实验一花粉搜集

1、实验一花粉搜集、贮藏及花粉生活力测定一、实验目的把握鲜花粉搜集、储藏的方式及原理。观看花粉在人工配制的培育基上的萌生情形，熟悉花粉萌生形成花粉管的 外形和伸长进程，为明白得植物的生殖进程奠定基础。二、实验原理花期不遇，给杂交工作造成困难，有的树木和园林植物可通过延长花期解决， 有的不能不进行花粉储藏，花粉贮藏对某些园林植物杂交育种具有重要的意义。 通过花粉贮藏，它能够使一些迟开花的园林植物和早开花的园林植物进行杂交， 或到较远的地址给母本授粉，花粉的贮藏与运输能够打破杂交育种中双亲时刻上 和空间上的隔离，扩大育种的范围。花粉在贮藏期间的稳固性，与花粉壁外层（外壁）的性质和贮藏期间花粉原 生质的

2、代谢有关。在贮藏期间代谢调较少可溶性糖类和有机酸的花粉能够在较长 期间维持其活力。花粉贮藏的原理在于制造必然的条件，使花粉降低代谢强度， 延长花粉的寿命。花粉寿命的长短，因植物种类不同而异。在自然条件下，大多 数植物的花粉从花药散出后只能存活几小时，几天或几个礼拜。如一样木本植物 花粉寿命很长，如在干燥凉爽的条件下，柑桔花粉能存活4050d，椴树45d， 苹果1070d，樱桃30100d，麻栋一年，叶培忠教授实验发觉杉木的花粉可存 活17年之久；而在草本植物中，如棉属花粉采下后24h存活只有65%，超过24h 很少存活；多数禾本科植物的存活时刻不超过一天，如玉米12d，水稻花粉在 田间条件下3

3、min就有50%丧失生活力，5min后几乎全数死亡，是寿命最短的例 子。一样在自然条件下自花授粉植物花粉寿命比常异花、异花授粉植物为短。花 粉的类型和生活力也表现了相关性，通常三胞花粉的寿命要比二胞花粉短，如水 稻等禾本科植物为三胞花粉，寿命都是比较短的。花粉寿命的长短除上述因种遗传性的不同之外，还与温度、湿度有紧密的关 系。通常高温高湿下花粉呼吸旺盛，会专门快失去生命力，但在极干燥的条件下， 花粉失去水分，也无益于保留。据亚达姆斯实验，苹果花粉在干燥状态下，可保 留3个月；如放在28C，湿度80%的条件下，通过5个礼拜即失去生活力。 维霍夫实验中，丁香的花粉贮藏在干燥器中，15d以后发芽率降

4、到50% ；至20d 时，仅有个别花粉发芽；030d时，即全数死亡。因此，临时不用的花粉，应当 即在适宜的条件下贮藏，妥帖保留。为维持花粉生活力那么人为采取减低其代谢 强度，维持其纯洁性，将其贮存于低温、干燥、黑暗，并较为稳固的环境条件下， 以维持其活力。最近几年来，在贮藏花粉方面利用超低温（-192C的液态空气或 -196C的液氮）、真空或降低氧分压和快速冷冻干燥等方式，延长花粉生活力取 得良好的成效及应用。了解花粉的生活力关于农林生产和育种工作具有重要意义。在生产和杂交工 作中需要进行的人工辅助授粉的杂交授粉，都需要搜集和贮藏具有生活力的花 粉，花粉的生活力除受植物本身的遗传决定外，同时受

5、环境阻碍。不同来源的花 粉生活力高低存在专门大不同，花粉生活力的大小是保证杂交成功的关健。在有 性杂交育种中，常因父母本花期的不同，作为父本的花粉必需通过贮藏直到母本 植株开花时在植株开花时在用于授粉；为了幸免杂交工作失误，在利用远地寄来 的花粉或一段时刻储藏的花粉之前，必需对花粉生命力进行鉴定，以便对杂交 功效进行分析与研究。通常花粉的形态、花粉中酶的活性和积存淀粉（淀粉质花粉）的多少与花粉 生活力紧密相关，因此能够利用花粉的形态观看，过氧化物酶、脱氢酶的活性高 低，淀粉的含量和在人工培育基上花粉管萌生的情形作为确信花粉生活力高低的 标准。三、实验材料、要紧试剂及仪器（一）各类园林植物花粉如

6、榆叶梅百合、牡丹、凤仙花、柳树、菊花、月季、紫茉莉等植物的花粉（二）要紧仪器载玻片、盖玻片、凹玻片、解剖针、毛笔、棉球、干燥器、硫酸纸级硫酸纸 袋、曲别针、小指形管、标签、标记笔、显微镜、脱脂棉、花粉筛、冰箱、显微 镜、恒温温箱、瓷盘、镊子、培育皿、玻璃棒、玻璃铅笔、凡士林（三）要紧试剂硫酸H2SO4 （相对密度）、无水氯化钙、硅胶、碘一碘化钾、氯化三苯基四 氮唑、联苯胺:-萘酚、Na HPO2HO、KH PO、蔗糖或葡萄糖溶液、H BO、Ca2422433（NO3）2、MgSO4、KNO3、酒精、碳酸钠、过氧化氢四、实验方式与步骤（一）搜集花粉选择健壮的植株上正常的花朵，在开花前一天套硫酸纸

