琼脂糖电泳槽单芯垂直板电泳槽

1、琼脂糖电泳槽单芯垂直板电泳槽第一章 概 述一、生物化学实验技术开展简史 在20世纪，生物科学迅猛开展，其中生物化学与分子生物学的进展尤为迅速。作为一门最具活力和生气的实验科学，在21世纪必将成为带头的学科，这主要有赖于生物化学与分子生物学实验技术的不断开展和完善。 20年代： 1、微量分析技术导致了维生素、激素和辅酶等的发现。2、瑞典著名的化学家T.Svedberg奠基了“超离心技术，1924年制成了第一台5000g5000 r/min8000 r/min相对离心力的超离心机，开创了生化物质离心别离的先河，并准确测定了血红蛋白等复杂蛋白质的分子量，获得了1926年的诺贝尔化学奖。 30年代：

2、电子显微镜技术翻开了微观世界，使我们能够看到细胞内的构造和生物大分子的内部构造。 40年代： 1、英国科学家Martin和Synge创造了分配色谱层析，他们获得了1952年的诺贝尔化学奖。由此，层析技术成为别离生化物质的关键技术。2、 瑞典的著名科学家Tisellius建立了“电泳技术，从而开创了电泳技术的新时代，他因此获得了1948年的诺贝尔化学奖。 50年代： 自1935年Schoenheimer和Rittenberg首次将放射性同位素示踪用于碳水化合物及类脂物质的中间代谢的研究以后，“放射性同位素示踪技术在50年代有了大的开展，为各种生物化学代谢过程的说明起了决定性的作用。 60年代：

3、1、各种仪器分析方法用于生物化学研究，取得了很大的开展，如HPLC技术、红外、紫外、圆二色等光谱技术、NMR核磁共振技术等。 2、1958年Stem，Moore和Spackman设计出氨基酸自动分析仪，大大加快了蛋白质的分析工作。 3、1967年Edman和Begg制成了多肽氨基酸序列分析仪。4、1973年Moore和Stein设计出氨基酸序列自动测定仪，又大大加快了对多肽一级构造的测定，十多年间氨基酸的自动测定工作得到了很大的开展和完善。 5、1962年，英国科学家Wilkins通过对DNA分子的X-射线衍射研究证实了Watson和Crick的DNA模型，与美国科学家Watson和英国科学家

4、Crick共同分享了当年的诺贝尔生理医学奖，他们的研究成果开创了生物科学的历史新纪元。 在X-射线衍射技术方面，英国物理学家Perutz对血红蛋白的构造进展X-射线构造分析, Kendrew测定了肌红蛋白的构造，成为研究生物大分子空间立体构造的先驱，他们同获1962年诺贝尔化学奖。 在60年代，层析和电泳技术又有了重大的进展，在19681972年Anfinsen创立了亲和层析技术，开辟了层析技术的新领域。 1969年Weber应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术测定了蛋白质的分子量，使电泳技术取得了重大进展。 70年代：1、基因工程技术取得了突破性的进展，Arber，Smith和Nathans三

5、个小组发现并纯化了限制性内切酶。2、1972年，美国斯坦福大学的Berg等人首次用限制性内切酶切割了DNA分子，并实现了DNA分子的重组。 1973年，又由美国斯坦福大学的Cohen等人第一次完成了DNA重组体的转化技术，这一年被定为基因工程的诞生年，Cohen成为基因工程的创始人，从此，生物化学进入了一个新的大开展时期。与此同时，各种仪器分析手段进一步开展，制成了DNA序列测定仪、DNA合成仪等。 80至90年代： 基因工程技术进入辉煌开展的时期。1、1980年，英国剑桥大学的生物化学家Sanger和美国哈佛大学的Gilbert分别设计出两种测定DNA分子内核苷酸序列的方法，而与Berg共获

6、诺贝尔化学奖，从此，DNA序列分析法成为生物化学与分子生物学最重要的研究手段之一。他们3人在DNA重组和RNA构造研究方面都作出了出色的奉献。 2、1981年由Jorgenson和Lukacs首先提出的高效毛细管电泳技术HPCE，由于其高效、快速、经济，尤其适用于生物大分子的分析，因此受到生命科学、医学和化学等学科的科学工作者的极大重视，开展极为迅速，是生化实验技术和仪器分析领域的重大突破，意义深远。现今，由于HPCE技术的异军突起，HPLC技术的开展重点己转到制备和下游技术。 2、1984年德国科学家Kohler、美国科学家Milstein和丹麦科学家Jerne由于开展了单克隆抗体技术，完善

