生物技术概论复习问答题

1、基因工程，又叫基因拼接技术或DNA重组技术，是指按照人们意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造后放入另一种生物，改造其遗传物质，在较短时间内改变现有物种的性能，创造出更符合人们需求的新生物类型。? 基因工程操作步骤：目的基因的获取? 构建克隆载体? 形成重组DNA分子，导入受体细胞? 筛选含有目的基因的受体细胞，对目的基因进行检测和鉴定.什么样的细胞可以作为受体细胞？（原核细胞、真核细胞、动植物受体细 胞）25. 1受体抵胞作为茶肉工程的受体细胞，从宴除技术上讲足循招取外源门A跳闲人并使K徽定维 : 持的配以实目的上讲是时应用价侑或理检研究忤他的加做，无论更耳幡生的细胞还耳植生物堀胞

2、都可作为受体脑胞但不Y场山的细胞都可以作为受体电 透用受体细副时I 11点考/以下几点r便于作源DNA分子的导入，外在其内能粗定维将.便于克子 （转化于）的簿选.立传性。定.时遗传密码的应川匚无明显阳倚性，适于外.因的育 效盘达、友达产物的分逆或根整，对口模力拘，的结因的岛教袅达-亚选艮哥较好的嶂 后*T机制.易于犷大培养成发肺牛长 只有转舟忙I产应M价值和理能研究像修安全性骞，不会对外野陷境造成牛物话染*曲实验U的不同*选抖的赞体加11 除了安至姓育 这一点外，箕余存点未必都舞再A,I2.目的基因导入受体细胞有哪些方法？外源DNA转化法.化合物诱导转化法.根癌农杆菌介导的Ti质粒载体转化法.

3、电穿孔转化法.微弹轰击转化法.激光微束穿孔转化法.超声波处理转化法.脂质体介导转化法.体内注射转化法.花粉管通道转化法.精子介导法.低能离子束介导转化法噬菌体颗粒转导法3.筛选重组子有哪些方法？根据载体标记基因筛选转化子.根据载体抗生素抗性基因和相应的选择药物筛选转化子.根据载体除草剂抗性基因和相应的选择药物筛选转化子.根据lacZ 基因互补显色试剂筛选转化子.根据生长调节剂非依赖型筛选转化子.根据核甘酸合成代谢相关酶基因缺失互补试剂筛选转化子4.蓝白斑筛选的原理是什么？ AR 3 * 币 Hd vr mLTW 弋 2 vlj 南门J e箝幔裳因互补显色试剂解选转化于 此万法七要用,旧转片物.

4、 半.|百亚国物分睫失的DNA片段.含占/的氤组版体转化办/互补揖曲株*可转 那伊串乳.首.在含有Xn疝（5-UI-1 ft ：叫咏，门半乳精首】和1PTG （舁丙基洋1 代半乳精昔）的培养基上使转化f成为蓝色菌落*而以/讣个陶株”母勾白色*著*学 .体的fw胃抵林人%瀚小田辰.再转化&7州朴哈南林，由！*鹿鼬海/，乳精令 转化手即使在含自X gaj和】F】3的培祥M I一也II能K成门色鲫落.这怦可LI区分含外基 因和不含外.基因的梏化f 为,商免人尸“扑咽恒除心 K成的白色幕的卜扰* tttt 在构建裁体酎再绯装一肿供及件筛选的猛国:. ；Ii,：,jUMI限制性内切酶分别以交错切和平切的

5、方式切割DNA双链，产生几种末端型 DNA分子.植物细胞培养的理论基础包括哪些？细胞全能性，脱分化，再分化。植物体每个正常细胞都含有该植物的全部遗传信息，在适宜的条件下能发育成完整的植株.什么是愈伤组织？愈伤组织是原指植物体的局部受到创伤刺激后在伤口表面新生的组织，有活 的薄壁细胞组成，可起源于植物体，任何器官内各种组织的活细胞。.植物组织培养的基本流程先从植物中取道外植体，外植体经过脱分化形成愈伤组织，然后由愈伤组织进行再分化,把它变成胚状体，然后继续培养，让这个胚状体，慢慢长成整个的植物。.细胞融合体现了何种生物学原理？细胞膜具有流动性.细胞融合首先要解决什么问题，有哪些方法？细胞壁，.体

