分子ti终结版(共76页)

1、 - 2-DE 双向凝胶电泳agarose gel AG琼脂糖凝胶 alkaline phosphatase碱性(jin xn)磷酸酶 anchored PCR 瞄定PCRannealing退火(tu hu)asymmetric PCR不对称(duchn)PCR Biochip 生物芯片biomacromolecule生物大分子 blunt end平末端 BMS生物质谱C value paradox C值矛盾 chromosomal genome染色体基因组 cloning vector克隆载体 colony hybridization 菌落杂交comparative proteomics比较

2、蛋白质组学 competent cell 感受态细胞confirmatory sequencing 确证性测序conventional pseudogene常规假基因 covalently closed circular cccDNA 共价闭合环状denaturation 变性diethyl pyrocarbonate DEPC焦炭酸二乙酯 DNA ligaseDNA连接酶 DNA relaxed plasmid松弛型质粒 DNA unequal crossing over不均等交换 dot mutation 点Dot-blot 斑点杂交ESI电喷雾电离eukaryote真核生物 expres

3、sion vector 表达载体FQ-PCR y荧光定量PCRfunctional genomics功能基因组学 functional proteomics功能蛋白质组学 Gene Chip 基因芯片genetic engineering 基因工程genetic map遗传图谱 genome基因组 genomic library基因组文库 genomics基因组学 human genome diversity人类基因组多样性 human genome project人类基因组计划 In situ hybridization 原位杂交incompatibility质粒的不相容性 insertio

4、n sequence插入序列 interaction proteomics相互蛋白质组学 Inverse PCR 反向PCRLaboratory on Chip微缩芯片实验室LCR 连接酶链反应long termical repeat sequence LTR长末端重复序列 MALDI-TOF-MS 基质辅助激光斛吸电离时间MALDI基质辅助激光斛吸电离meolecular biology 分子生物学Meolecular diagnostic分子诊断学microsatellite DNA微卫星model organisms模式生物molecular diagnosis 分子诊断molecula

5、r hybridization 分子杂交moleculer cloning 分子克隆MS 质谱分析mucleosome核小体 mulitiple cloning sites MCS多克隆位点 multigene family多基因家族 nested PCR 巢氏PCRnick translation 缺口平移法nucleic probe 核酸探针 nucleoid类核 overlapping gene重叠基因 palindrome structure回文结构 PCR-OLA PCR-寡核苷酸连接实验physical map物理图谱 PME肽质量指纹图谱 polyacrylamide PAG聚丙

6、烯酰胺凝胶polycistron多顺反子 processed psudogene加工假基因 prokaryote原核生物 Protein chip 蛋白质芯片proteome蛋白质组 proteomics蛋白质组学 pseudogene假基因 recombinant PCR 重组PCRreplication slippage复制滑移 reporter gene报告基因 restricition endonuclease限制性核酸内切酶 restriction fragment length polymorphysms RFLP限制性片段长度多态性 RFLP 限制性片段长度多态性分析RT-PCR

7、逆转录PCRSCP单链构象多态性SDSsegmented genome分段(fn dun)基因组 short interspersed nuclear element短散布(snb)核元件 shuttle vector穿梭(chun su)载体 single nucleotide polymorphism 单核苷酸多态性specific activity比活 split gene断裂基因 SSCP 单链构型多态性分析法SSRstability 质粒的稳定sticky end黏性末端 stringent plasmid严紧型质粒 structural genomics结构基因组学 structu

8、ral proteomics结构蛋白质组学 Tap DAN polymerase Tap DAN聚合酶terminal deoxynucleotidy transferase TdT末端脱氧核糖核苷酰转移酶 terminal redundancy末端冗余 Tm 融斛温度质谱toll enzyme工具酶 transcriptome map转录组图谱 transposable element转座因子 Tumor marker肿瘤标志物unique sequence单一序列 vector载体 Bbiomacromolecule:生物体内由分子量较低的基本结构单位首尾相连形成的多聚化合物.CC val

9、ue paradox C值矛盾：生物体的进化程度与基因组大小之间不完全成比例的现象。cDNA-library 互补DNA文库，存在于转化细胞内由克隆载体所携带的一个细胞的在某一时刻的所有cDNA片段的集合。Clone 克隆：来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。Cloned animal 克隆动物cloning vector 克隆载体：能将外源基因在受体细胞中复制扩增并产生足够量目的基因的载体称为克隆载体。 cloning 克隆化：获取同一拷贝的过程称为克隆化，即无性繁殖。Cot1/2: 表示单链DNA的起始浓度与复性一半所需时间之积（mol.s/L），与复性速率成反比DNA聚合酶的酶促反应，通

10、过变性，退火，延伸三个基本反应的循环过程，使靶DNA片段得到大量扩增。Eessential gene必需基因：生物体中存在的一些维持生物细胞生长所必需的基因，缺失或突变这些基因均能导致生物体死亡。exon外显子：在断裂基因及其初级转录产物上出现，并表达为成熟RNA的核酸序列。expression vector表达载体：能将外源基因在受体细胞中有效转录和正确翻译的载体。 FFluorescence in situ hybridization（FISH）：荧光原位杂交，是将核酸探针用特殊的非放射性标记物标记，然后直接杂交到染色体或DNA纤维切片上，再用与荧光素分子偶联的单克隆抗体与探针分子特异性识

