医学艾滋病实验室检测新技术课件

1、医学艾滋病实验室检测新技术目的方法监测感染检测抗体检测(EIA/PA/RT) 检测策略窗口期检测抗原检测,核酸检测pooling RT-PCR诊断感染诊断WB检测策略近期感染诊断STARSH方法治疗评价CD4/CD8测定流氏仪检测显微镜法病毒载量测定NASBA, b-DNA,RT-PCR耐药性检测基因型,表型窗口期检测抗原检测核酸检测Pooling RT-PCR方法窗口期的范围定义依据时间长度抗体检测3-6个月新的EIA试剂可以缩短至14-21天抗原检测1-2周第四代抗原抗体检测试剂可以使窗口期比第三代抗体试剂缩短4-5天核酸检测5-11天抗原检测P24试剂盒,第四代EIA试剂(1997年在欧

2、洲正式批准用于血液筛查)每一个HIV粒子含有1200个p24抗原分子=0.048fg每一个HIV粒子含有2个RNA拷贝,如果病毒载量测定结果为400拷贝/ml,即等于有2.4X105个分子=0.0096pg p24抗原/ml,800拷贝/ml,即等于有4.8X105个分子=0.019pg p24抗原/ml目前最敏感的抗原检测试剂盒的检测阈值为0.01pg/ml抗原在血清抗体阳转前2-18天既可以检测到样本(血清/浆)中的p24抗原包括游离的抗原和病毒粒子中的抗原EIA测定的抗原浓度(F):病毒RNA拷贝数推算的抗原浓度(A)=0.16:2900样本号EIA(Cutoff) EIA(pg/ml)

3、 RNA拷贝/mlp24pg/mlF/A13.1 0.1 1,4000.033.124.7 0.16 37000.091.8345 1.5 11000.03564320 11 800001.95.6568 2.3 400000.962.4622 0.73 1900004.50.16样本经过预处理,破碎病毒粒子后将有利于p24抗原的检测病毒RNA检测第一次病毒学症高峰时间大约在感染后4-11天病毒RNA检测方法:NASBA,RT-PCR,b-DNA在高度怀疑有原发感染时,且经抗体检测之后抗体检测阴性或不确定,有高危行为史或暴露史,特别是伴有相应的临床表现时,用核酸检测进行辅助诊断。早期诊断应用:

4、个体检测、血液筛查、性病门诊病人筛查、PMTCTPooling RT-PCR由于核酸检测的成本很高,方法费时,不可能作为血液筛查的方法,目前在欧洲用pooled血液的方法进行核酸检测,其敏感性取决于pooped样本大小及检测的预值(用特殊的RT-PCR试剂盒检测,以提高敏感性)。可能低于抗原检测,但在个体献血者核酸检测可能比抗原检测更具成本效益。1473份样本处理过程 新近感染检测抗体检测EIA,PA,RTWB试验阴性抗原检测/核酸检测阳性STARSH新近感染STARHS法1998年开始,美国Janssen RS等专家推出一种新的实验室方法用于新感染病例的监测,即敏感的酶联免疫检测法(3A11

5、)和非敏感的酶联免疫检测法(3A11LS):原理:利用感染早期抗体滴度低的特征,以敏感ELISA试剂(3A11)和非敏感ELISA试剂(3A11-LS)对经过一定程度稀释的同一样品进行测定,3A11检测呈阳性而3A11LS检测呈阴性反应者为新发感染,与以往感染的病例区分开来,可以确切地估测新感染人数。近几年,该方法已在一些国家得到了应用,为这些国家制定艾滋病预防控制策略提供了准确和重要的技术支持。检测新发或新近HIV感染的目的l无须耗时并昂贵的前瞻性队列研究来识别早期感染。l由单一的患病样本来估计人群发病率。l以新发感染的个体为研究或干预对象。l识别早期感染以进行早期治疗和临床关怀l评估预防措