6、外培养动物细胞需要提供哪些物质，需要怎么样的环境条件？动物细胞培养的一般条忤培葬液营养成分：觑通，蹑源（提供能靠）:无机盐，雎生素.激素（代附的调节控制）pH: 7.2-7.4 （低时抑制细胞生长，高时蜘胞不能生长）无葡条件：温度：3547度，不同动物细胞味源略有美异气体；不短供给甄气.排除二氧化碳特殛要求7,比较植物细胞培养与动物细胞培养的异同，内容包括原理，培养基成分，培 养结果，培养目的等。动物细胞培养与植物组织培养的对比比较项目植物组觐培养动物细胞培养区别原理植物细胞的全能性（得到个年）动物细胞增殖（得到细虺 群）培养基固体和半固体培凝基液体培养甚培养条件营养:4物康，蔗糖.维生 索、

7、有机布加界L植物激索.再分化的过程中需要光营养；无机盐，葡糖、维 生去，氨基酸，动物血清 或血浆、抗生素、不需要 光细篦来源离体植物解密，组级或细胞 （分生区的组织细胞最佳）胚胎或幼龄动物组维，器官批果获得新个体或细胞产品大量生产细胞或细胞产品用途快速繁殖各美花弄和暴树培养无毒的植物，转基因植 物,单倍体育种大量生产细胞产品（鹑物 等）生产蛋白质制品.如疫 苗.干扰素，单克隆抗体 检测有毒物质研究搞理、痣理移植技术相同点都需要人工条件下的无菌操作 都需要适合的温度，酸碱度动物细胞培养在二氧化碳培养箱里，为什么呢？二氧化碳不仅是细胞生长的必需成分，还与维持培养液的pH有关。细胞的体外培养需要理想

8、的气体环境，氧气、二氧化碳是细胞生存的必要条件。氧气参与细胞的三竣酸循环，为细胞生存、代谢与合成提供能量；二氧化碳既是细胞的代谢产物，是细胞生长的必需成分，又与维持培养液的pH有关。大多数细胞适宜的pH范围往往是7.27.4。在开放式培养中，以5% 的二氧化碳气体比例为宜。1、什么是发酵？列举你所熟知的与发酵相关的产品|在无氧条件下，底物脱氢后所产生的还原力不经过电子传递链而交给某一内源性氧化中间代谢产物，并产生 ATP的生物学过程。乳酸、酒精2、发酵工程的定义？发评工程是事物技戒的春版成部分，是电特技术产业化的审番球节.它是一门普微11 物芽、生物化学和化字工钮学的息奉原理有机地蚂令起来,利

9、用损生物的生诧和代谢活动袅 生产卷种布用物廊的工按卡.由于它以培星抵土拘为W.因此又称业生物工程.是利用微生物学等相关的自然科学以及工程学原理，利用微生物等微生物细胞 进行酶促转化，将原料转化为产品或提供社会性服务的一门学科。由于它以培 养微生物为主，又称为微生物工程。发酵技术就是指将微生物学、生物化学和化学工程学的基本原理有机地结合起 来，利用微生物的生长和代谢活动来生产各种有用物质的工程技术。3、发酵技术的应用领域？4.1.3发酷技术的应用发雕过程蚂上述特已体现广发解工程的林种优点* H前*在昵源.贷静黑米.AH,供 食及将安网18日拄尸的恸加卜*发T程作为现代生物段末的窗餐的成部分之一得

10、轲越 串槽广眨的应川I Gm福T业.，出IT产抗吃索.逵生等常用两物和人JW扁己麻寤翦，产扰素.透明质睢等嬴菊.食品工亚.用于IR生物白、氨基ML长料、酒类和 枝食品奉如剂t柠修酶.孔酸.天然色素等）的生产,为盛源工业，通过微生梆发 醉.可鞫乘色帼的事秆，本属及工会亚生产中的杆器靠丰轩堆京.水舫京等康拜物转化 为地体或气体增收乙W或涮、：,逑可利用绿生物聚的、产乳及制奥微生物也泊，J化学 T业.用于生产时降解的生物夔蝌.佗工朦料i乙罅.丙TW,矣二酸等;和一篁生物 ，而一竹制及1物髭蒙和L 泠金T业 餐，物可用于It舍开采和铜.衲/一.：.4E&.用于击I固氮和生产笠嘉血制凝修生物帆黑.为寂业

11、和离较W的增产粒算了以大 作用.环境除护.M用谶生物米冷化白毒的宿办化昔的，癖解海上浮油.清粽自诉P悻 和蹲胃物康，以及健用有机康水.康清等.4、常见的微生物发酵过程分类（微生物种类，培养基状态）？发酵中常用的微生物根据做生物的种类不同（好氯伏黑.赖性优做生物发好过程T以分为好奴性发 球过程相应策性发解过程两大类.（0野加性发蹲 在发解过程中需要不断通人一定量的无背空气.如利用黑曲毒 13卡山八一必”）进行的柠幄/发解,利用棒状杆第 （Corynbacffrimn ）进行的存退陆 发胖.利用黄单弛蕾（XuNmG 进行的多幅发酷等.（2）庆粗性发醉在发解时而需要供给空气.如乳睢杆卡 3用门口山口