11、别结合，经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。functional genomics 功能基因组学：研究基因组中各基因的功能，包括基因的表达及其调控模式的学科。 split gene断裂基因：大多数真核生物的基因是断裂的，是由外显子和内含子间隔组成的不连续基因。GGene chip基因芯片：将大量的基因片段有序的、高密度的固定排列在载体上制成点阵，称为、genetic engineering 基因工程，将基因进行克隆，并利用克隆的基因在受体细胞内复制、转录和翻译表达，制备特定的蛋白质或多肽产物，多定向改造细胞和个体的特性所用的方法及相关工作统称为基因工程。Gene基因(

12、jyn)：是存在于染色体上的具有特定的遗传功能的DNA片段，可分为(fn wi)mDNA、tDNA和rDNAD，就病毒而言，基因也可以是基因片段。Genome 基因组：指生物体全套的遗传信息，包括所有的基因(jyn)和基因间的区域。 Genomics基因组学：是研究生物基因组的组成、组内各基因的结构、功能及表达调控的科学，包括基因组核苷酸序列测定、基因组作图、基因定位及基因功能分析等。 G-Library 基因文库：存在于转化细胞内由克隆载体所携带的一个物种的所有基因组DNA片段的集合。HHGP人类基因组计划：是旨在测出人类基因组30亿碱基对的核苷序列，发现所有人类基因并确定它们在染色体上的位

13、置，破译人类全部遗传信息，发展基因组学新技术，探讨人类基因组研究的社会、法律与伦理等问题的一个国际性研究项目。hot start PCR：即热启动PCR，是PCR技术优化参数的一种，是通过控制PCR反应的必须组分如DNA聚合酶或mg离子，直到反应混合物被加热到可以阻止非特异性产物的产生。human genome diversity 人类基因组多样性：同一人种或不同人种的基因组之间存在的或多或少的差异。Iin situ hybridization：原位杂交，将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交，称为原位杂交。in situ PCR原位PCR：是技术和原位杂交技术结合的产物，其基本过程是，

14、先用合适的固定剂固定组织或细胞，然后用蛋白酶对细胞进行通透处理，以确保试剂进入细胞并同靶序列接触，最后用于Eppendorf管中或载玻片对DNA和RNA进行细胞内原位扩增然后进行产物分析并用显微镜观察结果incompatibility of plasmid质粒的不相容性：利用同一复制和维持机制的两个不同质粒会在复制和随后向子代细胞分配的过程中相互竞争，因而不能在同一宿主细胞内稳定存在，其中一种质粒将被丢失，这种现象称为质粒的不相容性。intron内含子：是隔断基因的线性表达而在剪接过程中被除去的核酸序列。 isocaudarner 同尾酶：识别序列不完全相同，但切割DNA后，产生相同的粘性末端

15、，这样的酶称为同尾酶。isoschizomer同功异源酶：来源不同的限制酶，但能识别和切割同一位点，这些酶称同功异源酶。KKlenow fragment Klenow片段，枯草杆菌蛋白酶将DNA聚合酶裂解为大小两个片段，大片段分子量76000，这个片段也成为Klenow片段，它具有5 3聚合酶活性及3 5 外切酶活性，而失去了5 3外切酶活性。LTR长末端重复序列：逆转录病毒（retrovirus）基因组RNA在转录后生成的双链DNA中，两端形成LTR结构。MM&G法化学降解法：首先对待测双链或单链DNA作末端（5端或3端）放射性标记，标记后的DNA分成4组，分别用不同的化学试剂对不同的碱基进

16、行特异性的化学切割，通过控制化学反应条件，使碱基的断裂只随机发生在某一个特定的位点，由此各组均产生不同长度的DNA片段，通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，放射自显影检测后直接识读待测DNA的核苷酸序列。MCS 多克隆位点：载体上多个限制酶的单一切点(即在载体的其他部位没有这些酶的相同切点)。Molecular Biology 在分子水平上探讨生命的本质，研究生物大分子的结构、功能和它们之间的相互作用及其代谢调控的科学。Molecular cloning 分子克隆：按照人的意愿，在体外将制备的DNA片段与载体重组，然后导入受体细胞，并在受体细胞中复制、扩增，以获得该DNA分子的大量拷贝，

17、此过程称为分子克隆，也称基因克隆或DNA克隆或重组DNA Molecular Diagnostics 以分子生物学理论为基础，利用分子生物学的技术和方法来研究人体内源性或外源性生物大分子和大分子体系的存在、结构或表达调控的变化，为疾病(jbng)的预防、预测、诊断、治疗和转归提供信息和决策依据。 multigene family 多基因(jyn)家族：起源相同(xin tn)、序列相似、功能相关的一组基因。NNorthern blot：Northern印记杂交指将待测RNA从凝胶转移到固相支持物上与标记的DNA探针进行杂交的印记技术; nucleoid类核：细菌染色体DNA 与支架蛋白和RNA

18、结合在一起，在胞内形成一个较为致密的区域。Ooperon 操纵子：操纵子结构是原核生物基因组的功能单位，是原核生物基因组的一个突出的结构特点，其中结构基因的转录产物为多顺反子ORF开放读码框架：由5断AUG开始到终止密码子AU，叫一个ORF，只编码一个多态链。（位于起始密码子和终止密码子之间的核苷酸序列称为开放阅读框架，决定了多肽链的氨基酸序列。）overlapping gene重叠基因：是指两个或两个以上基因的ORF共有一段DNA序列，即某段DNA序列成为两个或两个以上基因共有的组成部分。PPCR:即聚合酶链反应，是模拟体内DNA复制过程，在试管内，利用模板DNA、引物和4种dNTP，依赖于