6、施和目标l监测亚型和药物抵抗株的传播l找出适合疫苗实验的高危人群 TARHS:新发HIV血清转换的血清检测运算法则 暴露 HIV+ AIDS (1)敏感性试验 + + (2)STARHS试验 _ + 在同一时间应用两种不同试验分析血样来检测新发感染(1) 敏感性试验(EIA) 血清转换早期即可出现阳性 (2)非敏感性试验(改调的EIA:STARHS )血清转换晚期才可出现阳性新发感染血清转换=EIA+& STARHS-STARHS试验的窗口期 暴露 EIA+ Detuned EIA+ AIDS 窗口期=从EIA+到detuned的EIA+之间的时间 在血清转换者有所不同,依赖于HIV的亚型和试

7、验 Organo Tekniaka, 对亚型B,估计值为: 90 3.3个月 75 4.0 50 5.1 25 6.4 10 8.2 STARHS的应用条件 非AIDS病人AIDS病人有很低的抗体水平,象血清阳转非HAART治疗HAART治疗病人有很低的抗体水平,象血清阳转 抗体检测策略监测:初筛-复合-确认策略 EIA-EIA替代策略诊断:初筛-复合-确认策略 EIA-EIA-PA/RT替代策略(VCT) WHO和UNAIDS推荐的利用几种快速检测方法,在HIV流行率不同的地区针对不同的目的而进行的HIV诊断方法目的 流行率 策略血液筛查 任何情况下 1监测 10 110 2诊断 征兆/症状

8、 30 1 30 2诊断 症状 10 2 10 3策略1:用一种筛选试剂。出现阳性反应时可被认为是HIV阳性。策略2:用两种筛选试剂。如果第一次检测出现阳性反应则用第二种试剂重复,两种试剂检测结果均出现阳性反应时可被认为是HIV阳性。策略3:用三种筛选试剂。三种试剂检测结果均为阳性时才可被认为是HIV阳性。诊断替代策略1、HIV感染高流行地区的高危人群2、EIA-1+EIA-2+, 且2次检测S/CO大于等于63、在2检测结果的基础上+高特异性试剂检测+衷心感谢参与本课题的研究人员和研究生参比室工作人员:强来英,肖瑶,张桂云,裴丽健,张辉研究生/进修生:张棋,左合拉,刘波,冯基刚现今医学分为传

9、统医学、基于“生物-医学模式”近代发展起来的西医，20世纪西医又发展到“社会-心理-生物医学”或综合医学模式，后基因组时代系统生物学的兴起，形成了系统医学在全球的迅速发展，成为继传统医学、西医学之后中、西医学汇通的未来医学。当代中国医学类专业比较优秀的学校有北京大学、华中科技大学、郑州大学等学校。 中医即中国传统医药学，是现今医学分为传统医学、基于“生物-医学模式”近代发展起来的西医，20世纪西医又发展到“社会-心理-生物医学” （高血压心脏病糖尿病）或综合医学模式，后基因组时代系统生物学的兴起，（传染病丙肝乙肝甲肝）形成了系统医学在全球的迅速发展，成为继传统医学、西医学之后中、西医学汇通的未

10、来医学。当代中国医学类专业比较优秀的学校有北京大学、（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）华中科技大学、郑州大学等学校。 （肺血液血小板红血球白血球）中医即中国传统医药学，是形成于数千年前的中国，是建立在人们与疾病长期斗争的经验总结及阴阳五行、八纲脏腑辨证基础上，运用朴素辩证法及思辨推理方法，认识机体、自然、疾病三者关系，发展起来的（传染病丙肝乙肝甲肝）一门以“功能人”包括功能脏器为概念的独特的医学哲学理论体系。（肺炎青霉素肝炎）在治疗上，除了药物外，还有针灸、推拿气功、（高血压心脏病糖尿病）耳针等特殊疗法，它是世界传统医学中最完善的一种医学理论体系。它为人类尤其为中国人民（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）健康和民族

