大肠杆菌生长曲线的制备_第1页
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文档简介

1、大肠杆菌生长曲线的制备一、实验目的1 了解细菌生长曲线特点及测定原理；2学习用比浊法测定细菌的生长曲线。二、基本原理将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中， 在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌 量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长 曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养 时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般 可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四 个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而 有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的 生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。测定微生物

2、的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室 条件选用。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与 光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬 液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应 的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线， 此法快捷、简便。三、器材1菌种：大肠杆菌2培养基：LB培养基（蛋白胨10g酵母膏5g Nacl 10g pH7.07.2）3仪器和器具：721分光光度计，比色杯，恒温摇床，无菌 吸管，试管，三角瓶。四、方法与步骤1种子液制备取大肠杆菌斜面菌种1支，以无菌操作挑取1环菌苔， 接入LB培养基中，静止培养18h作种子培养液。2标记编号取11支无

3、菌试管，分别编号为0、1.5、3、4、6、8、 10、12、14、16、20h。3接种培养吸取2.5ml种子液加入装有60mlLB培养基的锥形瓶 中，混匀。分别取5ml加入到11根试管，于37C下振荡 培养。然后分别按对应时间将试管取出，立即放冰箱中贮存, 待培养结束时一同测定OD值。4生长量测定将未接种的LB培养基倾倒入比色杯中，选用600nm 波长分光光度计上调节零点，作为空白对照，并对不同时间 培养液从0h起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种 的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其OD值在 0.10.0.65以内，经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的OD值。五、实验报告1将测定的OD值填入下表:时间01.534681012141620光密度值（OD600）2以上述表格中的时间为横坐标，OD600值为纵坐标，绘 制大肠杆菌的生长曲线。3思考：（1）用本实验方法测定微生物生长曲线

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