19、proteomics即蛋白质组学，指有一个基因组或一个细胞、一种组织表达的所有蛋白质。Rreal time FQ-PCR：实时荧光定量PCR, 在荧光定量PCR反应中，引入荧光物质，在每经过一个循环后产生一个荧光强度信号，利用荧光信号累积及荧光强度变化量实现对整个PCR过程实时监测，即实时荧光定量PCR。Restriction endonuclease 限制性核酸内切酶：是一类能识别和切割双链DNA 特定核苷酸序列的核酸内切水解酶。RT-PCR：逆转录PCR，是以RNA为模板经逆转录酶作用逆转录成cDNA，在加入特异引物对目标片段进行PCR扩增的技术。Ssegmented genome 分段基

20、因组：是指病毒基因组由几条不同的核酸分子组成，多见+RNA病毒、RNA病毒及双链RNA病毒。shuttle vector 穿梭载体：人工构建的既带有原核细胞的复制元件 、又带有真核细胞的复制元件，既能在原核细胞中复制、又能在真核细胞中复制，在原核和真核细胞分子克隆中均能应用的载体，称为穿梭载体。SNP单核苷酸多态性：单个核苷酸变异而形成的DNA分子多态。SNP在人基因组中发生频率高，是最常见的基因组差异Southern blot ：Southern印记杂交指经凝胶电泳分离的待测DNA片段转印并结合到一定固相支持物上，然后用标记的探针DNA分子检测靶DNA的一种方法stability of pl

21、asmid质粒的稳定性：质粒在宿主细胞内稳定地存在而不丢失，称为质粒的稳定性。structural genomics 结构基因组学：制作人类基因的遗传图和物理图，最终完成人类和其他重要模式生物的全部基因组DNA序列测定的学科。structure gene结构基因：能转录出RNA的DNA区段，称为结构基因。STR短串联重复序列：又称为卫星DNA，是一种广泛分布于真核生物基因组中的串状简单重复序列。TTaqMan 技术:荧光探针技术的一种，是利用Taq酶的5外切酶活性，当引物延伸至被荧光探针结合的模板处，Taq酶将5端的带有荧光分子的核苷酸切割下来 ，其产生的荧光分子数与PCR数成比例TD-PCR

22、; 即降落PCR，是PCR技术优化参数的一种指在设置(shzh)循环参数时，让退火温度从选定温度的最高温度开始，逐步降低退火温度（每次降低15），最后结束(jish)在选定温度的最低温度。terminal redundancy 末端正向(zhn xin)重复序列：又称末端冗余，是指病毒双链DNA分子两端有一段相同的核苷酸序列。Tissue microarray组织芯片是将成千上万的不同组织标本按预先设计的顺序排列固定在一张载玻片上所形成的微距列，是生物芯片技术的重要分支。Transposition转座：由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为转座。VVector 载体：能携带外源DNA片段导

23、入宿主细胞进行扩增或表达的工具，其化学本质为DNA分子。Western blot是将蛋白质电泳、印迹、免疫测定融合为一体的特异性的蛋白质检测方法YAC 酵母人工染色体，是利用酵母染色体DNA和大肠杆菌pBR322改造而成，主要由着丝粒、端粒、复制子和外源DNA构成的线状DNA分子，具有天然酵母染色体的许多特征和生物性状。不对称 PCR：asymmetric PCR、目的：用于获得单链DNA原理：采用两条浓度不同的引物，即高浓度引物和低浓度引物，二者之比为（50100）:1。在PCR最初的10 15个循环中，扩增产物主要是双链DNA；第15个循环以后，低浓度引物已被耗尽，高浓度引物介导的扩增就会

24、产生大量的单链DNA。巢式PCR：nested PCR、使用两对引物，一对引物序列在模板的外侧，用于扩增含目的基因的大片段，另一对引物在模板的内侧，用于扩增目的基因，第一对引物做PCR的扩增产物作为第二对引物退火的模板，再进行第二对PCR，这样经过两次PCR放大，灵敏度得以提高。定量 PCR：quantitive PCR、目的：是通过对PCR终产物的分析或PCR过程的检测，对PCR起始模板进行检测。原理是以PCR扩增反应动力学为基础，用N0代表PCR反应体系中的原始模板数，n为扩增次数，N为扩增产物量，E代表扩增效率，那么N=N0(1+E)n.。断裂基因（split gene）：真核生物的结构

25、基因，由若干个编码区和非编码区相间隔但又连续镶嵌而成，为一连续的氨基酸组成的完整的蛋白质编码，或为具有特殊功能的tRNA或rRNA编码，因此称为断裂基因。 并非真核生物所有的结构基因均为splitting gene 例：组蛋白基因家族、干扰素、酵母中多数基因 多重（PCR）：multiplex PCR、目的：主要用于多种病原微生物的同时检测，或病原微生物、遗传病及癌基因的分型鉴定。原理：在一个反应体系中加入多对引物，同时扩增出多个核酸片段，由于每对引物扩增的片段长度不同，可用电泳加以鉴别。反向 PCR：inverse PCR、目的：用于快速扩增已知序列以外的未知DNA片段，从而对未知序列进行分