7、了极微量蛋白质的检测技术而共享了诺贝尔生理医学奖。 3、1985年美国加利福尼亚州Cetus公司的Mullis等创造了PCR技术Polymerase Chain Reaction即聚合酶链式反响的DNA扩增技术，对于生物化学和分子生物学的研究工作具有划时代的意义，因而与第一个设计基因定点突变的Smith共享1993年的诺贝尔化学奖。 4、美国哈佛大学的Folin教授和中国的吴宪教授对生物化学常用的各种分析方法血糖分析、蛋白质含量分析、氨基酸测定等的建立作出了历史性的奉献。 5、1988年，美国遗传学家McClintock由于在二十世纪五十年代提出并发现了可移动的遗传因子而获得诺贝尔生理医学奖。

8、1989年，美国科学家Altman和Cech由于发现某些RNA具有酶的功能称为核酶而共享诺贝尔化学奖。 1993年，美国科学家Roberts和Sharp由于在断裂基因方面的工作而荣获诺贝尔生理医学奖。 1994年，美国科学家Gilman和Rodbell由于发现了G蛋白在细胞内信息传导中的作用而分享诺贝尔生理医学奖。 1995年，美国科学家Lewis、德国科学家Nusslein-Volhard和美国科学家Wieschaus由于在20世纪4070年代先后独立鉴定了控制果蝇体节发育基因而共享诺贝尔生理医学奖。 由近百年来生物化学及其实验技术的开展史可以看出，该学科的开展与实验技术的开展密切相关，每一

9、种新的生化物质的发现与研究都离不开实验技术，实验技术每一次新的创造都大大推动了生物化学研究的进展，因而对于每一位现代生物科学工作者，尤其是生物化学工作者，学习并掌握各种生物化学实验技术就是极为重要的。 二、实验室规那么1、不得缺席、迟到、早退。2、认真预习实验指导，明确实验目的，了解实验原理、方法和步骤，充分做好准备工作。3、进实验室应穿白大衣。4、保持实验室的安静和整洁，不随地乱丢纸屑杂物。5、遵守操作规程，如实记录实验数据，不得抄袭他人的实验记录或报告。 6、 不乱动与本实验无关的仪器设备，不乱用他组人的仪器和材料。7、实验室内各种仪器设备，未经同意不得擅自带出室外。不熟悉仪器性能时，切勿

10、随意动手。凡损坏仪器者，应立即报告指导教师，查明原因，并视情节赔偿处理。8、 在实验操作中要注意平安，听从教师的指导如发生事故要立即采取平安措施，并及时报告指导教师。9、 要节约水、电、药品试剂和材料。10、 实验完毕时，要认真整理好室内仪器设备，清点好各类用具，做好清洁整理工作，关好门、窗、水、电，经指导教师检查合格方可离开实验室。11、 实验完毕，应按实验要求写好实验报告交给指导教师。 三、实验室常识1、凡挥发性、有烟雾、有毒和有异味气体的实验，均应在通风柜内进展，试剂用后严密风口。尽量缩短操作时间，减少外泄，操作者最好戴手套、口罩。2、凡使用有机试剂需注意： 1远离火源：如乙醚、丙酮、乙

11、醇、苯等易燃试剂。 2最大限度减少与有机溶剂的接触。3、见光易变质的试剂，用棕色瓶贮存或黑纸包装，并每次少量配制。4、容量瓶是量器，不能用作容器。5、称量试剂应用硫酸纸，不可用滤纸。 6、标签纸大小应与容器相称，写明物质的名称、规格、浓度、配制日期及配制人。7、取用试剂后需将瓶塞塞严，放回原处。未用完的试剂勿倒回瓶内。8、配完试剂后，用过的器皿应及时用自来水浸泡以便清洗和减少对器皿的侵蚀。9、洗净器皿应倒置架上自然枯燥或烤干。10、贵重仪器要熟知使用方法，严格遵守操作规程，如溅污应及时擦拭。11、挪动干净玻璃仪器时，勿使手指接触仪器内部。四、实验室平安1、熟悉实验室环境，了解水、电阀门位置及开