12、”小）引超的乳酸发怵.楔状小朋杆篇（ClsmdiQ号I起的内SL 丁葬发解等.此外，醉时他是兼性段氯微生物.它在辄条件下进拧氏裂性发解租累乙醉，而在有氧 即通气条件下则进行好氧性陵薄,大*繁用菌体细施.因此酬为兼性发祥.里郸培东基茯愚的人同（固体或液体）,微生物发辨可分为固体发陆和液体发解，如皋校 照发带出赤朱分.乂可外为敞门发卅.密闭发W.浅髭发带和深层发昨 般敞口发醉应用于 繁殖快并避有好氧发鼻的类埴.其设备要求商单.例如,辱琲菌生产，由于其阴体迅速而大 系殖，可抑涮其他杂酸生长.相反.需闭发濡是在密闭的设盖内迸行.因此设备要求严格 艺也较复杂，浅盆发解（表面埼葬法是利用仅装一薄层培养渔的

13、浅叁，接入匿种后进行表面 培建.在液体上面脂成 保M膜.在跳乏逋气出得时.对一些索脂帙的好氧性微生胡可利用此 法.深层笈障是指在液体培养基内部（不仅仅在表面）逆行的微生物培养过程.，液体深层发解是在声奇素等抗生素的生产中发展起业的技术.同H他为:解方法相比.它员 小很多优点！液体浮状盛是很重微土初的适生长环境*在液体中*普体及营养物，产 物f包括急SD曷于扩散，使发可在均质或热均质条件下进行，便F控制，易于扩大生产规 根工液怖播送方便，%F机厘化网作：厂房厮帙小.生产效率高*易避行I动化控制，产 品质皓挽定；不产品奶于提取,精制等.因此液体深层发解在发展T业中被广泛应用。细菌，放线菌，霉菌，酵

14、母菌，其他微生物，如担子菌，藻类等天然培养基L根据来源分： 合成培养基半合成培养基3.根据用途分:泡子培养基种子培养基工厂乍间实验室基础培养基 ,加富培养基 鉴别培养基选择培养基2.根据主要成分或使用目的分发酵培养基满足大生产中大量菌体生长和繁殖以及代谢产物积累.5、发酵培养基的组成？4. 2. 2. 2 发除培养基的组成注解培弗基的组成和配比由于菌种不同.注备和丁仁不同.以艮原料来源和质最不同而 有所差别.因此、需整根据小同锲求考晦所用培幅总的成分与配比.但是综合所用培养法的 营养物分.不外乎是破源（包括用作消泡剂的油类人氯源，无机盐类（包括曲晶元素儿生 长因子等几类.0)碳源 碳源.是构脆

15、便修和产物的峨架取能及来源.常用的碳源包拈各神畦迅速利 用的单箱(如新相幄、果精八 取帧(如世糖、麦芽糖，和缓攫利用的淀粉.纤维彘等冬樵, 学勘壑警菌体分泌的水解崎分繇成单槽后才能琴与微生物的代谢 L米淀粉及儿水傣液是抗 生索、氨基触，褛昔酸.胸制剂等发解中常用的硼ML9餐、小麦，燕麦淀粉等用于有机 酸、醇等牛产中.萄菊和放线菌还可以利用油脂作碑源.因此在寄函和放线阐发解过步中加 人的油听既白消泡乂有扑充碟源的作用某嗖有机艘.力，在甲细胞斑白.救展相,堆生黑， 能角用I和某咚抗生素的发酬生产中也可作为嘿源使用6的是作补先碳源匕12)氮源 凡是羯成微生物细胞本身的物加或代谢产物中氮素束源的甘养相

16、做.称为 氮源.它是微生物发群中使用的主要原料之一.常用的氮源包括有机第源和无机叔源两大 类.黄蜕饼粉,花生饼粉、棚杼胡粉、玉米桨.童内陈.霹母粉、的粉等他右机偏源.无机 M源有基水、破酸软、氯化钱、硝赧盘等.(3)无机款和M量元素 般生的的生长.繁殖和产物形成需要笄种力机法类.闻瞬播 拄.硫酸it、新化副、乱化押，以及量量元素.如镁，杖、结、锌.恬等.其生理功能包 括工构成前体原生质的觇分(,磁等兀作火痛的组成成分或维持他的活性镂.帙、钻、 W,牯等八节细胞的渗透压和最响细胞膜的通透性1气化纳,融化一等九鎏与产物的土 巧合成等.做生物对做欧元素的需要是钱电的. 晚门，小区mL的浓度就可以满足