26、析研究原理：首先用已知序列和带扩增序列都没有切点的限制性核酸内切酶将模板DNA消化，再用连接酶使酶切产物环化，使已知的和待扩增的未知序列都包括在环中。在已知序列内设计一对反向的引物，即可扩增已知序列以外的区域。分子信标技术：荧光探针技术的一种，原理是游离状态下，分子信标（带荧光标记的单链寡核苷酸探针）成茎环发夹结构，使荧光剂和淬灭剂紧密接触导致荧光淬灭，单链寡核苷酸探针由于与靶基因碱基序列互补而与之杂交，是探针5和3端分离，淬灭剂对荧光剂的淬灭作用消失产生荧光。 核酸分子杂交（nucleic acid hybridization）:利用核酸变性和复性的性质，使具有一定同源性的两条核酸单链在一定

27、条件下按照碱基互补配对原则形成异质双链的过程。 核酸(h sun)探针:是指能与特定靶基因序列发生(fshng)特异性互补结合，并可用特殊方法检测的被标记的已知核酸序列。 假基因：在多基因家族中，有的家族成员(chngyun)因突变而失活，不能表达出有活性的基因产物，这些基因被称为假基因。RT-PCR、先将RNA用逆转录酶逆转录成cDNA,然后再加入特异引物对目标片段进行扩增，扩增产物的分析与其他常见PCR类似。切口平移法（nick translation）:利用酶促反应将标记的dNTP掺入到新合成的DNA链中, 从而获得高比活性的DNA探针。生物芯片技术：是指通过微加工和微电子技术，在固相基

28、质表面集成了成千上万密集排列的分子微阵列，以实现对组织，细胞、核酸、蛋白质及其他生物分子进行高效、准确、高通量检测。双脱氧链末端终止法：利用DNA聚合酶，以单链或双链DNA为模板，以dNTP为底物，其中一种dNTP带放射性核素标记（或者引物末端核素标记），在四组互相独立的反应体系中分别加入不同的2，3双脱氧核苷三磷酸作为链反应终止剂，根据碱基配对原则，在测序引物引导下，合成四组有序列梯度的互补DNA链，然后通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，放射自显影检测后识读待测DNA的互补序列。随机引物:是人工合成的由6个核苷酸残基构成的寡核苷酸片段的混合物这是在计算机分析的了生物基因组六核苷酸排列

29、的多种可能性的基础上设计的顺序探针（probe）:广义上指的是能与特定靶分子发生特异性相互作用，并能被某些方法所检测的分子 。消除（curing）受环境因素影响导致质粒丢失的过程称为消除。黄连素具有在动物体内消除质粒的作用。原位 PCR：in situ PCR原理：是先用合适的固定剂对组织或细胞进行固定，然后用蛋白酶对细胞进行通透处理，以确保PCR试剂进入细胞并同靶序列接触，最后于Eppendorf管中或载玻片对DNA和RNA进行细胞内原位扩增。目的是原来的位置上进行扩增质粒的稳定性（stability）质粒在宿主细胞内能稳定存在不被丢失称为质粒的稳定性。重组PCR：recombinant P

30、CR利用PCR技术，使两个不相邻的DNA片段重组在一起的方法，称重组PCR绪论1分子诊断(zhndun)的指标包括哪几种？DNA、RNA、protein2用于分子(fnz)诊断的主流技术包括哪几种？PCR、DNA测序和分子杂交技术一起，成为现在分子诊断学研究(ynji)使用的主流技术。3未来分子诊断的四个主要发展方向是什么？商业化的分子诊断学；个体化医疗；治疗诊断学；纳米诊断学。4第一个实践分子诊断的人类单基因遗传病是什么？镰状红细胞贫血5哪3种分子生物学方法构成了整个现代分子生物学的实验基础？分子克隆、PCR及DNA序列分析这三位一体的实验方法几乎构成了整个现代分子生物学实验的基础。基因和基

31、因组1人类基因组的单倍体全长为多少？答：30亿个碱基对的序列，估计约含10万个基因。2在人类基因组中，genic sequence占多少?；coding sequence占多少？答：33%65%之间；53%3.基因按照功能可分为哪两类？答：结构基因和调控基因。4.基因的大小取决于什么？答：基因的大小主要取决于内含子的有无、大小及数量。5.目前，了解一个物种的基因总数的方法主要有哪几种？答：对于已经测出全序列的物种，应用生物信息学方法，利用相关软件搜寻基因组中的ORF可以估算出基因数量。对于仅知道基因组大小的物种，根据已知基因及其间隔区的平均大小也能推算测基因的数量。6.真核生物核基因组结构和功

32、能特点？A、细胞核基因组由染色体DNA组成：真核基因组庞大且结构复杂，为线性双链DNA分子存在于染色体中。B、大多数真核生物的基因是断裂的，是由外显子和内含子间隔组成的不连续基因。C、真核生物基因组中含有大量的重复序列，这是真核生物基因组的重要特征。D、真核基因组的另一个结构特点是存在多基因家族和假基因E、无操纵子结构，真核生物基因转录产物为单顺反子。F、真核生基因组内编码序列所占的比例远远小于非编码序列。7.真核生物基因组重复序列主要包括哪几类？A、单拷贝序列（unique sequence）亦称非重复序列（nonrepetitive sequence）:在一个基因组中只有一个拷贝或2-3个

33、拷贝。B、轻度重复系列（minor repetitive sequence):拷贝数介于4-10之间。C、中度重复序列（moderately repetitive sequence）：拷贝数介于10-几千之间。D、高度重复序列（highly repetitive sequence）：1万-几百万个拷贝。8.举例说明什么是多基因家族？基因簇：如人组蛋白基因簇分布在第7号染色体长臂3区2带至6带之间的区域内。基因家族成员在整个染色体上散在分布，甚至位于不同染色体上：如人和珠蛋白基因分别存在于16和11号染色体上，但二者各自的染色体上又形成基因簇。9.什么是假基因？假基因可分为哪两种类型？在多基因家