11、繁衍做出了巨大贡献。 （肺血液血小板红血球白血球）西医学是最近三四百年来建立在解剖学、生物学及现代科学技术基础上、发展起来的一门以“解剖人、肉体人”为概念的、新兴的现代医学科学理论体系。主要采用科学实验方法，从宏观到微观，直至目前的分子基因层次水平，发展极为迅速，超过其它任何一门医学科学，成为世界医学史上的主流。 可见中西医学，一个是以“功能人”为概念的独特的哲学医学理论体系，一个是以“解剖人、肉体人”为概念的新兴的现代医学科学理论体系，二者都不是以完整人为研究对象的科学，从理论讲二者都不是科学的，势必影响各自发展。事实也证明这一切，（高血压心脏病糖尿病）中医长期停滞不前、（高血压心脏病糖尿病

12、）疗效也不确实。西医尽管发展到目前的基因分子层次，但疾病发病率居高不下，对绝大部分疾病发病原因认识不清、发病机理弄不明白，治疗受到制约，在小小SARS、禽流感面前竟束手无策，在糖尿病、癌症、心脑血管疾病、尿毒症等相当多疾病面前更是不得不求助或借助中医治疗。一个是疗效不确实，一个是有些甚至相当多疾病无法治疗，这就是中西医学结合的缘由。然而，由于二者是两套理论、两股道上跑的车（肺血液血小板红血球白血球），风马牛不相及，从理论上讲就没有结合的可能，只是形式上的融合罢了。（肺炎青霉素肝炎）故出现西医对治疗不了的疾病只好求助中医，而中医则往往采用西医诊断中医治疗，以及中西治疗法一块用的局面。 （高血压心

13、脏病糖尿病）至于（传染病丙肝乙肝甲肝）循证医学、比较医学、后现代医学、行为医学等所谓“医学”，都称不上一门独立的医学科学，关于这一点在灵魂医学有关章节中将有相关点评。 总之，目前以中西医学为主的世界各种医学科学都存在不完整性的瑕疵，即都是以不完整的人为研究对象的医学科学，故不能解决目前存在于中西医学甚至人文社会科学史上一切疑难模糊问题，成为阻碍医学科学前进的羁绊。的确，要解决目前存在于中西医学甚至人文社会科学上一切疑难模糊问题，显然已完全超出了中（肺血液血小板红血球白血球）西医学所涉及的范畴，我们必须跳出中西医学的理论框架，建立起一个新的医学理论体系 - 东方医学和西方医学（即西医）的融合形成

14、现代系统医学。西医学是最近三四百年来建立在解剖学、生物学及现代科学技术基础上、（高血压心脏病糖尿病）发展起来的一门以“解剖人、肉体人”为概念的、新兴的现代医学科学理论体系。主要采用科学实验方法，（传染病丙肝乙肝甲肝）从宏观到微观，直至目前的分子基因层次水平，发展极为迅速，超过其它任何一门医学科学，成为世界医学史上的主流。 （肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）可见中西医学，一个是以“功能人”为概念的独特（高血压心脏病糖尿病）的哲学医学理论体系，一个是以“解剖人、肉体人”为概念的新兴的现代医学科学理论体系，二者都不是以完整人为研究对象的科学，从理论讲二者都不是科学的，势必影响各自发展。事实也证明这一切，中医长

15、期停滞不前、疗效也不确实。（肺血液血小板红血球白血球）西医尽管发展到目前的基因分子层次，但疾病发病率居高不下，对绝大部分疾病发病原因认识不清、发病机理弄不明白，治疗受到制约，在小小SARS、禽流感面前竟束手无策，（传染病丙肝乙肝甲肝）在糖尿病、癌症、心脑血管疾病、尿毒症等相当多疾病面前更是不得不求助或借助中医治疗。一个是疗效不确实，（肺炎青霉素肝炎）一个是有些甚至相当多疾病无法治疗，这就是中西医学结合的缘由。然而，由于二者是两套理论、两股道上跑的车，（高血压心脏病糖尿病）风马牛不相及，从理论上讲就没有结合的可能，只是形式上的融合罢了。故出现西医对治疗不了的疾病只好求助中医，而中医则往往采用西医

