乌司他丁对大鼠缺血性脑水肿脑组织AQP4表达的影响

1、乌司他丁对大鼠缺血性脑水肿脑组织AQP4表达的影响汕头大学医学院第一附属医院 林重辉 郑文玲 杨军 邱文冰 黎永胜【摘要】目的：探讨乌司他丁对大鼠缺血性脑水肿脑组织AQP4表达的影响及意义。方法：采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型，随机分为3组：对照组、治疗1组、治疗2组，取24 h时相点用免疫组化方法观察大鼠模型缺血区AQP4的表达。结果：治疗1组与对照组比较，24h后AQP4表达水平减轻(P 0.05)，治疗2组与对照组相比，24h后AQP4表达水平明显减轻 (P 0.01) 。结论：乌司他丁能通过下调脑缺血组织AQP4的表达，起到脑保护作用。【关键词】乌司他丁；水孔蛋白4；

2、脑水肿【Abstract】Objectives: To explore the influence of ulinastatin to the expression of AQP4 in rats brain tissue during ischemic encephaledema.Methods: The rats cerebral middle artery occlusion (MCAO) model was established with thread occlusion method.Rats were randomly divided into 3 groups,includin

3、g control group,treatment gruop 1 and treatment group 2.The changes in expression of AQP4 in rats model ischemic areas at 24h time point were determined by immunohistochemistry.Results:The expression of AQP4 of treatment group 1 was lower than that of control group at 24h point(P 0.05) ,while the ex

4、pression of AQP4 of treatment group 2 was obviously lower than that of control group at 24h point(P 0.01).Conclusion: Ulinastatin has protective effects to brains by downregulating the expression of AQP4 in ischemic brain tissue. 【key words】ulinastatin,aquaporins-4(AQP4),encephaledema乌司他丁(Ulinastati

5、n, )是一种存在于人尿中的胰蛋白酶抑制剂.现越来越广泛地运用于临床，大量的研究表明提示乌司他丁具有脑保护作用，同时新近的研究也表明大剂量的乌司他丁对机体组织能起到更好的保护作用。故我们通过以下实验探索不同剂量乌司他丁对大鼠缺血性脑水肿脑组织的治疗作用。1.材料 1.1实验动物：选择Wistar大鼠45只，性别不限，体重200-250g，将实验动物随机分为3组：对照组、治疗1组、治疗2组、每组15只。1.2试剂和药物：乌司他丁，由广东天普生化医药股份有限公司提供 AQP4试剂盒，由武汉博士德生物工程有限公司提供2.方法2.1 实验方法 参照 Longa等的方法1，对照组、治疗1组、治疗2组均采

6、用线栓法建立大脑中动脉阻塞( MCA0)模型，手术方法从略。 2.2 分组及给药法 乌司他丁治疗组大鼠分别于术后即刻、术后8h、16h腹腔注射乌司他丁1次，剂量分别为（II组） 1.0万Ukg，(III组)4.0万Ukg；对照组(I组)在相同时间点给予等量生理盐水腹腔注射，三组均于术后24h处死。 2.3 指标观察及方法2.3.1脑组织水孔蛋白-4（AQP4）免疫组化检测 分别取各组实验动物缺血脑组织后外部分作冠状位冰冻切片(15um)，采用S-P法，选用一抗（AQP4抗体），并根据试剂盒上的步骤进行操作，免疫组化AQP-4阳性细胞胞膜呈棕黄色。3.统计学分析 在400倍光镜下各时相点各取免疫

7、组化切片5片，在同一光强度下随机选择不重叠的5个视野，细胞膜呈棕色为AQP-4免疫组化阳性，统计AQP-4表达阳性细胞数。数据均采用均数标准差表示，组间比较采用方差分析. P0.05为差异有统计学意义。3.结果： AQP4表达水平变化： AQP4主要在细胞膜中表达。治疗1组与对照组比较，24h后AQP4表达水平减轻(P 0.05)，治疗2组与对照组相比，24h后AQP4表达水平减轻较明显(P 0.01) .组别例数AQP4阳性细胞数对照组1528.75.3392治疗1组1525.124.7314治疗2组1520.3+-2.8235讨论 缺血性脑血管病率是严重危害人类健康的主要疾病之一，其急性期

8、病理变化主要表现为脑水肿，其严重程度和持续时间的长短对脑缺血的预后有着直接的影响。所以，使用有效药物减轻缺血性水肿成为脑缺血急性期治疗的关键。研究显示在缺血性脑水肿的过程中，水孔蛋白-4（AQP4）与脑水肿关系密切234，当使用相关药物能使水孔蛋白的表达减低时，即能有效的减轻脑水肿的程度。乌司他丁是一种广谱蛋白酶抑制剂 具有抗炎性介质作用和多脏器功能保护作用5。近年来一些研究实验显示乌司他丁具有良好的脑保护作用67,同时新近的临床多学科研究也表明乌司他丁的治疗效用与用药剂量呈正比关系，即较大剂量的乌司他丁能起到更好的作用89，因不同剂量的乌司他丁在脑保护中起到的不同作用的研究及有关乌司他丁对缺

9、血性脑水肿脑组织水孔蛋白-4（AQP4）的影响的研究目前仍未见报道。故我们通过建立脑缺血动物模型后，使用不同剂量的乌司他丁后，对脑组织进行实验室重要免疫组化指标水孔蛋白-4（AQP4）分析检测，探讨乌司他丁在预防及治疗缺血性脑水肿方面的疗效。 我们实验显示：与对照组比较，使用乌司他丁的治疗1组能使缺血脑组织的水孔蛋白-4（AQP4）表达下降（P 0.05）,且随着使用乌司他丁剂量的增加，即：治疗2组可使血脑组织的水孔蛋白-4（AQP4）表达相对对照组明显减少(P 0.01)。我们的实验结果提示：乌司他丁能通过下调水孔蛋白的表达起到保护脑组织的作用，并且在大剂量的作用下能起到更好的效果。故我们认

10、为在常规治疗脑梗塞的基础上，使用乌司他丁可以对脑梗塞后的脑水肿起到有效的辅助治疗作用，从而有利病情的好转和康复。但临床运用的有效性还待进一步临床实验证实。1 Longa EZ.,.Weinstein PR,Carison S,Cummins R:Reversible middle cerebral artery occlusion without craniotomy in ratsJ.Stroke,1989,20:84-91.2Taniguchi M, Yamashita T, Kumura E, Tamatani M, Kobayashi A, et al .Induction of aq

11、uaporin-4 water channel mRNA after focal cerebral ischemia in ratJ. Brain Res Mol Brain Res. 2000 May 31;78(1-2):131-137.3 Kiening KL, van Landeghem FK, Schreiber S, Thomale UW, von Deimling A, Unterberg AW, Stover JF.Decreased hemispheric Aquaporin-4 is linked to evolving brain edema following cont

12、rolled cortical impact injury in ratsJ. Neurosci Lett. 2002 May 17;324(2):105-8.4 Manley GT, Fujimura M, Ma T, Noshita N, Filiz F, Bollen AW, Chan P, Verkman AS. Aquaporin-4 deletion in mice reduces brain edema after acute water intoxication and ischemic strokeJ.Nat Med. 2000 Feb;6(2):159-63.5 邵明义,张良清,邓烈华,等.乌司他丁对全身炎症反应综合征的治疗作用J.中国危重病急救医学,2005,17(4):228-2306 章国军,杜杭根,殷利春等. 乌司他丁在重型颅脑损伤应用中血浆内皮素水平的变化. 浙江中医学