34、族中，有的家族成员因突变而失活，不能表达出有活性的基因产物，这些基因被称为假基因。据假基因产生的机制分类：常规假基因（conventional psudogene）和加工假基因（processed psudogene）10.真核生物的细胞器基因组具有哪些特点？母系遗传；线粒体DNA损伤后不易修复；遗传密码与通用密码有差别。11.人类DNA分子多态性产生的几种主要方式是什么？（一）微卫星DNA多态性（microsatellite DNApolymorphism）重复序列单元的拷贝数的变异导致了微卫星DNA多态性。（二）Alu序列多态性：Alu序列多态性是由可转座元件导致的分子多态。（三）SNP单

35、核苷酸多态性是由于单个核苷酸变异而导致的DNA分子多态。12.原核生物核基因组结构和功能特点？基因组较小，仅由一条环状双链DNA分子组成，具有(jyu)类核（nucleoid）结构。具有(jyu)操纵子（operon）结构：操纵子结构是原核生物基因组的功能单位，是原核生物基因组的一个突出的结构特点，其中结构基因的转录产物为多顺反子（polycistron）。除rRNA与tRNA外，原核生物(shngw)的结构基因均为单拷贝基因。编码蛋白质的基因是连续的，无内含子结构，这是与真核生物基因组的主要区别。基因组内非编码序列远远小于编码序列，不编码的DNA序列约占全基因组的10%，比真核生物少得多。基

36、因组中存在重复序列，但很少。DNA分子中有各种功能区，这些功能区域往往有反向重复序列，能形成特殊的结构。13.影响质粒稳定性的因素是什么？宿主细胞分裂时质粒能否均衡地分配到子代细胞；质粒自身分子结构的稳定性。14.原核生物基因组中的可移动的DNA序列主要包括哪几种？插入序列（insertion sequence, IS）转座子（transposons，Tn）可转移性噬菌体（transposable phages）15.简述病毒基因组的核酸类型？病毒核酸与所有的原核、真核生物的核酸比较，最为突出的特点是每种病毒颗粒只含1种核酸，据此，将病毒分为DNA病毒和RNA病毒。4种不同的类型:双链DNA（

37、double-stranded DNA, dsDNA）;单链DNA（single-stranded DNA, ssDNA）;双链RNA（double-stranded RNA,dsRNA）;单链RNA（single-stranded RNA, ssRNA）16.病毒基因组结构和功能特点？帽子和poly（A）结构:对RNA有保护作用，防止被宿主细胞的核酸外切酶降解。与病毒的感染性有关黏性末端:指病毒基因组双链DNA分子两端具有能够互补的单链DNA部分。末端正向重复序列:指双连DNA分子两端有一段相同的核苷酸序列。末端反向重复序列:病毒基因组两端的反向互补重复序列。重叠基因:病毒基因组的一段DNA

38、序列有两个或两个以上的ORF，可以编码两种或两种以上多肽链分段基因组:指病毒基因组由数条不同的核酸分子组成。长末端重复序列(LTR)17.病毒基因组特点。1、有特殊的末端序列：粘性末段、反向互补序列、长末端重复序列、帽和尾结构等；2、结构紧密，体现在不仅非编码序列少，而且有重叠基因的存在真核生物18.质粒DNA的提取方法有哪些？原理分别是什么？碱裂解法染色体DNA比质粒DNA分子大的多，且染色体DNA为线性分子，而质粒DNA为共价闭合环状分子；强碱条件下，变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀。而超螺旋质粒DNA分则以融解状态存在液相中，从而抗体通过离心将两者分开。共价闭环的质

39、粒DNA在回到中心pH时即恢复其天然构象。煮沸裂解法细菌悬浮于含TritonX100和溶菌酶的缓冲液中，前者能破坏细胞壁，再用沸水浴裂解细胞，并使细胞的蛋白质与DNA变性，质粒DNA因结构紧密不会解链，冷却时即恢复其天然构象，通过离心将两者分开。SDS裂解法细菌悬浮于等渗的蔗糖溶液中，用溶菌酶和EDTA处理以破坏细胞壁，再用SDS裂解去壁细胞，温和地释放质粒到等渗液中，然后酚/氯仿抽提，乙醇沉淀，洗涤质粒DNA。分子克隆1.型限制性核酸内切酶的特点是什么？限制外源DNA，保护自身DNA。型限制性核酸内切酶切割DNA分子可产生哪两类切口？平端切口、粘端切口3. DNA聚合酶和Klenow片段各有

40、哪几种活性?DNA聚合酶有三种活性：5 3外切酶活性；5 3聚合酶活性；3 5外切酶活性Klenow片段：5 3聚合酶活性；3 5外切酶活性4. Taq DNA聚合酶具有哪几种酶的活性？5 3聚合酶活性；依赖于聚合作用的3 5外切酶活性5.逆转录酶的三个功能(gngnng)是什么？依赖(yli)RNA的DNA聚合酶活性；35RNA外切(wi qi)酶活性；DNA指导的DNA聚合酶功能7.理想的克隆载体应该具备哪些条件？表达载体呢？理想的克隆载体具备条件：1）能自我复制；2）有适当的限制酶切位点，便于外源基因的插入。3）有适宜的分子量，具有较高的拷贝数。4）具有合适的筛选标记。理想的表达载体具备

