《医学免疫学与医学微生物学》课件第十九章分枝杆菌、放线菌、诺卡菌属

1、第十九章分枝杆菌属放线菌属诺卡菌属1.结核分枝杆菌的形态染色特性、培养、抵抗力特点、变异性、致病性与免疫性、结核菌素试验概念、原理、方法及应用、微生物学检查方法及特异性预防原则。2麻风分枝杆菌传播方式和致病性。3.放线菌的概念，硫碘颗粒的本质和临床意义， 学习重点分枝杆菌属 本菌属的细菌是一类细长略弯的杆菌因分枝生长的趋势而得名。细胞壁中含有大量脂质主要是分枝菌酸与其染色性、生长特性、致病性、抵抗力等有着密切的相关性。结核分枝杆菌非结核分枝杆菌麻风分枝杆菌一般不易着色，若经加温或延长染色时间而着色后有抵抗强脱色剂盐酸、乙醇的脱色作用。故而称为抗酸杆菌目前结核病是世界上最普遍和最严重的人类传染病

2、之一，全球人口的1/3感染了结核菌。死亡人300万/每年。对人有致病性的主要为人型、牛型和非洲型，我国为结核大国，居世界第二位(解放前为世界之首)。 耐药菌的增加、流动人口的增加、艾滋病、吸毒、贫困、麻痹心理等原因 使结核病在二十世纪末死灰复燃。 第一节 结核分枝杆菌年月日，德国科学家罗伯特科赫（郭霍）宣布发现结核杆菌是导致结核病的病原菌，从而给防治结核病带来突破。此后，随着抗结核药物研制成功，结核病的流行得到有效控制，并在一些地区绝迹。在纪念郭霍氏发现结核菌100年之际，1982年在国际防痨和肺病联合会及世界卫生组织的倡议下，将每年的3月24日定为“世界防治结核病日”。结核病可免费治疗。世界

3、防治结核病日 一、生物学性状形态与染色 细长略弯，呈分枝状，排列或聚集成团 易形成L型 有荚膜、无芽胞和鞭毛 抗酸染色阳性 生物学性状细胞壁脂质含量高，占胞壁干重60%抗酸染色阳性抵抗力耐干燥、酸碱、染料对湿热、紫外线、75%乙醇敏感营养要求高罗氏培养基：含蛋黄、马铃薯、甘油、胆盐、孔雀绿、无机盐生长缓慢分裂一代需18-20hr10-20d出现肉眼可见菌落6-8w见明显干燥颗粒菌落抗酸染色法 5石炭酸复红加温染色 3盐酸酒精脱色 美蓝复染 分枝杆菌呈红色(+)，其他细菌和背景物质为蓝色(-)。痰中结核分枝杆菌的镜下形态（抗酸染色）SEM*40,000 结核杆菌电镜下培养特性专性需氧 最适生长温

4、度：37 最适pH值：6.56.8 固体培养基 谗：营养要求高，常用罗氏培养基 懒：一般24周可见生长 丑：乳白色或米黄色，菜花样，干燥菌落 液体培养基 菌膜生长（可见皱褶的菌膜浮于液面） 生化反应不发酵糖类 触酶试验 热触酶试验结核分枝菌 + - 非结核分枝菌 + + 抵抗力：因其细胞壁中含有大量的脂质，可防止菌体水分的丢失，故对干燥有较强的抵抗力，在干燥的痰内可存活68个月。四怕 湿热 紫外线 乙醇 抗痨药物（链霉素、异烟肼、利福平等） 四不怕 干燥 酸或碱 碱性染料 青霉素等抗生素形态结构、菌落变异：结核杆菌的L型：颗粒状、丝状菌落变异: 粗糙-光滑毒力变异：毒力减弱-减毒活疫苗株（卡介

5、苗）耐药性变异：耐异烟肼及其他抗结核药物的结核菌株日益增多 变异性二、致病性结核杆菌无侵袭性酶，不产生内、外毒素，其致病性主要由于： 细菌繁殖引起炎症 菌体成分和代谢产物毒性作用 抗体对菌体成分产生免疫病理损伤荚膜 有助于抵抗吞噬细胞的吞噬 有助于结核菌的黏附、侵入 有助于阻止药物及化学物质进入体内 脂质存在细胞壁，含量与毒力有关 磷脂: 干酪样坏死,形成结核结节索状因子: 引起慢性肉芽肿 蜡质D: 引起迟发型过敏反应 硫酸脑苷脂: 抑制杀伤 分枝菌酸: 具有抗酸染色特性 致病物质菌体成分蛋白质 有抗原性，能刺激机体产生相应抗体。本身无毒，如结核菌素，但如和蜡质D结合可诱发超敏反应迟发型变态反