16、诊断中医治疗，以及中西治疗法一块用的局面。 （肺血液血小板红血球白血球）至于循证医学、比较医学、后现代医学、行为医学等所谓“医学”，都称不上一门独立的医学科学，关于这一点在灵魂医学有关章节中将有相关点评。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）中、西医学的起源大致相同。主要包括：救护、求食的本能行为。如动物受伤（传染病丙肝乙肝甲肝）会舐其伤口、遇热会避入水中，人与动物一样有着本能救护。（高血压心脏病糖尿病）人类的求食本能在寻找食物时，逐渐发现了葱、姜、蒜、粳米、（肺炎青霉素肝炎）薏米等虽为食物或调味品，却具有治病作用；生活经验创造了医学。先古人类通过劳动制造出利器，从而产生了砭石、骨针等医疗器具，逐渐掌握了运

17、用工具治疗疾病的经验。与此同时，人们发现活动肢体可以舒筋活络，强身健体，“导引术”、“五禽戏”的形成，也是古代人们积累生活经验后产生的保健养生观；医、巫的合与分。由于原始人受制于智力尚未开化，对自然界的变化（传染病丙肝乙肝甲肝）以及宇宙间的一切反常现象，（肺血液血小板红血球白血球）心存恐惧，难以做科学、合理的解释，因而误以为有超自然的力量主宰其中。（高血压心脏病糖尿病）故巫、医合流曾是中、西医学共有的一段历史。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌） 医学教材（肺血液血小板红血球白血球）东、西方文化历史背景是中、西医学形成、发展的土壤。公元2世纪东、西方的两位医学巨匠张仲景和盖伦，传承了不同的学术思想，创建了

18、迥异的医学范式，发展和完善了不同的理论体系，使中、西医学各自走向了两条完全不同的发展道路。 （肺炎青霉素肝炎）在汉代医学家张仲景所著述的伤寒杂病论之前，（传染病丙肝乙肝甲肝）就有内经、难经、本草经等古典医药典籍。张仲景总结了汉代以前的医学成就，继承了内经等基本理论和丰富的医药知识，结合自己的临床实践，（肺血液血小板红血球白血球）写成了伤寒杂病论。其贡献在于确立了中医学辨证论治的理论体系，为后世中医临床医学的发展，奠定了坚实的基础。 （肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）在西方，盖伦的一生生活在罗马帝国时安东尼父子的执政期。彼时，（高血压心脏病糖尿病）罗马帝国的繁荣，为盖伦的医学成就、以及西方医学的昌盛，提供

19、了可靠的政治、经济、科技和文化保证。盖伦继承希波克拉底的学术思想，著述200余部著作，（肺血液血小板红血球白血球）现存的83部著作中，内容涉及解剖、生理、病理、卫生、药物、希波克拉底文集研究、哲学、语言学、逻辑学、数学、历史、法律等。倡导实证医学，他的科学方法论（传染病丙肝乙肝甲肝）具有重视实验、疾病局部定位思想、重视形式逻辑、强调演绎法等特点，对后世西医学的（肺血液血小板红血球白血球）发展影响深远。 （肺炎青霉素肝炎）（高血压心脏病糖尿病）编辑本段东西方医学差异中、西医学运用不同的思维模式诊治疾病，其基本理论各成体系并有根本差异。（肺血液血小板红血球白血球）中西医学的差异不仅仅是有否实证的科

20、学理念，最主要的是两种文化体系的差别。从理论上讲，（高血压心脏病糖尿病）中西医学是两种不可能统一的医学体系。“中体西用”曾成为中西医汇通派的指导思想，但由于两种医学的根基不同，硬在中医之体上套上西医之用，近一个世纪的事实证明，（肺血液血小板红血球白血球） “汇通医学的体用判断脱离了中西医学的事实认识，（传染病丙肝乙肝甲肝）以价值认识代替了事实认识，决定最终结果劳而无功”，因此，中、西医学应并存共荣而不必强求统一。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌） 古代(经典)中医史中国的中医学起源于三皇五帝时期，（肺血液血小板红血球白血球）相传伏羲发明了针灸并尝试草药。在公元前3000多年，中国的轩辕黄帝写下了人类第一