12、关方法。2、不要用湿的手、物接触电源。水、电一经使用完毕，就立即关闭水龙头、电源及开关。点燃的火柴用后立即熄灭，不得乱扔。3、严禁在实验室内饮食、吸烟，或把食具带进实验室。实验完毕，必须洗净双手。4、绝对不允许随意混合各种化学药品，以免发生意外事故。5、一些有机溶剂使用时必须远离明火、热源，用毕立即盖紧瓶塞。6、倾注药剂或加热液体时，不要俯视容器。浓酸、浓碱具有强腐蚀性，切勿使其溅在皮肤或衣服上。稀释浓硫酸时，应将其慢慢倒入水中，而不能相反进展，以防止迸溅。给试管加热时，切记不要使试管口向着自己或别人。7、不要俯向容器去嗅放出的气味。能产生有刺激性或有毒气体如H2S、HF、Cl2、CO、NO2

13、、SO2、Br2等的实验必须在通风橱内进展。8、有毒药品特别是氰化物不得进入口内或接触伤口。剩余的废液也不能随便倒入下水道，应倒入废液缸或教师制定的容器里。9、金属汞易挥发，并通过呼吸道而进入人体内，逐渐积累会引起慢性中毒。做金属汞的实验应特别小心，不得把金属汞洒落在桌上或地上。一旦洒落，必须尽可能收集起来，并用硫磺粉盖在洒落的地方，使金属汞转变成不挥发的硫化汞。10、实验室所有药品不得携出室外。 五、实验室急救1、创伤：假设是玻璃创伤，应先把碎玻璃从伤处挑出。轻伤可涂以紫药水或红汞、碘酒，必要时撒些消炎粉或敷些消炎膏，用绷带包扎。2、烫伤：伤处皮肤未破时，可涂擦饱和碳酸氢钠溶液或用碳酸氢钠粉

14、调成糊状敷于伤处，也可抹獾油或烫伤膏；如果伤处皮肤已破，可涂些紫药水或1%高锰酸钾溶液。3、受酸腐蚀致伤：先用大量水冲洗，再用饱和碳酸氢钠溶液或稀氨水、肥皂水洗，最后再用水冲洗。如果酸液溅入眼内，用大量水冲洗后，到医院诊治。 4、受碱腐蚀致伤：先用大量水冲洗，再用2%醋酸溶液或饱和硼酸溶液洗，最后再用水冲洗。如果碱溅入眼中，用硼酸溶液洗。5、吸入刺激性或有毒气体：吸入氯气、氯化氢气体时，可吸入少量酒精和乙醚的混合蒸气使之解毒。吸入硫化氢或一氧化碳气体而感不适时，应立即到室外呼吸新鲜空气。但应注意氯气、溴中毒不可进展人工呼吸，一氧化碳中毒不可施用兴奋剂。8、毒物进入口内：将510ml稀硫酸铜溶液

15、参加一杯温水中，内服后，用手指伸入咽喉部，促使呕吐，吐出毒物，然后立即送医院。9、触电：首先切断电源，然后在必要时进展人工呼吸。10、起火： 六、玻璃仪器的清洗及各种溶液的配制 一洗涤方法：洗涤程序：泡洗泡冲漱1、新仪器的洗涤： 12%的盐酸浸泡数小时 2自来水冲净 3洗涤剂溶液中浸泡过夜 4用试管刷擦洗容器内外壁 5自来水冲10遍 6蒸馏水漱洗内壁3遍 7枯燥备用 2、使用过的玻璃仪器的清洗 1自来水洗刷至无污物。 2用适宜的毛刷沾去污剂粉洗刷，或浸泡在0.5的清洗剂中超声清洗比色皿决不可超声 3用自来水彻底洗净去污剂。 4用无离子水洗两次，烘干备用计量仪器不可烘干。1非定量敞口仪器的洗涤试

