2.2.25 紫外—可见分光光度吸收法

1、2.2.25紫外可见分光光度吸收法吸光度的检测：溶液的吸光度可以定义为以10为底的单色光辐射的透光率的倒数的对数。A=log10（1/T）=log10（I0/I）T=I0/II0=单色光反射的入射光强度上单色光反射的透射光的强度吸光度A与辐射路径的长度和溶液中物质的浓度成正比:A=cb二摩尔吸光度，当b的单位是厘米，c的单位是摩尔每升时。A1%代表10g/L的溶液在1cm比色池中在特定波长下的吸光度。1cm10E%=1cmMr除另有规定外，用1cm的比色池在规定的波长下测得吸光度。除非另有规定，测定时对照采用相同的溶剂或者相同的混合溶剂。溶剂在规定波长处以空气为空白对照的吸光度不应该超过0.4

2、，最好是小于0.2。将吸光度或者吸光度的函数作为纵坐标，波长或波长的函数作为横坐标绘制吸收图谱。如果专论中规定的最大吸收处的单一值，则可认为测得值不超过2nm。仪器适用于紫外及可见区光谱测定的分光光度计由一个能在200-800nm范围内提供单色光的光学系统和一个测定吸光度的测定装置所组成。波长的控制用钦高氯酸盐溶液R的最大吸收、氢或氘高压灯、汞蒸汽来确认波长范围的准确性。如表2.2.25-1所示。在紫外区域的偏差为1nm,在可见光区的偏差为土3nm.。也可以用已校验过的标准物质来确认波长范围的准确性。表2.2.25-1控制波长范围的最大吸收241.15nm(Ho)404.66nm(Hg)253

3、.7nm(Hg)435.83nm(Hg)287.15nm(Ho)486.0nm(Dp)302.25nm(Hg)486.1nm(Hp)313.16nm(Hg)536.3nm(Ho)334.15nm(Hg)546.07nm(Hg)361.5nm(Ho)576.96nm(Hg)365.48nm(Hg)579.07nm(Hg)吸光度的控制用合适的滤片或重铬酸钾溶液R来确认吸光度的准确性。表2.2.25-2给出了重铬酸钾溶液R的吸收波长的准确值和特征吸光度的允许范围。表示根据吸光度的偏差为土0.01制定的。对于吸光度的控制，重铬酸钾在使用之前要在130下干燥至恒重。对于波长为235nm、257nm、31

4、3nm、350nm的吸光度的确认，取57.063.0mg的重铬酸钾R用0.005M的硫酸R溶解并稀释至1000.0ml。对于波长为430nm的吸光度的确认，取57.063.0mg的重铬酸钾R用0.005M的硫酸R溶解并稀释至100.0ml0也用已校验过的标准物质来确认吸光度的准确性。表2.2.25-2波长（nm）特征吸收A1%1cm最大接受限度235124.5122.9to126.2257144.5142.8to146.231348.647.0to50.3350107.3105.6to109.043015.915.7to16.1杂散光的限度可以用合适的滤片或溶液在规定的波长处检定杂散光。例如：

5、用水作为补偿溶液时，12g/L的氯化钾R溶液在1cm比色池中的吸光度在220nm到200nm之间陡然增大，且比198nm处的吸光度大2.0。也用已校验过的标准物质来确认杂散光的限度。分辨能力（用于定量分析）当专论中规定时，按以下测量仪器的分辨能力：记录0.02%（v/v）的甲苯正己烷溶液的图谱。在最大吸收处269nm的吸光度与在最小吸收处266nm处的吸光度的比率的最小值应符合专论中的规定。也用已校验过的标准物质来确认分辨能力。光谱的狭缝宽度（用于定量分析）为了避免光谱狭缝宽度引起的误差，当使用的仪器在选择的波长时其狭缝宽度是变化的，则要求其狭缝宽度与吸收带的半宽度相比应小一些，但是它又必须能

6、够获得较大的I0值（入射光强度）。所以应逐步降低狭缝宽度而不引起吸光度读数的改变。比色池比色池的光路长度的偏差为0.005cm。当使用相同溶剂时，比色池中包含供试品溶液和参比溶液必须具有相同的透光率。否则必须进行校正。比色池必须洁净并小心使用。分光光度法的衍生衍生分光光度法涉及吸收光谱（零级）转化为一级、二级或更高级图谱。一级衍生光谱图是吸光度曲线（吸光度与波长的变化率dA/d入）与波长的梯度图。二级衍生光谱图是吸光光谱与波长的曲率图（d2A/D入2）。在任何波长下的二级衍生图通过以下方程与浓度建立关系：d2Ad2A1%c0dd2A1Qcb=icm?d入2d入210d入210c吸收溶液的浓度，g/L0仪器：使用符合以上要求的仪器，并且安装有模拟耐电容区分组件或者数字微分器或其他产生衍射图谱的装置。一些产生二级图谱的方法相对于零级图谱产生一个波长转移，这个是需要考虑的。分辨力：当在药典中有规定时，记录0.02%（v/v）甲苯的甲醇溶液的二级衍生图谱，甲醇作