41、条件：1）能自我复制；2）有适当的限制酶切位点，便于外源基因的插入。3）有适宜的分子量，具有较高的拷贝数。4）具有合适的筛选标记。5）与宿主细胞相适应的表达调控元件。8.举例说明分子克隆中常用的质粒载体及其组成特点。pBR322质粒载体组成特点 ：1.含有一个复制起始点（Ori）。2.含有四环素抗性(Tetr )基因和氨苄青霉素抗性(Ampr )基因 。3.含有多个限制性内切酶的单一酶切位点，用于插入外源DNA片段。4.外源基因插入抗性基因，导致标志基因失活。pUC系列质粒载体组成特点 ：1.分子量小、高拷贝数;2.来自 HYPERLINK /techinfo/NucleicAcids/map

42、pbr322.htm t _blank pBR322质粒的Ori和氨苄青霉素抗性基因(Ampr); 3.加入了E.coli lac操纵子的部分结构：启动子（P）、操纵序列（O）、lac Z基因。4.有lac I（调节基因I）。5.来自Wild-M13 phage的MCS。9.什么是分子克隆中的蓝白斑实验？PUC质粒结构中具有来自大肠杆菌lac3操纵子的lac2基因，其编码的肽链可参与互补作用。目的基因插入后，破环的完整性。在重组实验中，可用IPTC诱导lac2基因表达半乳糖苷酶，溶酶能消化Xgal，产生蓝色产物，若lac2基因插入失活，则缺半乳糖苷酶表达，也就不能消化Xgal，菌落为白色，即阳

43、性重组体克隆，此称为蓝白斑实验。10.动物细胞基因克隆的常用载体包括什么？猿猴空泡病毒40(SV40)载体、腺病毒载体、逆转录病毒载体。常用的噬菌体载体有什么？入、M1312.原核生物的表达载体主要是什么？其组成特点？原核细胞的表达载体主要是大肠杆菌表达载体。13.简述分子克隆的基本路线？目的基因的获取 克隆载体的选择和构建 目的基因与载体的连接 DNA导入受体菌 重组体的筛选 克隆基因14.分子克隆中目的基因的获取方法有哪些？1.化学合成法（人工合成DNA片段） 2.逆转录合成cDNA 3.从文库中获取 基因组DNA文库(genomic DNA library) cDNA文库(cDNA li

44、brary) 4.直接从染色体DNA中分离目的基因聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)15.如何筛选和鉴定分子克隆中的阳性重组体？1遗传标记表型特征筛选(1)抗生素抗性标记选择(2)插入失活(3)蓝白斑筛选(4)据插入的外源性DNA片段的性状进行筛选2重组子结构特征的筛选(1)PCR筛选(2)酶切鉴定(3)分子杂交法-原位杂交(4)DNA序列分析16.简述目的基因的获取方法？1化学合成法2基因组DNA制备3cDNA基因文库4聚合酶链反应5反转录合成cDNA。生物大分子1.分离纯化核酸应遵循的总的原则是什么？一是保证核酸分子一级结构的完整性，因为完整的一级

45、结构是核酸结构和功能研究的最基本要求。二是尽量排除其他分子的污染，保证核酸样品的纯度，以满足后续研究的要求。2.分离纯化核酸过程中如何保持核酸的完整性？温度不要过高（0-4）；控制PH值范围(4-10);保持一定离子强度；减少物理因素对核酸的机械剪切力；抑制核酸酶活性。3.分离纯化核酸中应清除的杂质包括哪三个部分？非核酸的大分子污染物，主要是蛋白质、多糖及脂类物质。非需要的核酸分子(fnz)，是指制备DNA时RNA为杂质，制备RNA时DNA为杂质。在核酸(h sun)分离纯化过程中加入的对后续实验有影响的溶液与试剂 。4.浓缩核酸(h sun)最常用且高效的方法是什么？其优点是什么？沉淀是浓缩

46、核酸最常用且高效的方法。其优点是核酸沉淀后，可以很容易将核酸溶液调到所需浓度；还能清除部分杂志和某些盐离子。5.核酸浓度及纯度的鉴定有哪些方法？原理是什么？根据这些方法如何判断核酸浓度及纯度？浓度的鉴定：紫外分光光度法原理：核酸分子中的碱基具有共轭双键结构，可吸收紫外线，最大吸收波长为260nm，在波长为260nm紫外光下，1.000A260（IOD值）的吸收度相当于50g/ml单链DNA：1.000A260=40g/ml单链DNA。若DNA样品中含盐，会使A260偏高。此法测定核酸的灵敏度为0.25g/ml。荧光光度法荧光染料溴化乙锭(EB)，嵌入碱基平面在UV激发下发出红色荧光，强度与含量

47、呈正比。该法灵敏度高达15ng。新型超灵敏荧光染料SYBR Dold可检出低至20pg的dsDNA。纯度鉴定：1.紫外线分光光度法A260/A280的比值来判断有无蛋白的污染。纯的DNA样品A260/A280应为1.8,纯RNA该比值为2.0.比值的升高与下降均提示不纯。荧光光度法用EB等荧光染料示踪的核酸电泳结果可判定核酸制品的纯度。6.DNA和RNA样品的保存有何不同？DNA样品的保存：DNA溶于pH8.0的TE缓冲液中在-70可以储存数年。RNA样品的保存：RNA溶于三蒸水中，在-70保存。若用焦碳酸二乙酯（diethyl pyrocarbonate, DEPC）处理过的水溶解RNA，可

