稀释共一百零一

36、页将待测样品经过一系列的稀释，然后(rnhu)选择三个稀释度的菌液均匀涂布在平板上，然后培养。共一百零一页 因为(yn wi)不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保证获得菌落数在30300之间。 不同。共一百零一页为了结果接近真实(zhnsh)值，可将同一稀释度菌液涂布到3个或3个以上的平板上，经培养，计算出菌落的平均数。共一百零一页计算公式：每克样品(yngpn)中的菌株数 =（CV）M共一百零一页计算公式：每克样品(yngpn)中的菌株数 =（CV）M某同学(tng xu)在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为

37、0.1ml） ( )A. 2.34108B. 2.34109C. 234D. 23.4 共一百零一页某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落(jnlu)数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml） ( )A. 2.34108B. 2.34109C. 234D. 23.4 B计算公式：每克样品(yngpn)中的菌株数 =（CV）M共一百零一页二 实验设计2. 实验(shyn)流程：（3）微生物的培养(piyng)与观察共一百零一页二 实验设计2. 实验(shyn)流程：（3）微生物的培养(piyng)与观察培养皿编号：104、105、106各编号三个培养皿。共一百零一页二 实验设计2. 实验(shyn)流程：（3）微生物的培养(piyng)与观察培养皿编号：104、105、106各编号三个培养皿。每个培养皿加入牛肉膏蛋白胨琼脂培养基15ml。共一百零一页二 实验设计2. 实验(shyn)流程：（3）微生物的培养(piyng)与观察培养皿编号：104、105、106各编号三个培养皿。每个培养皿加入牛肉膏蛋白胨琼脂培养基15ml。用移液管按照编号分别加入不同浓度土壤稀释液各0. 1ml，转动培养皿，使土壤稀释液与培养基混合均匀。共一百零一页二 实验设计2. 实验(s