16、管、烧杯等： 1洗涤剂溶液或清水中浸泡过夜。 2试管刷蘸肥皂、洗衣粉擦洗容器内外壁。 3自来水冲10遍。 4蒸馏水漱洗内壁3遍。 5枯燥备用。注意：检查毛刷顶部是否裸露，洗刷时用力不可过猛，以免戳破玻璃仪器。 2窄口仪器的洗涤容量瓶、试剂瓶： 1洗涤剂溶液或清水中浸泡过夜。 2)洗涤剂溶液倒入容器内约1/4。 3)小心转动或摇动仪器。 4)自来水冲10遍。 5) 蒸馏水涮洗内壁3遍。 6)枯燥备用。3 石英和玻璃比色皿的清洗1用1 2的去污剂浸泡。 2用自来水冲洗，可使用一支绸布包裹的小棒或棉花球棒刷洗。 3蒸馏水涮洗内壁3遍。 清洗干净的比色皿也应内外壁不挂水珠。 决不可用强碱清洗，因为强碱

17、会浸蚀抛光的比色皿。 4、刻度吸管的洗涤： 1)使用后立即用大量自来水冲洗。 2)枯燥后放入铬酸洗液中浸泡过夜。 3)取出后用自来水冲洗30分钟。 4蒸馏水涮洗内壁3遍。 5枯燥备用。5其它： 具有传染性的容器应先高压再清洗。二判断洗净的标准： 洗净的玻璃仪器管壁光洁、清亮，无污渍； 被水湿润后，管壁呈现均匀水膜，无挂水珠。三枯燥方法 1、晾干：自然晾干。 2、烘干：放入烘箱烘干。普通仪器用80-100，容量分析仪器用37-40。 3、有机溶剂枯燥：体积小的容器急需枯燥时，可用此法。四洗涤剂的种类和配制方法：1、铬酸洗液：配制：称取10g工业纯K2Cr2O7置于400ml烧杯中，加少量水溶解后

18、，慢慢参加200毫升粗硫酸工业纯，边加边搅。配制好的溶液应呈深红色。待溶液冷却后转入玻璃瓶中备用。注意： 1因浓硫酸易吸水，应用磨口塞子塞好。 2使用铬酸洗液时应特别小心，注意平安。3使用洗液前，必须先将仪器用自来水和毛刷洗刷，空干水分。4用过的洗液不能随意乱倒，应倒回原瓶，以备下次再用。5当洗液变绿而失效时，绝对不能倒入下水道，只能倒回废液缸内，另行处理；6用洗液洗涤后的仪器，应先用自来水冲净，再用蒸馏水润洗内壁23次。2、浓盐酸 :洗去水垢或某些无机盐沉淀3、5%草酸溶液：洗去高锰酸钾痕迹4、5%-10%磷酸三钠溶液：洗涤有污物5、5%-10%乙二胺四乙酸二钠：加热煮沸可洗脱玻璃仪器内壁的

19、白色沉淀6、尿素洗涤液：洗涤蛋白质贫或血样容器 七、常用实验设备及其使用方法一天平1、天平的选择 天平的种类有很多，根据所称量目的物的不同或精细度不同，应选用不同的天平。 常用的天平： 托盘天平 电子天平 电光天平架盘药物天平托盘天平电子天平电光分析天平扭力天平按精度分可分为两类粗天平：感量十分之一0.1g 感量百分之一0.01g 粗天平主要用来称取较多样品或用于配制浓度要求不高的试剂称量。分析天平： 感量 千分之一 0.001g 万分之一0.1mg 十万分之一0.01mg 分析天平那么用于基准物的称量和配制标准溶液及少量样品的称量。2、托盘天平的使用1 零点调整：使用托盘天平前需使游码放在刻

20、度尺的零处。托盘中未放物体时，如指针不在刻度零点，可用零点调节螺丝调节。 2称量：称量时，称量物放在左盘，砝码放在右盘。添加砝码时应从大到小。在添加刻度标尺以内的质量时例如 10 g 或 5 g可移动标尺上的游码，直至指针指示的位置与零点相符偏差不超过 1 格记下砝码质量，此即称量物的质量。注意： 称量物不能直接放在天平盘上称量，而应放在质量的纸或外表皿上。 潮湿的或具腐蚀性的药品应放在玻璃容器内。 托盘天平不能称热的物质。 3称量完毕：应把砝码放回盒内，把游标尺的游码移到刻度“0处，将托盘天平清扫干净。 3、电子天平的使用 优点：1称量准确、操作简单、便于使用。2)电子天平到达平衡时间短，使

