农作物组织培养ppt课件

1、第八章 主要农作物的组织培育 以有性杂交为作为指点进展育种，这种方法局限性很大，而且周期长植物组织培育已广泛运用于植物育种，在单倍体育种、胚培育、体细胞杂交、细胞突变体挑选、遗传转化等方面离体无性系的快速繁衍培育无病毒种苗 新种类的选育人工种子和种质的保管。第一节 农作物组织培育的意义、方法与运用 对繁衍系数低的“名、优、新、奇、特植物种类的推行，兰花、安祖花、马蹄莲、甘薯、草莓、香蕉、甘蔗、桉树、非洲菊等经济植物已开场工厂化消费植物脱毒苗木培育 脱毒后的马铃薯、甘薯、甘蔗、香蕉等植物可大幅度提高产量，改善质量，兰花、水仙、大丽花等欣赏植物脱毒后植株生长势强，花朵变大，产花量上升，色泽艳丽植物

2、新种类培育 基因工程育种抗虫棉、抗除草剂大豆、玉米，单倍体育种-烟草单育1号、水稻“中花8号、小麦“京花1号，远缘杂交幼胚早期培育，原生质体交融技术，选择细胞突变体植物种质资源的离体保管 超低温离体保管植物种质，可节约大量的人力、物力和土地，还可挽救那些濒危物种 人工种子 为某些珍稀物种的繁衍以及转基因植物、自交不亲和植物、远缘杂种的繁衍提供有效的手段第二节棉花组织培育一、大量元素20倍母液 (g/L)药品摩尔浓度（M/L）质量浓度（g/L）5L母液所需质量（g）备注KNO30.3838190MgSO40.033.8/7.4(MgSO47H2O)19/37KH2PO40.0253.417CaC

3、l20.066.6/8.8(CaCl22 H2O)33/44单独溶解，最后加入二、微量元素100倍母液 (g/L)药品质量浓度(g/L)备注5倍母液H3BO33.1加热助溶MnSO44H2O（或MnSO4H2O）11.15（或8.45）ZnSO47H2O4.320倍母液CoCl26H2O0.05CuSO45H2O0.05单独溶解，最后加入KI1.66NaMO42H2O0.5微量元素二级母液即我们平常配培育基时运用的微量：取上述母液200ml，母液50ml，加蒸馏水定容至1L。铁盐母液配制所用试剂均为国药产品B5有机物配制 所用试剂均为sigma产品药品摩尔浓度（M/L）质量浓度（g/L）备注F

4、eSO47H2O0.012.78Na2EDTA0.013.73加热助溶药品100ml所需质量（g）500ml所需质量（g）备注VB1（硫胺素）15VB6（盐酸吡哆醇）0.10.5NaOH助溶VB3（烟酸）0.10.5NaOH助溶加入VB6和VB1后加部分水，再加入VB3，再次加水，容量瓶定容各种激素配制所用试剂均为sigma产品质量浓度（g/L）备注2,4-D0.1无水乙醇助溶6-BA1NAA1L-Gly（甘氨酸）2国药产品肌醇10IAA0.5IBA0.5NaOH助溶KT0.5NaOH助溶/盐酸助溶*NH4NO3165国药产品愈伤组织的诱导 0.5-1cm的下胚轴切段接种于诱导培育基上，一个皿

5、放25-30段下胚轴。一个月后挑选两端膨大，生长正常的下胚轴继代到新的IBA培育基上非胚性愈伤组织的增殖 由于愈伤组织的进一步膨大，一个皿中以20段下胚轴为宜愈伤组织的分化 愈伤组织经继代一个月继代一次几次后，有的愈伤组织转成米粒状颗粒，将其转入分化培育基上，进一步分化成胚状体成苗生根培育 将分化出的小苗继代到1/2MS培育基中成苗生长培育基上炼苗移栽 将生根良好的小苗揭开三角瓶封口膜，炼苗2-3天，然后移栽到小土钵中，遮荫缓苗一周左右移栽大田棉花下胚轴组织培育过程棉花下胚轴诱导愈伤过程中胚性愈伤组织的腺体处发生和外发生A1：下胚轴外植体；A2-A4：胚性愈伤组织在腺体处发生；B1：愈伤组织外