48、通过抑制RNase对RNA的降解而延长保存时间。7.临床诊断常见的标本包括哪些？应从哪几方面进行考虑来选择适宜的分离和纯化核酸的方法？临床诊断常见的标本包括:血液、尿液、唾液、组织、培养的细胞。选择方法应考虑以下问题：a.研究目的：不同的研究目的对核酸的完整性、纯度、产量有不同的要求。b.制备核酸所需要的时间与成本。c.安全性：在不影响核酸制品质量与产量的前提下，选择安全的试剂与制备方案。8.破碎细胞的方法很多，包括哪两大类？各自的优缺点是什么？包括机械法和非机械法。机械剪切作用的主要损坏对象高分子量的线性DNA，因此该类方法不适合真核染色体的DNA的分离和纯化。非机械法可分为干燥法和溶胞法，

49、后者采用适宜的化学试剂与酶能高效裂解细胞，方法柔和，能保证较高的效率与较好的保持核酸的完整性。9.核酸的有机溶剂沉淀法的原理是什么？核酸在水溶液中以多聚阴阳离子的化合物形式存在，它与K+、Na+、Mg+、Li+及NH4+等阳离子形成的盐，通过屏蔽带负电的磷酸基团，使DNA、RNA分子聚集在一起而不溶于有机溶剂。10.紫外分光光度法测定核酸浓度的原理是什么？具体的换算关系是什么？灵敏度是多少？原理是：核酸分子中得碱基具有共轭双键结构，因而可以吸收紫外线，其最大吸收波长为260nm.这一物理特性为溶液中核酸浓度的测定奠定基础。A与浓度之间的换算关系：1.000A260 = 50g/ml ds-DN

50、A1.000A260 = 40g/ml ss-RNA1.000A260 = 33g/ml ss-DNA。灵敏度：0.25g/ml11.采用紫外分光光度法如何对核酸制品的纯度进行鉴定？通过A260与A280的比值来判断有无蛋白质的污染。纯DNA的A260/ A280为1.8；纯RNA的比值为2.0。比值升高或降低均提示不纯。12.如何采用琼脂糖凝胶法对核酸的完整性进行鉴。以EB为示踪剂的核酸凝胶电泳结果可以判定核酸制品的完整性。DNA如果发生降解，电泳图呈拖尾状。完整的或降解很少的总RNA电泳图谱中，三条带的荧光强度应呈特定的比值。靠近涂样的那条带的亮度是第二条带的两倍。否则提示有RNA的降解。

51、13.制备的核酸制品如何进行保存？DNA样品的保存：DNA溶于pH8.0的TE缓冲液中在-70可以储存数年。RNA样品的保存：RNA溶于三蒸水中，在-70保存。若用焦碳酸二乙酯（diethyl pyrocarbonate, DEPC）处理过的水溶解RNA，可通过抑制RNase对RNA的降解而延长保存时间。将核酸制品小剂量分装保存。14.酚抽提法提取哺乳动物细胞(xbo)基因组DNA所需试剂及过程是怎样的？试剂;细胞(xbo)裂解缓冲液（含EDTA、SDS及无DNase的RNase）、蛋白酶K、pH8.0的Tris饱和酚、氯仿、NH4AC、NaAc等盐类、无水乙醇(y chn)、70%-75%乙

52、醇洗涤、TE缓冲液在细胞裂解缓冲液和蛋白酶K的作用下，消化破裂细胞膜和核膜，蛋白质变性并降解成小肽片段或游离氨基酸，核蛋白复合体被破坏，DNA从核蛋白中游离，与蛋白质分开；同时RNase降解RNA。利用酚/氯仿抽提，使蛋白质和DNA分离，在高盐环境下，用乙醇沉淀收集DNA。15.酚抽提法涉及到的主要试剂有哪些？他们的作用是什么？细胞裂解缓冲液：EDTA细胞裂解缓冲液：EDTA为二价金属离子螯合计，可以抑制DNase的活性，同时降低细胞膜的稳定性。SDS：阴离子去污剂，溶解细胞膜和核膜，并乳化脂质，使蛋白质变性，溶解度降低 ；兼备降解DNase的作用。无DNase的RNase：有效水解RNA而避

53、免DNA的消化。蛋白酶K：消化DNase和细胞中的蛋白质。pH8.0的Tris饱和酚：（酚：有效地变性蛋白质，亦能抑制DNase的活性。pH8.0的Tris溶液：保证抽提时DNA进入水相，而避免滞留在蛋白质沉淀层。）氯仿：氯仿可去除核酸溶液中对后续实验有影响的痕量的酚；加速有机相与液相的分离。NH4AC、NaAc等盐类：使核酸沉淀。无水乙醇：有机溶剂沉淀DNA。70%-75%乙醇洗涤：洗涤DNA。TE缓冲液16.简述经典的碱裂解法提取与纯化质粒DNA的原理。在pH12.012.6的碱性环境中及在SDS的作用下，细胞裂解，线性大分子量细菌染色体DNA发生变性，氢键断裂，双链解旋分离为单链。质粒D

54、NA的大部分氢键也会发生断裂，但变性后两条互补链不会完全分离。以酸性高盐缓冲液调节其pH值至中性后，变性的质粒DNA又恢复为原来的超螺旋构型，而染色体DNA不能发生复性，形成缠联的网状结构。染色体DNA、RNA、细胞碎片和变性蛋白质形成复合物，通过离心复合物沉淀，而质粒DNA则保留在上清液中。从而达到分离的效果。通过酚氯仿抽提，无水乙醇沉淀，可得到纯化的质粒DNA。17.制备RNA需要注意哪些？提取RNA最关键的因素是尽量减少RNase的污染，控制RNase对RNA的降解作用，包括去除外源性RNase的污染和抑制内源性RNase的活性。 实验操作环境应清洁，操作人员应戴口罩、手套，塑料制品尽可