17、要求.(4)生托因子 生区内足一类装生物常正常生活不可缺少，但细胞自身不能合成 的RN微止由一机化介物.仅插缗生素、气柒酸.暗吟和用嗫的衍生物.以及版肪酸等.大多 数维生素是辅幅的组成成分,没有它们，的就此法发挥作用.其需要量甚微,一般1一 SOpg/L,其至里隹.各种微生的对外器额基酸的箫襄是不相同的,原决于它们向身合成班 基酸的能力.电通明生物自身不能合成的4抵懒, 艇需以游海猛私酸或小分广族的格式供 应.而事畛，通曜及德衍生物的主要功临骷构成核检和辅前“酹理膏，牛肉鬲,曲白就和一 些动植物组飙的浸液，如心脏，肝.番珞相藏荣的浸越.都晶生长囚子的丰富来源(S)水 水是培探珞的主要组成成分，

18、它腐足构成菌体细胞的主贽成分.乂是一切计 养物质传递的介质，而且它还直接参与许寿代制反应.由于水是许鎏化学物质的良好癖荒, 不同来源的水.如深井水、自来水，地表水内含的物或可能小网.这些将域将对发樽产生影 响 因此水的质咕对粉物的牛氏繁殖和产悯合成有胃很中雪的作川.发蚱中使用的水府津 坤永一门来水用地.用水，()产物聪成的磷导物、域体和促进4H阵缪胞外看的合成要最当的谶铮物存并二而前体兄指被甫休直接用于产物合成而白4靖种无显菁政力的物如合成育毒素G的世乙陵.合眄红心里的内能等.岬前体物质的含成曷产物合成的限制因素酎，添加的体能增加 这些产物的产量,并在某种程度上控制生物合成的方向.在有些整醒过

19、程中.添博某些促进 制能刺激曲株的生长.提岛发醺产鼠.蛇短发帆周期.在四环家发解中加入演化伯利M-促 迸翻，2媒草翟外曝蜂.能抑制命毒素的牛物合成.同时增加四环素产址.6、发酵的一般过程分为?4. 2. J 发酵的一般过程生物发辩之多种学样.但班本上包括莓种制备,种子培推.发酵和提取精制等几个过 科 响型的段解过程珈闱t1所示，下面以超两混酢为例M叮说刚.I斫看蹲钟着-聊下里 一一* 土产，培养压叱潴*培春命 1*船富I/产品物长无拙1强i蝎养事配制脐独基单相M 4 I做型发餐网米式程小总凰生物素：生物素又称维生素 H、辅酶R,是水溶性维生素，也属于维生素 B族, B7。它是合成维生素C的必要

20、物质，是脂肪和蛋白质正常代谢不可或缺的物 质。是一种维持人体自然生长、发育和正常人体机能健康必要的营养素。1、液体深层发酵的类型及它们的定义？分批发酵、补料分批发酵及连续发酵4.3, L1 分批发醇营养物和葡神一次加入进行培等直到靖柬族电.中间除了空气迸人和尾气排出,与外 部没有物料交换=传统的生也产品发醉多用此过程，它除了控制温度，pH及通气以外，不 迸行任何其他捽制.操作简单 便从细附所处的环噎来看.则有明旨理变,发都初期营塾物43*L2 连续发瞭所调连续友旭居指以罡的速率向发解端内添加新算培养基.同时以相同的座承流加 培养液，从而使发醉舜内的液心维持恒定.微生物在注定状餐下生匕造定状必可

21、以有敕旭L3, L3 补料分批度降补料分批发酵上际军连续发展.是介干分批发醉和旌续K肝之间的一种发寿技繁.是指 在做t物分批发罅中以草稗方式陶培养系统朴加一定物料的划界技术.通过向培养系统中 补光物料,可期使培养液中的营养物诂度较任时间地保持在一定范闱内.嬴保证满生的的生 氏需要，又不造成不利阴响.从而达到蜴高产率的目的.2、分批发酵过程中微生物生长曲线主要包括哪几个阶段？3、对发酵过程影响较大的参数有哪些？温度、PH、溶解氧浓度、爱昌过悭中.为广肿生产过悭进行必矍的控制*需要时杆关工艺参数通行定蟠取样侧定 或进行盖检编修反映发解过程哌化的参数可以分为两类一类足可以fi描果用特定的传感 器检溃

