土茯苓组织培养

1、土茯苓组织培养步骤一配培养基一 我们用到的培养基有三种，分别为MS white h。MS培养基的调配方案25.2L母液名称药品名称配方规定Xmg/L)扩大倍数配制母液 体液称取量mg配1L培养基移取量ml我们实验所需用量大量兀素微量兀素铁盐有机物质2)white培养基的调配方案母液名称药品名称配方规定量(mg/L)扩大倍数配制母液 体液称取量mg配1L培养基移取量ml我们实验所需用量大量兀素微量兀素铁盐有机物质2）H培养基的调配方案母液名称药品名称配方规定量（mg/L）扩大倍数配制母液 体液称取量mg配1L培养基移取量ml我们实验所需用量大量兀素微量兀素铁盐有机物质注意事项：1当一种药品完全溶

2、解后，再加入下一种药品2配制大量母液时，必须最后加入cacl2或单独配制，否则易出现沉淀3）激素培养基的调配方案母液名称配制质量浓度配制母液体积称取量mg我们实验所需用量（mg/ml）mLNAA0.24+0.24*5+1.5IBA0.06+0.12*5+1.26-BA2.4+1.8*5+0.21KT1.2+1.2*52,4-D0.06注意事项：生长素类一般先用少量95%酒精溶解，再用蒸馏水定容。细胞分裂素一般先用0.51mol/L的HCL溶解再用蒸馏水定容。步骤二按顺序混合培养基后，配制固体培养基。取烧杯一个，加入蒸馏水，称量琼脂倒入烧杯中，将烧杯置于电炉上或微波炉内煮沸， 待琼脂完全溶化后，

3、加入蔗糖（MS培养基中加入量多为2030g/L），充分溶解后，将准备 好的大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素母液混合液倒入烧杯中，用蒸馏水将装过母 液混合液的烧杯洗三遍，一并倒入烧杯中，并加蒸馏水定容。充分混合后，用1mol/LNaOH和1mol/LHCl调节培养基的pH为5.8。步骤三高压灭菌。刚灭过菌的培养基应在室温下放置1-2天，观察有无微生物生长，以确定培养基是否彻底灭 菌。经检查没有杂菌生长的方可使用。步骤四外植体的预处理和消毒先用洗衣粉浸泡，在自来水流水冲洗再用70%乙醇溶液浸泡10秒30秒，用无菌水冲洗一遍用0.1%升汞溶液浸泡510分钟无菌水冲洗35遍消毒剂配制消毒剂配制方

4、法70%乙醇95%乙醇与水按14:5混合0.1%升汞升汞1g，加水1000mL步骤五接种超净工作台紫外灯灭菌。用已经灭过菌的器具在超净工作台上接种。步骤六植物组织培养一初代培养（1个月）所用时间为30天。15天能启动生长，25天芽明显伸长。6-BAKTNAAIBA2.4-D生长情况处理数目MS1.00.1MS1.00.1MS1.00.1MS1.00.1MS1.00.1MS1.00.2二继代培养 （6个月）将启动诱导形成的不定芽切割后接种到继代培养基上增殖扩大培养。单位mg/LNAAIBA培养数目生根数目生根情况H0.5根良好，苗生长健壮MS0.5根较粗短，苗长势一般white0.5white1

5、.0H1.0white1.0一般时间为40d 一个周期。但初生成长较慢，时间为45d。第四次继代后较快，一般为 35天。一般进行5次继代。三壮苗培养（一个月6-BAKTNAAIBA椰子汁生长情 况处理数MS1.00.1MS丛生芽 较多，较 粗MS1.00.1MS1.00.1MS1.00.1MS1.00.215%丛生芽 多，生长 快，粗壮将丛芽切割成单芽或小丛芽转移到壮苗培养基上。培养时间为30天左右。3个星期不定芽长高长粗，30天高34cm。四生根培养（1个月）当新芽长至23cm高后，切割成单芽后接种到生根培养基上诱导生根。一般时间为1520d左右有根生成30天左右能形成完整根系。6-BA蔗糖浓度壮苗情况 3/2MS0.054%最好MS0.053%没有好MS0.054%MS0.13%MS0.14%