21、称量更加快速。电子天平一般均具有自动调零，自动校准，自动去皮和自动显示称量结果等功能。1电子天平使用方法 核实天平是否处于水平状态； 开机预热； 取称量纸一张，对折前方天平称量台上； 按去皿键，使天平显示值为0.00g； 轻轻叩打试剂瓶，徐徐倒入试剂； 取除过量的试剂弃掉； 关闭电源； 清理称量台及天平周围。 2使用电子天平几个本卷须知：天平应置于稳定的工作台上，防止振动、气流及阳光照射。在使用前调整水平仪气泡至中间位置。按说明书的要求进展预热。称量易挥发和具有腐蚀性的物品时，要盛放在密闭的容器中，以免腐蚀和损坏电子天平。操作天平不可过载使用以免损坏天平。如果电子天平出现故障应及时检修，不可带

22、“病工作。经常对电子天平进展自校或定期外校，保证其处于最正确状态。假设长期不用电子天平时应暂时收藏为好。 二分光光度计见第二章三离心机见第三章四恒温箱 1、水浴恒温箱 通过调节使箱内液体保持所需的温度，将样品放置其中维持温度环境。相介质是水，故称为“水浴箱。 水浴式恒温箱多用于37，12小时保温(如酶切反响等)，不适宜过夜等长时间连续使用 。 (二)空气恒温箱 箱内空气的温度可以调节，样品放置在一定温度的空气中因温度传导介质为空气。 样品到达设定温度所需时间较长，所以样品需要短时间恒温时，不宜使用此型恒温箱。但因样品的周围为空气，可用于需恒温振摇的样品。如大肠菌培养。(三)固相恒温箱 严格地讲

23、，应称为恒温台，通常是用导热性很好的金属(如铝)制成，台上有不同直径的孔穴，盛有样品的试管可直接插入孔穴中，通过金属块向样品传导热。 温度调节所需时间很短，便于使用。但因台上孔穴是固定的，故样品试管应与其匹配。如稍有缝隙，可充填少量液状石蜡，以增加孔穴内壁与样品管壁的接触。 五振摇器(shaker) 又称为床式振摇器或摇床。 用途：充分混匀两种或几种试剂，或增加反响 分子间接触时间。 分为：空气摇床或水浴摇床。 振摇器的种类：1、旋转式摇振器： 在水平面上旋转振摇，多用于三角瓶内细菌培养台时，其内样品快速旋转，从而被搅拌混匀。 2、水浴往复式摇振器：在水平面上往返振摇，多用于在试管内增菌或混匀

24、。 3、跷板式振摇器： 如同跷板两侧上下移动，多用于电泳凝胶的染色与脱色等。4、水平式振摇器： 板面做水平运动，主要用来混合液体或脱色。5、旋流振匀器： 由一强力小型马达带动橡胶制圆形平台以600rmin的高速做很小半径的旋转运动，主要用来混匀小试管内的液体。六刻度吸管及微量移液器1、刻度吸管1作用：用于准确移取一定体积的溶液。2规格ml： 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、 5.0、10.0 3本卷须知：1使用前观察吸管有无破损，污渍。2吸管的选择：所用吸管的规格应等于或近似等于所要吸取的溶液体积。 3吸管的握法：拇指和中指夹住吸管，食指游离。4) 取液：将吸管垂直插入溶液 ，入液深度

25、适中。用洗耳球吸取溶液高于所需高度2-3cm ，用食指按紧吸管上口，将刻度吸管提离液面，观察液内无气泡，并用滤纸擦净管壁。 5)放液至刻度：将刻度吸管垂直，眼睛与刻度线平行，轻轻松开食指转动刻度吸管，使液面缓慢降低，直至最低点与刻度线相切。6)放液至容器：将刻度吸管垂直置于45倾斜的容器内壁上，使溶液自然流入容器，注意吹与不吹有“吹字，说明刻度到尖端，放液后需将尖端的溶液吹出，否那么不吹。 7)一根吸管只吸取一种试剂，用后立即浸入水中。 2、微量移液器(micro-pipetter) 实验室中最常用的精细仪器之一。 根本构造和原理： 通过按动芯轴排出空气，将前端安装的吸头置入液体试剂中，放松对