7、袋，下口用曲别针别 好以避免混入其他花粉，第二天花药开裂后搜集花粉;或搜集开花前一天的花粉， 第二天进行必要的加温处置，使花药开裂后搜集花粉;或搜集开花前一天的花蕾， 第二天进行必要的加温处置，使花药开裂后搜集花粉。注意必然要搜集花药开裂 前后的新鲜花粉，对不成熟的幼嫩花药的花粉，成熟过头的花粉被雨露粘湿的花 粉，有疑问的花粉基杂质要除去。（二）干燥及贮藏花粉搜集后置于清洁的环境，以避免菌类侵入引发发霉阻碍生命力，并及时 干燥，可放在散光下晾十、阴干或放入盛有CaCl （HSO、硅胶、醋酸钾饱和液、224NaOH等）的干燥器中干燥，一样以花粉由彼此粘结至极易分散象水一样不粘玻 璃壁为度，用花粉

8、筛筛去杂质，依照利用的次数将其分装于数个指形管中，幸免 因启封而使温度、湿度剧变造成花粉生活力锐减。一样以1/5或更少为宜，管口 用脱脂棉塞好，活用双层的干净纱布扎好，有利于气体互换和过滤气体，贴好标 签，说明植物品种名称、搜集日期、地址、贮藏条件（湿、温条件）即统一编号。 然后放入无水氯化钙或不同浓度的H2SO4操纵的必然湿度的干燥器中，最后把十 燥器置于02，C或0C以下的冰箱中贮存。同时设对照，在室内自然温度、湿度及阳光条件下，个一按时刻进行花粉生 活力测定，比较其不同性。（三）花粉生活力测定鉴定花粉生活力的方式有很多，归纳起来不外以下几种：一是将待测花粉直 接授粉，最后计算结实数和结籽

9、数；二是将花粉授到柱头上，隔一按时刻切下柱 头，在显微镜下观看花粉萌生情形，测定萌生率；三是形态观看；四是染色观看； 五是在人工培育基上播种花粉，观看萌生率。以后三种为主介绍花粉生活力测定 的具体方式。一样把具有品种典型性的花粉（指具有该品种花粉粒的大小、形态色泽等） 作为具有生活力的花粉，把小型的、皱瘪的、畸形的作为无生活力的花粉。形态观看的具体方式是：第一将花粉置于载玻片上，在显微镜下查看5个视 野，要求被检查的花粉粒总数达100粒以上，计算正常花粉粒占总数的比率。此 法简便易行，但准确性差，通常只用于测定新鲜花粉的生活力。（1）碘一碘化钾染色法。先称取碘和碘化钾溶于100ml的蒸馏水中，

10、即成 碘一碘化钾溶液。取少量花粉振播到用棉球擦净的一般载玻片上，然后加水一滴， 使花粉散开，再加一滴碘一碘化钾溶液，盖上盖玻片，置于显微镜下观看不同的 5个视野，凡花粉粒被染成蓝色的表示具有生活力，呈黄褐色为缺少生活力的花 粉（遇碘变蓝是淀粉的特性）。（2）氯化三苯基四氮唑（TTC）法。凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用中 都有氧化还原作用，而无生活力的花粉那么无此反映，因此当TTC渗入有生活力 的花粉时其脱氢酶在催化去氢进程中与TTC结合，是污水的TTC变成TTF而成红 色。磷酸盐缓冲液的配置:在100ml的蒸馏水中溶解的Na HPO2H O和的KH PO， 24224调整pH值为。TTC溶液

11、配置：取的TTC溶解于10ml磷酸缓冲液中，放于棕色瓶中，置 于暗处。取少量花粉于凹玻片的凹槽内或直接放于一般载玻片上，滴入TTC溶 液一两滴，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，将此片置于3540C下1520min， 在显微镜下观看不同的5个视野，反被染成红色的均为有生活力的花粉。（3）-萘酚法配制药液联苯胺溶于100ml的50%的乙醇中，盛入棕色瓶中，放暗处备用。-萘酚溶于100ml的乙醇中，盛入棕色瓶中，放暗处备用。碳酸钠溶于100ml蒸馏水中，盛入白色瓶中备用。将以上三种溶液等量混合，即成“甲液”，盛如棕色瓶中。将3%过氧化氢，临用前用蒸馏水稀释成%溶液，即成“乙液”，随配随用。制片取花粉少量