6、表的胚性细胞；B2-B4：愈伤组织外表构成胚性组织棉花体细胞胚的单细胞来源和外表发生A：单细胞原胚、二细胞原胚和四细胞原胚(箭头所指)；B：具胚柄的多细胞原胚(箭头所指)；C：具胚柄的体胚；D-G：与愈伤组织粘连的体胚；H-I：游离的体胚棉花单个胚性细胞团培育中体细胞胚的发生和发育A：培育当天；B1-B2：培育7 d；C1-C3：培育14 d；D1-D3：培育21 d后出现球形胚；E1-E3：心形胚阶段；F1-F3：鱼雷形胚阶段；G1-G3：子叶胚阶段棉花体细胞胚发育过程中的极性建立和组织分化A：球形胚表皮原构成； B：球形胚内层细胞分裂构成根底和维管组织；C：内部等轴细胞轴向延伸构成的心形胚

7、；D-E：极性的逐渐建立和原构成细胞层的分化；F-G：具有清楚的前构成细胞层和极性的鱼雷形胚；H：具有子叶原基，芽顶端分生组织、前构成层和根顶端分生组织的鱼雷形胚；I：具有Y形微管组织的子叶胚棉花单个胚性细胞团培育中不同发育阶段的体细胞胚A1-A6：球形胚；B1-B6：心形胚；C1-C6：鱼雷形胚；D1-D6：子叶胚第三节 水稻花药和花粉培育目录研讨进展研讨过程研讨意义前景展望一 研讨进展1.水稻单倍体获得途径 花药培育、花粉培育 胚珠或子房培育未受精概念： 单倍体育种：经过花药、花粉培育获得单倍体，然后进展染色体加倍，经过选择、鉴定选育出新种类的途径。 花药培育：是将花粉发育至一定阶段的花药

8、接种到人工培育基上进展培育，以构成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的技术。 花粉培育：是将花粉从花药中分别出来,接种到人工培育基上进展培育，以构成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的过程。水稻花培历史： 1968年，日本人新关和大野初次经过水稻花药培育获得单倍体植株； 1970年，我国正式开展水稻花药培育技术研讨，并获得良好进展； 截至目前，已有多个种类经过花培途径获得。代表成果：天津农科院选育的花育“花育1号、“花育2号；中国农科院选育的中花系列；黑龙江农科院水稻所选育的龙粳系列种类。截至目前，经过花培选育出了很多粳稻种类并大面积的推行运用。1975-1998共审定26个种类。籼稻花药培育难度较大

9、。至20世纪末，共有5个种类经过花培选育。二 研讨过程1.培育流程2.培育方法3.影响要素4.检测方法1.培育流程花药和花粉培育根本流程：预处置花药物理或生理逆境搜集具胚性小孢子的花药，或离心搜集胚性小孢子培育充足的营养、适宜的温光、或条件培育构成胚状体胚状体转移至固化培育基上萌生构成小植株。选择适宜的供体植株倍性鉴定或染色体加倍2.培育方法花药培育 1、取材 镜检，根据花粉的发育时期，选取大小适宜的花蕾。 2、消毒 70酒精擦洗花蕾外表，或70酒精浸泡30-60s后在1次氯酸钠溶液中浸泡10-20min或在0.1的氯化汞溶液中消毒3-10min，无菌水冲洗3-5次。 3、培育 固体或液体培育

10、基均可。先进展脱分化培育，至小孢子大量分裂构成胚或愈伤，并突破花药壁外表，构成突出物2-3周；后转入分化培育基培育，构成小植株。水稻花药培育由接种至长出愈伤图花粉培育 与花药不同，花粉培育需进展花粉的分别与纯化及特殊的花粉诱导培育。分别和纯化方法1、自然散落法(漂浮培育散落小孢子搜集法) 将花药接种在预处置液或液体培育基上，待花粉自动散落后，搜集培育。2、挤压法 在烧杯或研钵中挤压花药，将花粉挤出后搜集培育。3、机械游离 1磁搅拌法 用磁力搅拌器搅拌培育液中的花药，使花粉游离出来； 2超速旋切法 经过搅拌器中的高速旋转刀具破碎花蕾、穗子、花药，使小孢子游离出来此法运用最广。4、小孢子纯化 对上