22、的髻数.它们包括反映物理环境和化学环境变化的叁数*如温度.柒力，搅拌功率， 也述.泡泳，发醉液黠度，浊度、pH,高于浓度.溶解氨,基质浓度等，密为悝接参数. 另一类是至今尚酢干用传感器来榕浦的参数.包括湘胞生长速率，产物合成速率和呼啜燥 等.这些参数1要在一些直“数的甚础上,借助丁电脑计算和特定的数学模型才能得到. 因此械称为间接嗨数.上述参数中，对发解过程淞响较大的有温度、pH ,溶解辄浓度等.4、发酵下游加工过程主要包括哪几个主要步骤？F游加工过程由许多化中儿操作组成.通常可分为发解液掩处理和固液分离，提取、 精制，以及成品加工4个阶段.其一版流程如网的】。所示.发际希i用处理（加疆、调p

23、H* Hf） t由牌分离fillL离心分科.鼻11充1 TOC o 1-5 h z *胸蜩胞瞪W 内优.崎m外|产乂胞静片M寓心分富.也微过建，百水粕草奴）钻初涉t生折提唳附、离子交换、菜曲.想建）4AftMR馆迎、迤以房新分离.靖仙14成品加工（洋，无U浊、Tffi ria rtttai的工艺就程5、发酵下游加工过程中常用的产物提取方法有哪些？3. 4. 2 提艰经上述生受处理后.活性物质存在丁添清或通心清液中，液体的体积很大，浓度很 低.接下来要进行提取.提取的目的主要是浓野,也有一些纯化作用.常用的方法如卜.1）吸附法工对F抗生素等小分子物嗫口1用啕附法.现在常用的吸附M为大网符聚合物.

24、 另外还利用活性炭.白土，辄化情、树揩等.2）离了交换法，但性化含糊则可用离交横法提取，该法也可用丁精制.3沉淀法:沉淀法广泛用于装在他提取中.主要起浓解作用.常用盐析，等电点沉淀. 有机溶剂沉淀和非寓于型聚合物况淀等方法.沉淀法也用于一些小分子物质的提耽.4）萃奴法：革职法是提取过程中的一种乖罂方法,包括溶例策取.两水相革HJ 却辅 界流体莘取、逆版束举取第方法，11中溶赭中取法仅用产抗生武等小分子生物物质而不能切 匕雷门康的扰限.而两水相斗取法则仅适用J蚩白质的提垠.不适用卜小分子物辿的提取a 超渡法匕粒滤法是利川nrr 垣截断 定分广也附的妞激眼进仃溶血的分离或谁照. 可用于小分子物所提

25、取中去除大分子杂唳和大分物质提取中的脱钺旅醇等6、发酵液预处理的目的和方法预处理的目的：去除发酵液中部分杂质，以利后续各步操作。改变发酵液的物理性质，提高固液分离效率包包括：(1) 重金属离子重金属离子(2 )固体悬浮物固体悬浮物(3 )蛋白质蛋白质(4)其他有机杂质预处理的方法1.絮凝法2.等电点法3.加入助滤剂4.重力法5.细胞破碎问题：1、酶有何特性？潞是一种生物催化相，它具疝作用专一性强、催化就奉高等朴宜，能灰常温常压和怅床 度影件下催化是格的电化反点.澄富屿，就没有了生物体的一如电鼾活动.虽熟酶的催化作2、酶的生产途径主要有哪些？从动植物组织中分离提取植物细胞培养产酶动物细胞培养产酶

26、微生物发酵产酶3、优良产酶菌种应具备的条件？?繁殖快，产酶量高，有利于缩短生产周期；?能在便宜的底物上生长良好；?产酶性能稳定，菌种不易退化；?产生的酶容易分离纯化。?菌株安全可靠，非病原菌，不产毒素及其它有害物质，不影响生产人员的身体健康4、提高酶产量的措施？?添加诱导物?酶的作用底物?酶的反应产物?酶的底物类似物?降低阻遏物浓度?表面活性剂?添加产酶促进剂5、酶制剂的制备流程？破碎细胞溶剂抽提离心分离浓缩干燥6、常见的细胞破碎方法？细胞破碎方法及原理分类机械破碎方法物理破碎原理机械破碎法捣碎法研磨法匀浆法通过机械运动产生的剪切 力，使组织、细胞破碎物理破碎法温度差破碎法压力差破碎法超声波破