6、应、组织坏死、全身中毒症状，参与结核结节形成。 结核杆菌可通过呼吸道、消化或皮肤损伤侵入易感机体, 引起相应组织器官结核病，其中肺结核为最多。 肺结核有原发感染和继发感染两大类。所致疾病结核病1、肺内感染繁殖渗出性炎症（原发灶）原发性感染见于学龄儿童及未受过感染的成人。结核分枝杆菌 肺泡 吞噬细胞原发感染（primary infection）淋巴管肺门淋巴结全身性粟粒性结核 淋巴结病灶逐渐纤维化和钙化释放大量细菌粟粒性肺结核继发感染结核杆菌再次入侵，多见于成人干酪样肺炎慢性纤维空洞性肺结核X光片诊断 右侧浸润型肺结核 正常胸部 (右侧 )2、肺外结核肠结核，结核性脑膜炎，皮肤结核，肾结核，骨结

7、核等双重感染 同时感染人类免疫缺陷病毒（HIV）与结核菌的人称为双重感染者。其病死率高，对人类健康与生命均构成严重威胁。人体对该菌有较强免疫力（感染率高，发病率低） 主要是细胞免疫（感染免疫又称有菌免疫）-即只有当结核分枝杆菌或其组分存在时才有免疫力。当机体内结核分枝杆菌或其组分消失后，抗结核免疫也随之消失。 细胞免疫与迟发型超敏反应并存。一者均为T细胞介导的结果。三、免疫性与超敏反应以前感染过的免疫豚鼠正常豚鼠24-48小时10-14天局部红肿、浅溃疡 局部淋巴结不肿大局部红肿、溃疡 局部淋巴结肿大脱落后自行愈合 不扩散坏死，经久不愈 全身扩散有毒TB菌皮下郭霍现象快再感染时溃疡浅、易愈合、

8、不易扩散，表明机体已有一定免疫力。再感染时溃疡发生快，说明产生免疫的同时有超敏反应的参与。结核菌素试验原理：用结核菌素测定机体能否发生迟发性超敏反应，以判断机体对结核有无免疫;结核菌素（OT或PPD）注入皮内后如受试者已感染结核，则结核菌素与致敏淋巴细胞特异性结合，在局部释放淋巴因子，形成迟发型超敏反应性炎症，若受试者未感染过结核则无反应。 试剂 旧结核菌素（OT） 两种 纯蛋白衍生物（PPD） 方法：取PPD/OT 注入前臂皮内，48-72h后观察结果。 红肿硬结5mm， 阳性 红肿硬结15mm，强阳性 可能有活动性结核病 结果： 红肿硬结5mm， 阴性应用 判断机体对结核分枝杆菌有无免疫力

9、 用于婴幼儿结核病诊断 肿瘤患者细胞免疫功能测定 对未接种卡介苗的人群进行流行病学调查四、微生物学检查标本 集菌染色检查培养法动物试验细菌核酸检查 齐-尼抗酸染色 金胺染色罗氏培养基豚鼠腹股沟皮下PCR ELISA药敏试验生化反应痰尿粪便浓汁胸水腹水脑脊液支气管灌洗液等酸碱处理假阳性率高防治原则 预防： 一般性预防：宣传教育特异性预防：接种卡介苗 治疗： 一般治疗：合理营养，注意休息 抗结核药物、异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇等。 治疗原则：早期、联合、适量、规律、分阶段治疗和坚持全程早发现早隔离早治疗不随地吐痰、提高机体抵抗力 复习思考题1、有关结核杆菌的生物学特点，下列叙述错误的是：A、

10、抗酸染色呈红色，故为抗酸菌B、专性需氧菌，营养要求高，生长缓慢C、抵抗力较弱D、培养时，菌落干燥呈颗粒状 复习思考题2、培养结核杆菌常用的培养基是：A、巧克力色血琼脂平板 B、罗氏培养基C、碱性蛋白胨水 D、鲍金培养基 3、卡介苗是利用了细菌哪种变异：A、形态结构的变异 B、菌落的变异C、细菌毒力的变异 D、耐药性的变异第二节 麻风分枝杆菌“麻风病，是一种古老而又神秘的疾病，没有哪种疾病比它更令人恐惧和误解。”其传播途径至今未完全弄明白，只能治疗，没有办法预防。散落社会的1.8万患者“目前麻风病专科医生实在是凤毛麟角，综合医院绝大多数医生都不认识麻风病症状，病人要看几十家医院，才能最终确诊，因

11、此多数失去最佳治疗时期并丧失了劳动能力。”发现的只是一少部分病人。每年1月的最后一个星期日，是“国际麻风节（世界防治麻风病日）”。今年是中国第24届“麻风病日”，是世界第58个“麻风病日”。2011年：消除麻风危害，保护健康权益2010年：消除麻风歧视，共享和谐文明2009年: 关爱麻风患者，共享和谐家园2008年: 消除麻风歧视,共建和谐社会2007年: 消除麻风歧视,共建和谐社会2006年: 情系麻风病患者,温暖困难群体2005年: 持续控制,共享文明 2004年: 防治麻风病, 关爱麻风病人2003年: 积极防治麻风,关爱畸残病人2002年: 防治麻风病,社会献爱心2001年: 麻风防治