11、述方法获得的小孢子混合物进展分级过筛、梯度离心处置纯化小孢子小孢子梯度离心前后比较 梯度离心前小孢子形状、活力不一致 30%蔗糖梯度离心后获得均一的小孢子群体花粉培育方式1、平板培育 花粉置琼脂固化培育基上培育。2、液体培育 花粉悬浮在液体培育基中培育，需震荡，以利通气。3、双层培育 花粉置固体-液体双层培育基上培育。培育基制造方法：先铺一层琼脂固体培育基，凝固后，在外表参与少量液体培育基。 4、看护培育 利用花药或花药愈伤组织释放出的活性物质促进花粉小孢子发育。5、微室培育 利用小的盖玻片和凹穴载玻片构成微室进展花粉培育6、条件培育基培育 利用培育过花药的液体培育基或含失活花药提取物的培育基

12、上培育。花药条件培育基、子房条件培育等。3.影响要素1基因型 植物基因型是影响雄核发育的最重要的要素之一。同一物种中的不同基因型对小孢子离体诱导反响差别较大。 如在水稻中，籼稻花粉培育力远低于糯稻，且在同一亚种范围内，不同种类间也存在很大差别。2培育基和激素配比选择 运用于水稻花培的根本培育基种类较多， 如N6、 马铃薯培育基、 L8、 SK3、 土豆培育基、Miller、 合5、 通用、 LS、 White、 MS、 M8和改良M8等。同一资料用不同的培育基培育， 表现出不同的花培效果。 培育基 三明市农科所生物技术中心以M8、 N6和NB培育基， 进展了不同水稻种类资料花培察看比较实验，

13、结果从出愈率、 绿苗分化率两者比较， 还是M8 培育基较适宜。 冯双华等用M8、 合5和改良M8做根本培育基， 以籼型杂交稻两优培九、 培两优288、 P88S/0293为资料， 得出改良M8培育基表现出对不同的基因型资料有较广的顺应性和较强的绿苗诱导作用。激素配比 生长素类普通有2,4-D、 NAA、 IAA等， 细胞分裂素普通有6-BA、 KT等。运用倾向：复合激素 冯双华等提出籼型资料用1.5 mg/L 2,4-D+1.5 mg/LNAA诱导效果较好， 2.0 mg/L 6-BA+0.25 mg/L NAA+0.25 mg/L IAA分化效果较好。 郭书巧等提出对籼粳交资料2 mg/L

14、2,4-D+1 mg/L NAA+0.2 mg/L KT为最正确的激素诱导配比， 2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT分化效果较好。 结论：基因型不同，最适激素配比不同。普通以为，对籼型水稻采用复合激素较好。3田间取样与预处置 取样时间：晴天8:0010:00， 或16:0018:00 取穗规范： 穗苞大而不破，剑叶与下一叶的 叶枕距为510 cm为宜 低温处置：普通以为58度条件下， 低温预处置810d较好 此外，还有其它处置方法：化学物质、射线、离心等。4培育条件 温度、光照、密度4.检测方法1、染色体直接计数法 通常取根尖、茎尖等分生组织区进展制片，直接计数染色体数目。2、

15、间接鉴定1扫描细胞光度仪鉴定流式细胞仪 主要测定叶片单个细胞中DNA的含量确定细胞的倍性，资料的运用量可少到1cm2。2细胞形状学鉴定法 叶片捍卫细胞大小、单位面积上的气孔数及捍卫细胞中叶绿体的大小和数目与倍性具有高度的相关性。3植株形状学鉴定法 单倍体植株瘦弱，叶片窄小，花小柱头长，花粉粒小，不结实。4杂交鉴定法 自交或测交鉴定，看后代分别情况确定二倍体植株是来自小孢子还是体细胞。5分子标志鉴定包括生化标志好像工酶标志和分子标志如RFLP、RAPD、AFLP等三.研讨意义 1.缩短育种周期：常规育种需4-6年获得纯系，而花培仅需一年。供体植株小孢子n花培花粉植株n雄核发育自然加倍人工加倍纯合

16、植株DH2n一年内获得纯系2.提高了目的基因型的选择效率例子： 二倍体供体植株基因型为AaBb，假设要从后代中选择基由于AAbb的纯合单株 常规方法： AAbb出现的概率为1/16，并且不能将AAbb与Aabb、aAbb区分开。ABaBAbabABAABBAaBBAABbAaBbaBaABBaaBBaABbaaBbAbAabBAabBAAbbAabbabaAbBaabBaAbbaabb2.提高了目的基因型的选择效率例子： 二倍体供体植株基因型为AaBb，假设要从后代中选择基由于AAbb的纯合单株 单倍体方法： AAbb出现的概率为1/4。 单倍体 二倍体AB- - AABBaB- aaBBAb

