病原生物学课件：06 细菌感染的检测与预防

1、 第5章 细菌感染的检测方法与预防原则The microbe must be present in every case of the disease and not present in healthy animalsIt must be isolated and grown in a pure cultureThe same disease must result when the isolated microbe is inoculated into a healthy host The same microbe must be isolated again from the disea

2、sed hostKochs Postulates一、细菌感染实验室诊断 查细菌 传统方法病原菌分离鉴定 快速诊断 1、形态观察 2、抗原检测 3、核酸检测 查抗体 用已知细菌抗原测病人血清中相应抗体临床标本增 菌接种培养基，分离单个菌落各种鉴定试验涂片染色快速诊断试验生化试验血清学实验涂片染色药敏试验动物试验初步诊断报告最终诊断报告细菌学检验一般程序预处理标本材料因感染的不同而定，通常为病人或可疑者的血、尿、粪、痰、脑脊液、脓汁等。举例：如腹泻、脑膜炎、伤寒等病人细菌学诊断标本的采集和送检六原则避免杂菌污染不同期不同标本用抗生素以前采集病变明显部位注意记录、运送和保存标本必须新鲜取材部位特殊，

3、形态染色典型淋病患者尿道分泌物直接涂片作革兰染色脑脊液涂片作革兰染色结核病人痰涂片作抗酸染色深部创口取材涂片染色S.S培养基上伤寒沙门菌形成的黑色菌落罗氏培养基上结核分枝杆菌形成的菜花心样菌落亚碲酸钾培养基上白喉杆菌形成的黑色菌落巧克力色培养基上脑膜炎萘瑟菌形成的露滴状菌落124124124124ONPGGLULDCARACITODCH2SUREINDTDAOXNO2 7504：肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种7054原理血清学诊断 双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高4倍者方有意义种类(已知抗原/抗体相应的抗体/抗原)标本凝集试验：沉淀试验：补体结合试验：中和试验： 肥达试验、

4、外斐试验、显微镜凝集试验等梅毒VDRL、RPR试验等抗“O”试验等Q热柯克斯体抗体检测等微生物学诊断新技朮分子生物学技术核酸杂交聚合酶链反应(PCR)Western Blot 厌氧菌快速诊断 气液相色谱法流行病学调查噬菌体分型细菌素分型 核酸分子杂交（Molecular hybridization ） 核酸分子杂交方法比较：Southern /Northern blotDot blotIn situ blot标本DNA/RNA血清组织切片琼脂糖电泳硝酸纤维素膜变性+探针+显色反应+用途诊断分子量测定诊断诊断胞内定位 PCR(polymerase chain reaction)目的：扩增目的基因

5、片段特点：特异，敏感，快速引物：约20个碱基，与扩增片段两端互补 变性（94）dsDNA ssDNA复性（50-65）引物与ssDNA配对延伸（72）ssDNA为模板合成新链30个周期凝胶电泳 检测RT-PCR and RT-LAMP确定某种新发感染性疾病的病原体：Kochs postulate确定常见感染性疾病的病原体：细菌培养、涂片、血清学、分子诊断技术等确定病原体的毒力基因：Molecular Kochs postulateThe phenotype or property under investigation should be associated with pathogenic

6、members of a genus or pathogenic strains of a species. Additionally, the gene in question should be found in all pathogenic strains of the genus or species but be absent from nonpathogenic strains. Specific inactivation of the gene(s) associated with the suspected virulence trait should lead to a me

7、asurable loss in pathogenicity or virulence. Virulence of the microorganism with the inactivated gene must be less than that of the unaltered microorganism in an appropriate animal model. Molecular Kochs postulatesoriginally described by Dr. Falkow, 1988 Reversion or allelic replacement of the mutat

8、ed gene should lead to restoration of pathogenicity. In other words, reintroduction of the gene into the microbe should restore virulence in the animal model. The gene, which causes virulence, must be expressed during infection. Immunity must be protective. Molecular Kochs postulates (continued)二、细菌感染的防控原则 控制传染源 切断传播途径 提高人群免疫力疫苗 菌体疫苗： 死疫苗 减毒活疫苗类毒素（Toxoid）： 外毒素经甲醛处理，失去毒性，仍保留免疫原性，人工自动免疫后可刺激产生抗毒素抗体。亚单位疫苗蛋白或抗原成分多糖疫苗： 理化提取得细菌表面多糖成分，如脑膜炎球菌荚膜多糖疫苗。联合疫苗 如DPT三联疫苗核酸疫苗： 即DNA疫苗，目前只在动物上试用。基因工程疫苗区别死疫苗活疫苗制剂特点死，强毒株活减毒株接种剂量与特点量较大，23次量较小，1次保存及有效期易保存，约1年不易保存免疫效果较低，维