12、，撒入凹型载玻片的凹点内，滴入“甲液”，片刻后在滴入“乙 液”，35min后，在显微镜下观看不同的5个视野。凡有生活力的花粉为红色 或玫瑰红色。黄色的(不着色的)，为无生活力的花粉。此法受花粉萌生的培育基限制。假设有适宜的培育基能精准测定出具有生活 力并能够萌生的花粉粒的个数，还能看到花粉粒发芽的真实情形。悬滴液发芽法把供试花粉播种在必然浓度的培育液液面上，使其花粉真实地发芽，以测定 生活力高低的一种方式。培育液一样都是用蔗糖或葡萄糖溶液，浓度因物种而不 同，不同专门大。糖液浓度高低是为了调剂培育基的渗透压，避免供试的花粉在 溶液中发生破裂。适合多数园林植物花粉的发芽，通用培育基配方如下：蔗糖

13、 10%加 H BO 100mg/L，Ca(NO ) 2300mg/L，MgSO 200 mg/L，KNO 100 mg/L，333 243可配成母液，历时稀释，母液放在冰箱中保留。具体操作方式：配制10%蔗糖溶液，滴一滴于凹玻片上，取少量花粉置于 滴液中，用大头针搅拌均匀，然后将凹玻片放在培育皿加盖放到20-25C温箱中。 加盖2h后花粉即开始萌生，24h后在显微镜下检查发芽花粉的百分率。不同物 种的花粉发芽所需的时刻不同，如牡丹花粉用15%蔗糖溶液在室温条件下，接 种后一小时即可观看。花粉发芽检查在低倍镜下进行，花粉的长度为花粉粒直 径2倍以上才算发芽，一倍以上者算萌芽。培育基发芽法培育基

14、的制备：在250ml的烧杯中加入90ml蒸馏水，再加入1g的琼脂， 在酒精灯上加热，使之完全溶解，然后加入定量蔗糖，制成不同浓度(5%、10%、 15%、20%)的蔗糖琼脂培育基(分组加，每组制成一个浓度)，为了避免水分蒸 发，配制加热的烧杯应加盖。先把水在酒精灯或电炉上加热煮开，倒入琼脂，使之融化，然后倒入蔗糖， 用玻璃棒不断搅拌，呈透明状即可。为维持培育的浓度，可在烧杯上液面处贴上 纸条或用玻璃铅笔沿液面划线标记，当液面在熬制进程中因水分蒸发下降时应及 时添加蒸馏水，以维持液面的稳固和培育基的标准浓度，并将熬制好的培育基溶 液连同烧杯放入盛有35C热水的容器中，避免冷却凝固，以备随后利用，

15、即配 成5%浓度的培育基。同法配成10%、15%、20%浓度的培育基。用品消毒：发芽实验时所用的载玻片、凹玻片、镊子等都要在消毒柜中消 毒或在100C条件下煮沸20min，冷却后掏出用酒精棉球擦干放在大培育皿中备 用，通过消毒过的载玻片利历时要尽可能减少和手指接触的面积，以减少污染。花粉的播种与检查：用玻璃棒蘸取培育基溶液，当即滴一滴于盖玻片的中 央（直径），使成为一表面完整的球面（球面越薄越好，不然透光性差，阻碍在 显微镜下观看），当凝固后再进行花粉的播种。播种花粉时，用通过酒精消毒过的发丝蘸取花粉（假设所用花粉为陈花粉或 过于干燥的花粉时，可在播种前掏出一部份在湿气大的培育皿中密闭15-3

16、0min 后在行播种），轻轻震动（风媒花）或涂抹（虫媒花）在培育基表面。一要注意 发丝不能过重地接触培育基表面，幸免破坏培育基的表面；二是要注意花粉的散 布要松散、均匀，不能密集成堆，；三要注意适宜的播种数量。体会证明，花粉 太稀，阻碍发芽，播种太稠也阻碍发芽，一样情形下，一个显微镜视野以散布 20-50粒花粉为宜。播好后将盖玻片翻转，置于载玻片上的小玻璃环上，小玻璃 环上下涂上凡士林，环内加1第水用于保湿。湿室密封后，应在载玻片上用玻璃铅笔标号，并进行记录，记录内容包括花 粉种类、培育基的糖液浓度、采粉时刻，播种时刻、湿室中滴水的多少。然后全 组集中放在一个大的瓷盘中，用纱布覆盖后加盖，放于15-25C的温箱内24h后 进行检查。若是时刻许诺，最好播后每隔2-3h检查一次，直至花粉粒发芽数再 也不增加为止，记载花粉发芽数，以明确不同花粉的发芽的速度和发芽进程。牡 丹花粉接种后1h即可观看。花粉发芽检查在低倍镜下进行，花粉的长度为花粉 粒直径2倍以上算发芽，一倍以上者算萌芽。每片应观看5个视野花粉数很多于 100粒以上，计算发芽率，此法每人做3片，选发芽情形最好的一片进行发芽情 形的检查。五、试探题详细记载花粉搜集及贮存的日期、花粉名称、花粉搜集方式及进程、花粉 贮藏方式。通过实验总结所搜集贮藏的花粉种类的特点。用染色法计算花粉生活力（5个视野）。用发芽法计算花粉生活