17、- AAbbab- - aabb供体亲本AaBb花培3.有利于隐性基因控制性状的选择4.与生物工程技术结合，对育种学及遗传根底研讨都有很重要的意义。四.前景展望1.供体植物生长条件的进一步提高和离体培育方法的改良，有能够最终消除或大大减少花培药养基因型的限制。2.花药或小孢子培育体系做为基因转导的靶组织，可以实现稳定的转化，外源基因在后代中不易丧失或发生致命的突变，是很有出路的研讨领域。 1999，美国洛克菲勒基金会的Toneeson在Science 撰文指出，现代生物技术育种的两大支柱是基因工程育种和与分子标志相结合的加倍单倍体育种DH育种，后者效率高，本钱低，特别适宜于开展中国家的国情。第

18、四节 玉米组织培育主要内容：植物组织培育的意义. 玉米组织培育的目的. 研讨进展.目前玉米组织培育的主要方法. 植物组织培育的意义植物组织培育可以消费大量的优良无性系. 细胞交融可突破种属间的界限，抑制远缘杂交不亲和性妨碍. 可获得单倍体、三倍体及其它多倍体、非整倍体.组织培育的植物细胞也成为在细胞程度上分析研讨的理想资料.玉米组织培育的目的玉米组织培育的目的是让外植体可以高频率地诱导出愈伤组织，建立高效 的体细胞再生体系 ，为玉米遗传转化和细胞工程研讨发明有利条件 。玉米组织培育的研讨回想Larue在 1949年用甜玉米的胚乳作外植体，初次诱出玉米愈伤组织，但未获得再生植株 。1975年，G

19、reen和Phillips初次用A188的幼胚作外植体，诱导出二倍 体 愈伤组织 ，并再生得 到第一株无性系植株。玉米组织培育的研讨现状如今曾经能从多种外植体中诱导出愈伤组织，并再生出植株。例如：幼胚、花 药、幼穗等，其中幼胚是最易诱导，也是目前最常用的外植体。玉米组织培育的主要方法简介1、玉米花粉和花药组织培育 玉米花粉和花药的培育普通可获取单倍体植物，有利于促进玉米遗传育种任务的有效进展。2、 玉米茎尖和根尖离体培育 玉米植株的根尖和茎尖分生组织具有良好的分化性能。玉米茎尖和根尖离体培育有利于促进完好玉米植株的生长,并且在取材上不受季节限制。3、玉米幼胚的组织培育 玉米幼胚属于二倍体， 且

20、分生才干较强。幼胚是最易诱导， 也是目前最常用的外植体， 但幼胚取材的时间遭到严厉的季节限制。玉米幼胚组织培育的全过程1、预备任务接种室消毒预备诱导培育基N6+肌醇+L-脯氨酸1.38g/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+水解酪蛋白0.5g/L+2,4-D2mg/mL)灭菌2、外体消毒及挑幼胚 75%酒精擦玉米外层叶片 至超净任务台，用75%酒精擦玉米外层叶片，剥一层擦一层至完 用刀去掉1/3玉米籽粒 挑幼胚 接种到预备好的诱导培育基上暗培育3、继代 预备继代培育基(N6+水解酪蛋白0.1g/L+L-脯氨酸0.69g/L+甘露醇20g/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L+2,4-D1mg/m

21、l)诱导两次后，转入继代培育基每7天继代一次，直至出透明、黄色、巩固的愈伤组织，可用于转化普通继代三次4、转化侵染培育22-25，暗培育3天恢复培育暗培育3天挑选培育分化培育生根培育壮苗5、移栽及管理移栽前，应对移栽用的基质进展灭菌。移栽前，可将培育物不开口移到自然 光照下锻炼2-3天，然后再开口练苗1-2天，以顺应未来自然湿度的条件。玉米组培苗移栽时首先应把根部的培育基清洗干净，以免受细菌或真菌污染而影响幼苗生长。移栽玉米茎尖组织培育的全过程1、预备任务接种室消毒预备培育基MS+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L)灭菌1、玉米种子消毒在500ml三角瓶中装入200300粒玉米种子用75%酒精清