21、部医学著作祝由科，后世人在这部医药著作的基础上不断增补删改，（高血压心脏病糖尿病）逐渐形成了后来的黄帝内经和黄帝外经，并由祝由科里将纯粹的医药分离了出来，形成了后来的中医学。（肺血液血小板红血球白血球）而其中的黄帝内经则在世界上第一个提出了“不治已病治未病”这一防病养生保健康的预防医学观点。 （肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）轩辕黄帝早在周代(公元前1046年公元前（传染病丙肝乙肝甲肝） 771年)就建立了世界上第一个医院和医疗制度，周代的医疗机构设有医师、上士、下士、府（管药库）、史（管记录）、徒若干人。（肺血液血小板红血球白血球）下面又分食医（管饮食卫库）、疾医（内科）、疡医（外科）、兽医四种，这是

22、世界上最早的医学分科。医师总管医药行政，并在年终对医生进行考核；（肺炎青霉素肝炎）周礼记载“岁冬则稽其事，以制其食”，就是说，医生每年都要（传染病丙肝乙肝甲肝）通过年终考核增减俸禄。 当时的患者已经分科治疗，而且建立病历。“死终则各书其所以，（高血压心脏病糖尿病）而入于医师”，规定在死者病历上要写明死因，（肺血液血小板红血球白血球）然后送交医师存档，以便总结医疗经验，提高医疗技术。这也是世界上最早的病历制度。 （肺炎青霉素肝炎）在春秋战国（公元前770年前221年）时期名医辈出，秦国有名医医缓，齐国有长桑和他的徒弟扁鹊。扁鹊发明了中医独特的辨证论治，并总结为“四诊”方法，即“望、闻、问、切”。

23、扁鹊看病行医有“六不治”原则：（肺血液血小板红血球白血球）一是依仗权势，骄横跋扈的人（传染病丙肝乙肝甲肝）不治；二是贪图钱财，不顾性命者不治；三是暴饮暴食，饮食无常者不治；四是病深不早求医者不治；五是身体虚弱不能服药者不治；六是相信巫术不相信医道者不治。后世则尊称他为神医扁鹊。春秋战国时流行的主要医学著作有黄帝内经、（肺血液血小板红血球白血球）黄帝外经、扁鹊内经、扁鹊外经、白氏内经、白氏外经和旁篇这七本，合成（高血压心脏病糖尿病） “七经”。 （肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）在秦朝（公元前221年公元前207年）出现了世界上最早的专门法医令史。（肺血液血小板红血球白血球） 秦律规定，死因不明的案件原则

24、上都要进行尸体检验，司法官如果违法不进行检验，将受到（传染病丙肝乙肝甲肝）处罚。秦代的封诊式对法医鉴定的方法、程序等有较为详细的记载。在人命案件中，（高血压心脏病糖尿病）鉴定检验的主要内容有尸体的位置、创伤的部位、数量、方向以及大小等。令史检验完成之后，（肺血液血小板红血球白血球）必须提交书面报告，称为“爰书”，是世界上最早的法医鉴定和现场勘察报告。秦代还在世界上第一个建立传染病医院“疠迁所”，并制定了最早的治疗传染病的隔离制度。据1975年湖北省云梦睡虎地出土秦简中记载：当时规定，凡经医生在给病人检查后发现有鼻梁塌陷、（肺血液血小板红血球白血球）手上无汗毛、声音沙哑、（传染病丙肝乙肝甲肝）刺

25、激鼻腔不打喷嚏等症状者，一律送至疠迁所隔离治疗。这说明中国古代对传染性疾病的治疗措施，很早就已经是得力有效的。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌） 到了西汉时期(公元前202年（高血压心脏病糖尿病）公元8年)，（传染病丙肝乙肝甲肝）中医的阴阳五行理论已经非常完备，名医则有太仓公淳于意和公乘阳庆。东汉出现了著名医学家张仲景和华佗。（肺血液血小板红血球白血球）张仲景完善了中医的辨证理论，他还是世界上第一个临床医学大师，被尊称为医圣。（肺炎青霉素肝炎）他著有伤寒论疗妇人方、黄素方、口齿论、平病方等等医书，最终流传下来（肺血液血小板红血球白血球）的医书被并被后人编纂为伤寒杂病论（高血压心脏病糖尿病）和金匮要略 （