27、碎法通过各种物理因素的作用， 使组织、细胞的外层结构破 坏，从而使细胞破碎化学破碎法添加有机溶剂添加表向活性剂通过各种化学试剂对细胞膜 的作用，使细胞破碎酶促破碎法自溶法外加酶制剂法通过细胞本身的酶系或外加 酶制剂的催化作用，使细胞 外层结构破坏，而使细胞破 碎7、酶的主要提取方法?提取方法用于提取的溶剂提取的酶的性质盐溶液提取0.02-0.5 mol/L 的盐溶液在低盐溶液中溶解度较大的 酶酸溶液提取pH值为2-6的水溶液在稀酸溶液中溶解度较大且 稳定性较好的酶碱溶液提取pH值为8-12的水溶液在稀碱溶液中溶解度较大且 稳定性较好的酶有机溶液提取可与水混溶的有机溶剂与脂类结合或含较多非极性

28、基团的酶8、酶分离方法？列举至少 4种。1根据辑分子大小和形状的分离方法(I)离心分离 许修福往在富集于某 梅定的细胞需内，因此勾察处理后应先如过阖 心留到某一特定的花细胸成分.如期物棱，线粒体，溶体等.使陶先富集1。豺倍，然 后再对某一特定的唐进行惋化.M心时,离心力也大.所雷的*心时闻1MJ&在条件许可 卜.可过用梢大的离心力.以节约曲心时间，同时也弑少摘耍性的可能性.常用的离心方法 仃等速用心.犀速向心，速度区带肉心.此中足速闹心一般适用能的相提或波解.速度区 带离心则只能用于少量胸的粮纯梢凋.(Z)凝腋过淀凝胶过逑丈称为分子输送折,是根据分子大小分陶麟最TF找的方法之分离脚击白时,大分

29、子蛋白质被甜吃撑阳.因而在凝胶颗粒间龈中移动，速度较快：小 仆第r1tt则可自由出入凝胶脑粒的小孔内，蹄役加氏*移动缓慢.通过一定长度的凝腴展 析法后.大小不同的蛋白质就被分开 常用的凝胶葡聚烤甜胶St讪司do G、量丙联 展凝胶Bio-GEI,琼脂希原股我岫11m等.(3)透析与超舞 透析技术在纯化过程中极为常用.且操作瓶曷,通常是将，液置 透析袋中,蟠后旧术进行透析,通过透析可以I除去懵液中的短奘“有机溶剂，低分子质雄的 抑制制等.是指在一定压力(iEffi/ftfR)下*将料液强制通过一定孔径的滤膜以达到 分离吨化的目的,也可用于版液的陈缩及脱色等.例E.鬼菌猿白陶算内爆盾戏膜一次超谑

30、行可浓缩5倍工方.去除杂雳白5。炉.而剧活性保持75%以J：2. 2. 2根据曲分子电荷性质的分离方法(1)离子交换层析 在一定pH和离子强度的缓冲港中.不同的近白质分子丧血所带 的电荷情况也不相同.根掘不同的蛋件服分子与离子交换剂的亲和力不同而达到分离H的蚤 白顺的层析方法祢为高丁片换旧析.层析通常是在一根成埔柱中逆行的屋折时应注点根据 件容纸的大小喝H蛋白就样晶附和把样时的体粗，汉接得较高的分辨率 洗脱时，可以通过 揽空洗脱利的离了强唯.城科俄白质与共体亲和力的方法.逐 流脱各矗口或绢分；由可通 过改变洗脱剂的T)H,使塞白质的行效电荷减少而被解析.U)电泳 由广不同册白质所带净电荷的大小

31、和性质不同.你外电场作用下.其泳动 方向和速率也不同，从而达到分隔的H的.为残少扩散,整个过程逋常是在学孔性的固体裁 体，如聚丙怖懒收餐收)上进行的，由f电泳分离的惮品较小*常作为分析用.现在已发 展制番电泳、豚冲电泳,双向电泳、等电疑阚电泳、高妆毛细竹电泳等多种新的电泳模 式. K中利用导电聚焦电泳方法呜以分离和检出等电感相差仅的两种散门破.3)厝析霆焦 层析聚焦旌续的pH棒度是庄附用离子交换载体上*成.它程备广等 京理出电泳加周受操层析的优质.既具宥等也聚焦电泳的高分醉率,乂具门柱内容口 K的 特点,糅有较大的应用价值. 一般以鞅粒直葆为】。1。即m.表面含VT强鲤冲能力的离子 基耀(如聚