22、洗8min0.1%升汞5min无菌水洗2遍参与无菌水静置8h0.1%升汞8min无菌水洗5遍装入钣盒28暗培育3天2、接种 取出培育三天后的种子，接种到MS固体培育基中，根向下伸入培育基中，芽向上，芽萌生得不太好的继续放进饭盒中再培育。接种到MS固体培育基中的芽放回28暗培育3-4天。3、玉米茎尖转化取出MS固体培育基中的芽放在无菌滤纸上切根镊子夹胚轴，在茎尖处用刀尖切半边。在茎尖生长点划一小口。转化后，接种于MS培育基中，进展暗培育。3、移栽及其管理 培育35天后，将其移栽至至花盆中，其 中本卷须知与前面的一样。后期的管理也于前者相近。 滨 州 职 业 学 院第五节 马铃薯的脱毒培育目的要求

23、: (1)掌握马铃薯脱毒培育的大致过程，了解马铃薯脱毒苗的鉴定方法; (2)掌握马铃薯的生物学习性： (3)熟习微型薯的消费过程滨 州 职 业 学 院微型薯滨 州 职 业 学 院滨 州 职 业 学 院 马铃薯是一种全球性的重要经济作物。顺应性广，营养价值高，耐贮藏适运输，既是一种重要的粮食作物也是一种调理市场供应的重要蔬菜。马铃薯原产于拉丁美洲，当被发现可以食用后，很快传到世界各地，成为栽培很广的一种作物。滨 州 职 业 学 院但是，当发现从外地引种栽培12个周期后，明显发现产量降低，植株变矮，并有卷叶的景象产生，经检测证明这是由于病毒引起的退化景象。 滨 州 职 业 学 院 危害马铃薯的病毒

24、有17种之多，如X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A病毒、花叶病毒、纺锤形块茎病毒等。由于马铃薯是无性繁衍作物，病毒逐代积累，日益严重，引起严重退化。马铃薯病毒可使块茎产量减少50%80%。滨 州 职 业 学 院法国Morel和他的同事们，1955年从患病马铃薯植株中选取到了无病植株，为治疗作物病毒开辟了新途径。 滨 州 职 业 学 院一、特性和生物学习性1、马铃薯的形状特性根 马铃薯的根系由初生根和匍匐根两部分组成。茎 马铃薯分地上部分和地下部分，地上主茎在构成16片叶子后，由花芽封顶，并在花的下部发生两个侧枝，从而构成马铃薯的主要同化系统。地下茎包括主茎的地下部分、匍匐茎和块茎。滨 州 职

25、业 学 院3叶 马铃薯先出土的叶是初生叶，全缘，心脏形。以后发生的叶奇数羽状全裂单叶，在叶柄基部与主茎相连处着生有托叶。4花 马铃薯的花为聚伞花序，第一或第二花序开放，恰是块茎强盛膨大之时，此时是需求不断浇水的形状标志。 (5) 果实、种子 马铃薯果实为球形或椭圆形浆果。种子小。扁平肾形。种子可用来繁衍，但后代性状分别大。滨 州 职 业 学 院2、 生物学习性马铃薯性喜冷气候，不耐高温暖霜冻，解除休眠的块茎4下发芽，发芽适温为1218。地上茎叶生长温度为1721，25以上时生长不良，叶变小，超越30和7以下茎叶停顿生长，-1时受冻。块茎构成要求昼温1424，夜温1214，土温1618。土温20

26、以上时块茎构成缓慢，而且容易引起退化，高温下营养多用于芽和匍匐茎生长不易构成块茎，2530时曾经长成的块茎也变成细长茎，结薯期要求12h左右的短日照和疏松、潮湿、肥沃以及通气良好的土壤条件。土壤板结，薯块外表粗糙和薯形不整。滨 州 职 业 学 院马铃薯消费中普遍存在有种性退化问题，表现为植株长势衰弱，株形矮化，分枝变少，薯块变小，产量逐降低，呵斥退化的缘由和学说多种，综合而言，主要是薯块生长锥细胞发生阶段性衰老而导致种性退化，而病毒和细菌病害的侵染，以及肥水、营养条件不良等都会加剧其退化程度。 滨 州 职 业 学 院二、马铃薯脱毒技术马铃薯在营养繁衍时易受病毒的浸染，当条件适宜时，病毒就会在植