26、芯轴的按压，靠内装弹簧机械力，芯轴复原，形成负压，吸引液体。 微量移液器的握法： 手掌握住器液器，拇指按压。微量移液器的使用：1设定容量 ： 连续按压数次，以调节空气。 调节体积至所需的刻度。不允许超出额定范围调整 接上Tip头，注意密封。读数显示05555l100 l155l155200 l550l0551000 l个位十位2吸液:按下控制钮至第一档；将移液器吸嘴垂直进入液面下 1-6mm 视移液器容量大小而定；为使测量准确可将吸嘴预洗 3 次，即反复吸排液体 3 次。使控制钮缓慢滑回原位；移液器移出液面前略等待 1-3 秒；缓慢取出吸嘴，确保吸嘴外壁无液体。 3排液 : Tip头贴住容器内

27、壁 平稳地把按钮压至第一停点，1秒钟后再压至第二停点 将剩余液体排净；松开控制钮； 然后按压弹射键弹射出吸嘴。 按钮起始位置 0第一停点位置 1 第二停点位置 2IIIIIIIV4养护：如液体不小心进入活塞室应及时去除污染物移液器使用完毕后，把移液器量程调至最上线，垂直放置在移液器架上；根据使用频率所有的移液器应定期用肥皂水清洗或用 60 的异丙醇消毒，再用双蒸水清洗并晾干；防止放在温度较高处以防变形致漏液或不准；发现问题及时找专业人员处理。 5本卷须知：垂直吸液、慢吸慢放；选择适宜的量程范围，不能超过量程使用；选择与移液器匹配的枪头，安装枪头时不要用力太猛；移液器每日用完后，应旋到最大刻度。

28、当移液器吸嘴有液体时切勿将移液器水平或倒置放置，以防液体流入活塞室腐蚀移液器活塞；需要高温消毒的移液器应首先查阅所使用的移液器是否适合高温消毒后再行处理。七pH值的测定及pH计 1、 pH值的测定1pH试纸：简便，但较粗略 广泛pH试纸：变色范围是pH=114、914 精细pH试纸 ：变色范围pH=1.43.0、0.55.0、测定的方法：是将试纸条剪成小块，用镊子夹一小块试纸，用玻璃棒蘸少许溶液与试纸接触，试纸变色后与色阶板对照，估读出所测pH值。注意：切不可将试纸直接放入溶液中，以免污染样品溶液。试纸要存放在有盖的容器中，以免受到实验室内各种气体的污染 。2p H 计(pHion meter

29、) 。pH计的使用程序： 1、接通电源。 2、将玻璃电极从防止电极枯燥的保护液中提出。 3、用洗液瓶盛装新制备的蒸馏水，反复冲洗电极，再用滤纸将残留的水珠吸干。 在此过程中，手指一定不能触摸电极的中下段(即测定pH值时浸入溶液的局部)，此外，手接触过的滤纸局部也不能拭吸残留水滴用。 4、将电极浸入pH一6.86(2 0)的标准液中校正，待指针稳定后旋转调节旋钮，使其指示的刻度与标准液的pH值相符(6.86)。 5、取出电极用蒸馏水冲洗，同(3)。 6、再用酸性标准液(pH4.01)或碱性标准液(pH9.18)进展校正。 7、重复(4)(6)至少两次，以保证校正准确。 8、将冲洗后并拭干的电极浸

30、泡液到待测溶液中。 9、如需调整溶液至所需要的pH值，应加搅拌子在搅拌状态下缓慢进展。 10、测定完毕，充分冲洗电极，拭吸干后，浸泡到防止电极枯燥的蒸馏水中。 本卷须知： 经常检查电极内的4mol/L KCl溶液的液面，如液面过低那么应补充4mol/L KCl溶液。玻璃泡极易破碎，使用时必须极为小心。复合电极长期不用，可浸泡在2mol/L KCl溶液中，平时可浸泡在无离子水或缓冲溶液中，使用时取出，用洗并冲洗玻璃泡局部，然后用吸水纸吸干余水，将电极浸入待测溶液中，稍加搅拌，读数时电极应静止不动，以免数字跳动不稳定。 使用时复合电极的玻璃泡和半透膜小孔要浸入到溶液中。使用前要用标准缓冲液校正电极