32、乙娜亚股)的二粒化理作及析介质.2+3垠据晦分子专一性结合的分离方法(1)条和层析 亲和层析是利用篇分与我悼之间的专性鳍合和特异国的性研来 分离的，具仃结合效率高,分离速度快的特点. 体在姑合之前需进行活化,即将蛾体与待 分离的脚的配基靖台.这些配制可以是瞬的宸物.神制制，辅因子.也可以地前的特异性抗 体.如果配基打鼎体偶醒由戴体的空间植阻出响,俄配拈与碗蛋仃不能很好结合.W 目在配基和载体间加上一.手胃)如碳急化合物链,当H经索和吸附行.可以通过改变缰 冲液的再强度或pH的方法.将洗脱下来.也可以使用法度更高的同一配体溶蔻或亲和 力更强的配体溶液洗脱.W染料配体亲和金析 曲料配体亲和层析又称

33、为暇亲和展析,见分离k XATV及 NAOP的脱氧能和厉ATP事关的激陶类的小诙方法.但具体的结合机制尚不清拈.染料 配售的屁析效果除主要取决于染料配体、希亲和力的大小外.还。洗脱轨的冲液的种类. 离子强度.pH及待分离的曲鞋品的纯度柯关.(3)共阶层新 利用原析介而。被分离的晌之间形成找价牌而达到分离的目的 目前 主要用F含*I基的前帕分声纯化.在啜的过程中枕分离的物或通过要价镀(如形成:虢然) 结合到反新介而1.惧由T倜联反应是可逆的.因比可在疣去那再没有呱附上的物质后.用 含行能还原二破键的低分广质量化合物的洗脱剂洗脱酣;如果柚去口的琉1由于空间位阳敷 应不能参与反应*可在含变性剂的镶冲

34、液中进行.如果蛋白质所含的藏筵已意成二,那 幺可先用还原剂打开二破醛再进行值所.，二2.喂据分配系数的分离方法某些亲水性柿分子聚合构的水溶液与一些无机捻或另种事合物HI混介,当浓度达到一 定范隅时，体系会自动分为两相曲生物活件物独作网相中行司司的分配比.经过反复 处理则可达到分离的目的,这呼分离方法际为我次相莘眼分离常用于生，物物所分高的体系 有聚乙二醉(PEG(Strati). PEG，峨酸盐，PEG魔酸被等，由于双水相体基具 件含水比例高、选用的嘤合物及抹美时醐无损*.分离设备与化学工收通用等优点.因此在 工业上作为牌的掘取分离的新匚之日盐爱则重期,是一科很由前就的新的分离纯化方汉.现 A

35、:一心1H 山tl心* 5/U * H 翌li.r M 函心由 m 上世1 盘 出书tC利仪加用 4 5战 49、酶制剂的保存方法？1、合适的温度 2、适当的pH值3、抗氧化保护 4、提高酶的浓度和纯度5. 2.4酶制剂的保存他制剂依膨毒匕的不同阿分知两美.同体曲偏制和液体陌制剂 液体每制刷生产罚单. 成本较低，使用方便.也需收大的依存空间.相比之卜,同体帆制刑序快小，容协保存这工物枝末锋出输.比较稳定.故多数TW醐制制出此种低仓保疗但允论k何科形令.其保存条件棉成构 判可维护摩的夫然钻构f保存间活力的关由所在八以下几点捌特别注也.(U温度 前的保存温度-我南口 一门.僧有此陋行低附下反而容切

36、大猛网内在 低3下亚基间的盛水作用此弱会引起前的婿M.此外.0七以下落质的冰篇化还可能引起的 分的旅嚼，导致淋液的pH发生改受，从而可能引起陶师某间连展成为二骑就.拗坏的的活 性中心，并使瞬变性.(2)霾冲液大名数前在特定的pH范用内稳定,偏闺荏个也闱便会失活,这个范不因而坤.如溶菌肺花腼社以秘定,而固曼南则在中忤偏噫区稳定(3)氢花/还原由于能基等附分户底或衽-硫中心等容域为极化物鲂料化.故过美蔺应加航基或Jt他还原剂加队保护或在融气或氢R中保存”(4)浓度及塘度 一般地说.醐的裱度越高*解越程定.制赤成晶I本成I於止仃排卜 保存。此外.还可通过加入神的各种糖定册f如底打，辅周.无机离了等