27、株内增殖，转运和积累，随着世代传送，病毒危害逐年加重，普通可呵斥减产50以上。研讨发现，有30多种病毒易感染马铃薯，并引起种类退化，严重影响马铃薯的消费。经过微茎尖组织培育技术能从马铃薯体内脱除PLRV、PVY、PVA、PAF、PVG、PVM、PSW等病毒。滨 州 职 业 学 院因此，采用组织培育技术，经过一定良种繁衍体系，消费优质种薯，是保证马铃薯高产、稳产的一项有效措施。滨 州 职 业 学 院全国现有马铃薯播种面积300多万公顷，且有逐渐添加的趋势，每年需合格种薯45亿公斤，脱毒原种4亿公斤，脱毒小薯或微型薯45亿粒。因此，脱毒马铃薯推行具有宽广的市场前景，对于添加农民收入和开展马铃薯产业

28、化消费具有非常重要的意义。滨 州 职 业 学 院我国的马铃薯平均单产仅为13.60吨/公顷，是世界单产最高国这瑞士48.80吨/公顷的1/4。呵斥如此大的差别，最主要的要素就是种薯质量差，种类规划不合理。采用脱毒快繁技术，种用脱毒种薯，普通可增产30-50%，甚至成倍增产，充分发扬种类的潜能，提高马铃薯消费才干。假设我国现有马铃薯播种面积的1/3即114万公顷用脱毒种薯，就可年增产粮食100多亿公斤。滨 州 职 业 学 院我国在70年代用茎尖组织培育方法得到脱毒马铃薯试管苗，并胜利地获得脱毒复壮的马铃薯，开场了脱毒种薯的消费和推行。八五期间，农业部在全国范围内设立了6个马铃薯原原种基地建立和种

29、薯消费工程，初步构成了脱毒草种薯消费体系。共推行脱毒种薯36.5-40万公顷，获经济效益近30.8亿元。 滨 州 职 业 学 院我国已有许多科研、推行单位开展了脱毒马铃薯的研讨和消费，在消费上产生了一定的经济效益和增产效果，但由于长期以来各自为政，技术方法和脱毒规范不尽一致，未能发扬出脱毒种薯应有的增产潜力。到目前为止，我国仍未建立国家级的脱毒种薯质量监视和病毒检测制度。 滨 州 职 业 学 院1脱毒种薯消费程序采用微茎尖组织培育的方法，诱导出苗，采用联免疫吸附实验法或指示植物方法鉴定马铃薯病毒和类病毒，经鉴定后，无主要病毒及类病毒的试管苗可定为脱毒试管根底苗。滨 州 职 业 学 院试管根底苗

30、在无菌条件下，采用固体、液体培育基相结合的方法，进展扩繁根底苗，在防虫网室栽植或封锁温室扦插，消费出原原种或称脱毒小薯。用原原种在一定隔离条件下产生原种1代，以后逐级称为原种2代、良种1代、良种2代。滨 州 职 业 学 院滨 州 职 业 学 院2茎尖培育脱毒1 取材和培育普通多采用在室内发芽，芽经热处置382周。然后取顶芽或侧芽1厘米的茎尖，在自来水下冲洗干净，无菌条件下先用70的酒精浸润组织15-20秒，再用2的次氯酸钠溶液浸泡4-5min，然后用无菌水冲洗3次。 滨 州 职 业 学 院把消毒好的芽放在解剖镜下仔细剥离，逐层剥去幼叶，显露圆滑的生长点，可以留1-2个叶原基，0.20.3毫米，

31、随即接种于MS液体培育基上，每升加0.1mgNAA 、 0.2mgGA3、0.5mgBA，2%蔗糖，p H值5.8。培育条件：2125、2000-3000 lx、12h/d。2-3周愈伤，4-5周绿点，3-6月长成2-3厘米小芽，越慢越好，出芽很快的扔掉。2 继代和生根培育胜利的马铃薯脱毒苗，经ELISA试剂盒鉴定后试管苗应每3月检测一次，每年4次鉴定后，采用固体、液体培育基相结合方法扩繁。取试管苗单节切段扦插在或平放固体培育基上，每瓶可插20个左右茎段，经20d左右发育成510cm高小植株，继续进展切段繁衍，此法速度快，每月可繁衍58倍，试管苗多接种在液体培育基上，进展浅层静止液体培育。滨 州 职 业 学 院培育基：MS+NAA0.2-0.5+D-泛酸钙10，3%蔗糖，20-25度，3000-4000LX，14-16小光阴照，每3周继代一次，单芽茎段约1厘米，可插也可平放，原那么试管苗用2年3年。 滨 州 职 业 学 院滨 州 职 业 学 院(