12、与康复-全社会的责任2000年: 消灭麻风病-新世纪使命1999年: 社会关怀-麻风康复者的希望 第二节 麻风分枝杆菌 生物学特点 其大小、形态、染色均与结核杆菌类似，但菌体略粗，多存在于细胞内麻风细胞（有大量麻风杆菌存在的感染细胞，呈泡沫状） 麻风分枝杆菌镜下形态 目前体外人工培养尚未成功 动物模型： 犰狳 ，对该菌高度易感，接种后引起瘤型麻风，人对该菌抵抗力强，接触者仅少数发病致病性 人类为唯一宿主和唯一传染源，对该菌抵抗力较强，以细胞免疫为主 传染源：病人（瘤型麻风病人通过皮肤黏膜及分泌液向外排菌） 传播途径：皮肤、黏膜、呼吸道及密切接触传播（家庭内传播多见） 所致疾病：麻风分为 此病潜

13、伏期长，发病慢，病程长的慢性传染病，主要侵犯神经、皮肤 。瘤型（开放型）传染性强结核样型（闭锁性）传染性弱界线类未定类瘤型麻风病人面部结节融合可呈“狮面”状病人面部结节融合可呈“狮面”状麻风杆菌侵犯神经系统 结核样型麻风微生物学检查直接涂片，结合病史可诊断 麻风菌素试验：不能用于诊断，但可用于分型及了解麻风患者及接触者的预后。早期发现、早期隔离、联合用药治疗 防治原则放线菌介于真菌和细菌之间，属于原核细胞型微生物。大多数不致病、对人致病的分为：第三节 放线菌属和诺卡菌属厌氧性-放线菌需氧性-诺卡菌属放线菌属 多数：腐生菌（土壤）少数：寄生菌（人类和动物口腔、上呼 吸道、胃肠道和泌尿生殖道）致病

14、菌： 牛放线菌（A. bovis） 衣氏（以色列）放线菌（A. israelli） 内氏放线菌（A. naeslundii） 放线菌是抗生素的重要来源生物学特性广泛存在于自然界大多不致病，致病的主要有衣放线菌G+、非抗酸性丝状菌培养困难，厌氧或微需氧放线菌属硫磺样颗粒（sulfur granule）-菌落：存在：病灶组织和脓性分泌物中大小，颜色：肉眼可见，可至1mm，黄色组成：由放线菌、巨噬细胞、其他组织细胞、 纤维蛋白组织镜检：（压片或组织切片） 1. 核心部分是分枝状的菌丝交织而成，菌丝向 四周放射状排列，形成菊花状“放线菌” 2. 菌丝末端：胶质样物质组成鞘包围，膨大呈 棒状，折光性强

15、3. 革兰染色：核心：阳性 周围长丝末端：阴性 致病性与免疫性放 线 菌：正常菌群多发部位：面颊、舌和下颌其他部位：胸部、腹部、盆腔和中枢神经系统所致疾病：1.抵抗力降低-内源性感染-软组织肉芽肿性炎症(慢性,无痛,多发性瘘管,排出硫磺样颗粒)2.龋齿和牙周炎: 病原菌:粘液放线菌,内氏放线菌 粘附在牙齿釉质-菌斑微生物学检查主要：硫磺样颗粒（脓汁,痰,分泌物）压片镜检:菊花状排列的菌丝必要：厌氧培养（生长缓慢）培养:厌氧或微需氧气体环境:5 CO2营养培养基:血琼脂平板温度与时间:37, 46d菌丝:革兰阳性菌落:灰白色或淡黄色粗糙型小菌落生化特性:溶血(-) 过氧化氢酶试验(-)防治原则1

16、.口腔卫生，治疗牙病及口腔破损2.脓肿和瘘管：外科清创3.药物：大剂量，长时间：青霉素或磺胺 类（四环素类、红霉素、克林霉 素或林可霉素） 诺卡菌属 1.需氧2.含分枝菌酸3.分布：土壤，多数：非致病菌4.致病菌： 星形诺卡菌（N. asteroides） 巴西诺卡菌（N. brasiliensis） 豚鼠诺卡菌（N. caviae）生物学性状 形态：与衣氏放线菌相似、菌丝末端不膨大革兰染色:阳性抗酸染色:阳性 脱色时间延长-阴性(与TB区别)硫磺样颗粒: 渗出液、痰或脓汁 营养要求：不高（沙氏或普通琼脂培养基）气体环境：需氧，有气生菌丝培养温度：室温或37生长速度：缓慢生长，约1w色素：星形诺卡菌：黄色或深橙色 无白色菌丝 巴西诺卡菌：有白色菌丝菌丝断裂： 5d后链球状或链杆状 （放线菌属：24h开始)培养特征：菌落：有皱褶、颗粒状 液体：菌膜致病性侵入途径：