37、来加皿的钻定 性,犍K的的保存时间1、为何要进行酶分子的修饰？梅具有偿化效率高、反应条件辿和“专一件强等特点.因此裱广泛地应用于T一业、农 假.改的和环保等频MU fl (Sb门然界已发现的降送软干种但工费I;席用的那只布几卜 神 限制除进一推开发利川的原因很彩.宾苴根源过人随的抑性使现.，M UMH K将鱼的 作用环境,帝京焚牌不大羽定.不适应大枇吊生产的常要.畸作用的最适pH条件一股在中 性.但在工业生产和应用中. 111于底物及产物带束的死响31#蝙禹中性慈阳*使博蜜于 发棒作用.在崎味用上.由于绝大劣数的醯耕人体而若郁是外源蚩白册.导引起免侵反应 印被识别降臂 M于上述原因.人口带电通

38、过各件人丁方法改造*恢兀变爬动应各方面的2、文献中介绍了哪些溶菌酶的修饰方法？(1)化学修饰：是通过利用小分子或大分子化合物对LZ的侧链氨基酸基团进行处理，以获得具有特 殊功能特性的蛋白质分子。小分子修饰多糖修饰其它改性方法(2)物理改性热处理高压处理(3)生物改性(4)含LZ的新型抗菌材料静电纺丝纳米纤维抗菌膜可食用抗菌膜杂化抗菌膜其他纳米复合材料3、什么是固定化酶？固定化酶是指将水溶性的酶固定在水不溶性载体上，使其依然具有催化活性并可回收和重复使用的不溶于水的酶的衍生物前是一种雷臼质，做定性差，而且在催化靖束后堆W同收.为通应工业化生产的需要， 人力模伤生物体内悔的作用式.通过固定化技术对

39、崎加以固定.这种被限制在i定的空间 曲限有僵化活性的梅*为固定化博(immobilud enzyme),经固定化后的摩不但保持广 4-， ba a a -aiaw - a. . ，= 1a & kaa -一， . 4、酶的固定化方法有哪些？ 吸附法(1|柳理吸附法 工制番量牝,早录用的方法.匕此以固体表闻理啜的为依 排,使曲。水不博性体相接触前达到H啜附的口的.我廉的悻利牌是石英砂、爵孔 璃，M-K.淀粉.高的土，活糙成等特武修质有离度喂隔力的吸第制.t却昌于培合法 度法星迪1禺效应，将胸分子固定期含和离千足袂鼻州的固相觐 体上.早应用于H化生产的氯事化*就使用畲关阴*于文捱耕二乙已 (DEA

40、E)他恢附凝固定化的.*她的裂体布I阳AE群堆甲峡1 的生临编.(3) 合法 这盘一静比较*弘人的技术.它主盘利用合作用将仃德目会科A 囱片过憎金属他件够的我悴匕，鼻布粒高的崇作镇定性.已知用于修阖定牝的金氢气化 物行做二价林网价L犯f网加)和矶(二价1苦, Jt中以HflStfH和幡四力 的氧气化物较 蚌,它f门能写密的触基，氨雄鞘整基结合.共价结合法共愉扑台依是通过牌分f I的T：能山.与林体“咻I的反应机田堂丁化学反应胞K爬倚 憾的-邱固江匕力汶，企研K将财考的Y定电力出七 才版附出相比，赭和假作Ktfr站合 府很华冏.一般不会由于原物玳度过高或心源度变化而段励脱落*阚比碗的酒薪融少.但

41、 必颊录用it较餐烈的反应，件*容耳他看的高级站构世生堂化而小位隔失活时山会 物的。-性发生交化.共价交联法共价交联法是通过双功傩或把功能试剂.6聃分子间或删分子制载体同般成共价递的固 定化方法.这些具有两种相同或不同功能基圃的渣州叫做交联刑.共褥交联法与共阶靖合怯 一祥,反应条件比较激烈,固定化的的回收率比较低，一般不单独使用.降低交醛制侬度和 期垢反应时间，固定化酶的比活有所提高.常见的交蹴朝有嘀丁培二酸附和乙品共聚枷， 或二部等,其中以戊二符最为常用.包埋法HI小IB包域法 用Hh膜包埋的高分f it合物可以是大整岛分子优舍将加期维.WAflttt,崔籁等.也可以是合理的高分子化合物如便丙餐*胺.尤W盛等.对干后者， 通常的揪法的先把单体.艺St制和的港谶合1然后T1A催化系统使之It台q出前满州H耀利 用溶胶幕高分子粕质药*MR着脏化即叼 但由钱迎亍才并不现则.立有一与大1平均几 饯的.Wft-ft.容累引起落也餐.因此.藻胺也理汰*与共俳交幸法结件鼠拈恋胤的II 的，制先用明胜W埋.再用虎二临收。】Kt法 曲看法是指槌艇封闭