26、肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）近代、现代医学史近代的医学（肺血液血小板红血球白血球）西方近代医学是指文艺复兴以后逐渐兴起的医学，一般包括16世纪、17世纪、18世纪和19世纪的欧洲医学。 （肺炎青霉素肝炎）16世纪 封建社会后期，手工业和商业发展，手工工厂出现，生产力的增长也促进对新市场的寻找。1492年哥伦布发现新大陆,1497年达伽马发现好望角,15191522 （传染病丙肝乙肝甲肝） （高血压心脏病糖尿病）年麦哲伦环绕世界一周。许多药物（如鸦片、（肺血液血小板红血球白血球）樟脑、松香），由东方传入欧洲，美洲发现后，欧洲也有了金鸡纳、愈创木、可可果。 由于资本主义的兴起，首先在意大利形成了资产阶级

27、的知识分子。他们的特点是敢于向教会（传染病丙肝乙肝甲肝）思想挑战，反对宗教迷信的束缚。他们的口号是：“我是人，人的一切我应该了解”，以此来反对神学的统治。他们一方面传播新文化,一方面竭力钻研和模仿古代希腊的文化,因此此时期（肺血液血小板红血球白血球）称为“文艺复兴”。1543年哥白尼出版天体运行论，是科学史上文艺复兴的开始。 （肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）医学革命。文艺复兴运动中，怀疑教条、反对权威之风兴起。于是，医界也产生了一场以帕拉切尔苏斯（高血压心脏病糖尿病） (14931541)为代表的医学革命。 中世纪的医学校中, （肺血液血小板红血球白血球）主要讲阿维森纳的医典,以及加伦和希波克拉底的著

28、作。教师照本宣科，一切墨守成规，毫无生气。文艺复兴（传染病丙肝乙肝甲肝）的狂潮，很快就波及医学领域。帕拉切尔苏斯指出人体的生命过程是化学过程。他在巴塞尔大学任教时主张用流行的德语写书和讲演，使医学易为大众所接受，这是一件伟大的改革。他重视实践，反对烦琐的经院哲学，反对中世纪顽固的传统和权威观念，（肺血液血小板红血球白血球）他说：“没有科学和经验，谁也不能成为医生。我的著作不是引证古代权威的著作，（高血压心脏病糖尿病）而是靠最大的教师经验写成的”。他勇敢地向墨守成规和盲目崇拜进行斗争，公开焚毁了加伦和阿维森纳的著作。 （肺炎青霉素肝炎）细胞病理学。19世纪初细胞学说提出，到（肺血液血小板红血球白

29、血球） 19世纪中叶德国病理学家R.菲尔肖倡导细胞病理学，将疾病研究深入到细胞层次。他学说的（传染病丙肝乙肝甲肝）基本原理包括：细胞来自细胞；机体是细胞的总和；疾病可用细胞病理来说明。 （肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）细菌学的建立。19世纪中叶，由于发酵工业的需要，由于物理学、化学的进步和显微镜的改进，细菌学诞生了。（肺血液血小板红血球白血球）现代科学技术，不是单单研究一个个事物，一个个现象，而是研究事物、现象的变化发展过程，研究事物相互之间的关系。由“整理材料”的科学，发展成为严密综合起来的体系。 近代医学经历了1617世纪的奠基，18世纪的系统分类，（高血压心脏病糖尿病） 19世纪的大发展，到20世纪与现代科学技术紧密结合，发展为现代医学。20 （肺血液血小板红血球白血球）世纪医学的特点是一方面向微观发展，如分子生物学；一方面又向宏观发展。在向宏观发展方面（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌），又可分为两种：一是人们认识到人本身是一个整体；二是把人作为一个与自然（高血压心脏病糖尿病）环境和社会环境密切相互作用的整体来研究。20世纪以来，基础医学方面成就最突出的是基本理论的发展，它有力地推进了临床医学和预防医学。治疗和预防疾病的有效（肺血液血小板红血球白血球）手段在20世纪才开始出现。20世纪医学