31、。电极的玻璃泡容易被污染。假设测定浓蛋白质溶液的pH值时，玻璃泡外表会覆盖一层蛋白质膜，不易洗净而干扰测定，此时可用0.1mol/L HCl 的1mg/mL胃蛋白酶溶液浸泡过夜。假设被油脂污染，可用丙酮浸泡。假设电极保存时间过长，校正数值不准时，可将电极放入2mol/L KCl 溶液中，40加热一小时以上，进展电极活化。 八实验室用纯水生化实验常用水：二次蒸馏水和无离子水。超纯分析和特殊的生化实验： 1518 M-cm高纯无离子水 无热源高纯水 无菌水 亚沸蒸馏水 无二氧化碳蒸馏水等。 实验用水的制备 1、离子交换法 通过离子交换树脂使水中的离子化合物被吸附而使水纯化。 2、蒸馏法 蒸馏法主要

32、是利用水在沸点(100)时变成蒸汽，遇冷时又重新凝结成液体水，水中不能被蒸发的物质残留下来而被去除。通过几次反复操作，那么可以得到高纯度的纯洁水， 3、超纯法 超纯法指通过数次高性能的离子交换树脂处理后再经过微孔滤膜过滤，所得到的水的电导率可达1 8Mcm3，与理论纯水的18.3 Mcm3很接近，故称为超纯水。 可用于分子克隆、DNA测序、细胞培养等各种精细实验。 实验工作中不应盲目追求水的纯度，水的价格随水质的提高而成倍地增长，因此要根据实际工作的需要，即所用水中应排除的干扰物质的类型，来选用水的种类，如：无离子水、普通蒸馏水、二次蒸馏水、亚沸蒸馏水及按特殊要求制备的高纯水等。 所有的各种纯

33、水，在贮存中都会被污染：塑料容器会产生有紫外吸收的有机物；玻璃和金属容器会产生金属离子的污染；长时间放置更会使水长菌，空气中的二氧化碳会溶入水中，所以贮存高纯水一定要隔绝空气，密封盖严，必要时贮存在冰箱的冷藏室中。 九消毒系统 生化实验要进展生物培养和生物反响的操作，这些操作都必须排除其他生物因素的干扰，因此在做这些实验之前，都必须对实验中用到的、可能造成污染的材料、器械等进展消毒灭菌处理。 消毒灭菌的方法: 高热高压消毒(湿热消毒) 干热消毒 滤器滤膜除菌 紫外线照射 化学灭菌 火焰燃烧1、高压高温灭菌 高压高温灭菌也称湿热灭菌，通常是利用高压灭菌锅来完成，使用范围广，为一种最常用的灭菌方法

34、。 注意: 1、多数塑料制器具或不宜超过200的物品应选用其他灭菌方法(如干热灭菌)。 2、液体试剂虽可用此方法灭菌，但因水蒸气遇冷会形成水珠，故灭菌后需再次枯燥。 2、干热灭菌 干热灭菌通常是在温度可达200以上的干热消毒烤箱中进展。适用：玻璃器皿、金属器皿及耐热的树脂类制品。灭菌的温度和时间： 一般160，2小时即可到达灭菌效果。3、滤膜灭菌 适用：酶、血清及培养液1、Zeiss滤器灭菌2、一次性滤器配合一定孔径的滤膜进展过滤灭菌。材料：树脂 规格：数十毫升到数百毫升 0.22m孔径滤膜过滤即可到达除菌灭菌目的。一次性滤器和滤膜均为灭菌包装，使用方便，且灭菌效果可靠。 4、化学消毒法包括：1苯扎溴铵(新洁尔灭) 70乙醇 0.1% SDS 0.5过氧乙酸适用：无法用其他方法消毒的物品，如操作台、实验者的手臂皮肤。方法：擦拭5、紫外线灭菌优点：紫外线直接照射灭菌法方便、效果好适用