55、能使用无菌、一次性塑料制品。 玻璃物品：用0.1%DEPC水溶液浸泡过夜，高压蒸汽灭菌。低温操作，降低RNase的活性。 选择性地使用RNase的变性剂（如酚、氯仿及强烈的胍类变性剂、蛋白酶K、SDS、十二烷基肌氨酸钠）。联合使用RNase的特异性抑制剂（如DEPC等）能有效地防止内源性RNase对RNA的降解。在变性液中加入-巯基乙醇、二硫苏糖醇等还原剂可以还原RNase中的二硫键，有利于RNase的变性、水解及灭活。18.简述酸性异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法分离总RNA的过程。以含异硫氰酸胍、-巯基乙醇和十二烷基肌氨酸钠的变性溶液裂解细胞，然后在pH4.0的条件下，用酚/氯仿抽提细胞裂解溶液

56、，最后通过异丙醇沉淀与75%的乙醇洗涤而获得总RNA。19.mRNA分离纯化的方法有哪些？oligo(dT)-纤维素柱层析法、oligo(dT)-纤维素柱离心法、oligo(dT)-纤维素液相结合离心法、poly(U)-琼脂糖凝胶层析法、磁性球珠分离法20.蛋白质的分离纯化总目标是什么？增加制品的纯度或比活，以增加单位蛋白质重量中靶蛋白的含量或生物活性，即从蛋白混合物中设法去除不要的杂蛋白和变性的靶蛋白，使靶蛋白的产量达到最高值。21.图示说明蛋白质分离纯化的技术路线。蛋白质样品制备SDS分离蛋白质的电转移靶蛋白与抗体的结合显色、分析22分子克隆的五种工具酶及其主要用途？DNA聚合酶 1大肠杆

57、菌DNA聚合酶具有3种酶活性：53聚合酶活性：它能以DNA为模版，以4种脱氧核苷酸为底物，在Mg2+的参与下，从游离3端羟基，以53核酸聚合酶活性是DNA链延伸；35核酸外切酶活性：能保证DNA复制的准确性，把DNA合成过程中的错配的核苷酸去除，在把正确的核苷酸街上去；53外切酶活性：常用于标记DNA探针（切口平移法）。Klenow大片(d pin)段：具有53聚合酶活性及35核酸(h sun)外切酶活性，而失去了53外切(wi qi)酶活性。是分子生物学研究的常用工具酶。35核酸外切酶活性Klenow大片段作用：制作DNA探针合成cDNA第二条链填补双链DNA3凹端DNA测序。2.T4 DN

58、A聚合酶：有35的核酸外切酶活性、53的DNA聚合酶活性。3、Taq DNA聚合酶：有强的53 DNA聚合酶活性和依赖于聚合作用的53核酸外切酶活性。可用于DNA测序及通过聚合酶链反应对DNA分子的特定序列进行体外扩增。4、逆转录酶：依赖RNA的DNA聚合酶活性，具有35RNA外切酶活性能降解RNA-DNA杂交分子中的RNA部分依赖DNA的DNA聚合酶功能。5、末端脱氧核苷酸转移酶：在二价阳离子存在下催化dNTP转移到单链或双链DNA分子的3OH末端。标记DNA的3OH末端；在载体或目地基因3端加上互补的多聚体尾形成人工黏性末端。DNA连接酶的种类和作用:DNA连接酶主要有两种：大肠杆菌DNA

59、连接酶和T4噬菌体DNA连接酶，两者的辅基不同，前者需NAD+，后者需ATP。他们的催化的反应也不尽相同，大肠杆菌DNA连接酶只能连接黏性末端，而T4DNA连接酶既能连接黏性末端，又能连接平末端。重组DNA技术常用后者。碱性磷酸酶的作用和用途:催化去除DNA、RNA或dNTP上的5磷酸基团，用途有除去DNA片段上的5磷酸，以防止自身连接，在使用T4多核苷酸激酶和32P同位素标记前，出去RNA或DNA上5端的磷酸，以进一步用32P标记的磷酸重组磷酸化，是5端被32P标记。T4多核苷酸激酶的作用:标记DNA的5末端；使缺失5末端的DNA发生磷酸化作用。核酸酶S1的作用:可水解双链DNA、RNA或D

60、NARNA杂交分子中的单链部分。出去双链DNA的黏性末端以产生平末端、除去cDNA合成时形成的发夹结构以及分析DNA的茎环结构和DNARNA分子的杂交情况。23.蛋白质分离纯化的总体原则是什么？保证靶蛋白结构的完整，防止降解和活性蛋白的变性；尽量满足研究与诊断对靶蛋白纯度的要求。24.如何保证核酸的完整性?整个操作过程中尽量避免各种有害因素对核酸的破坏；不可避免的有害因素要采取措施尽量减轻对核酸的破坏；细胞应完整，相关器皿及试剂应提前消毒。25.在蛋白质分离纯化过程中细胞破碎的方法有哪些?机械法物理法反复冻融法超声波处理法压榨法冷热交替法酶解法有机溶剂处理法26.蛋白质分离纯化的方法有哪些？依