RPHPLC法测定马兜铃酸含量方法的优化

1、RP-HPLC法测定马兜铃酸含量要领的优化杜晓曦,周跃华,路金才,韩娜,周娟,毕开顺【摘要】目的优化高效液相色谱法对马兜铃酸举行含量阐发。要领通过比力差异提取溶剂、差异提取要领,确定较为公正的供试品溶液制备要领。比力差异活动相条件对马兜铃酸含量测定的影响,选择含量阐发色谱条件。测定差异波长下的最低检出限度,确定痕量阐发条件。结果供试品溶液制备中以70%甲醇直接加热回流提取,服从优于其他提取要领。做一样平常含量阐发时可以选择活动相为甲醇-1%醋酸水溶液(7030)或乙腈-0.3%(nh4)23(ph=7.5)(2575),250n或319n作为检测波长。做痕量阐发时宜选择活动相为乙腈-0.3%(

2、nh4)23(ph=7.5)(2575),并选择检测波长为224n,最小检出量可达0.02ng。结论本实行所创立的要领可以正确可靠的举行马兜铃酸含量阐发并举行痕量查抄。【关键词】马兜铃酸；高效液相色谱法；含量测定keyrds：aristlhiaid；rp-hplpredure；saplepreparatin；hratgraphinditin马兜铃酸是马兜铃科植物中的重要身分,比年来已证明其具有肾脏毒性。鉴于马兜铃科植物种类许多,名称殽杂征象也很常见,各地方用药种类非常庞大,以是,有需要创立一个简朴有用、便于推广的要领对马兜铃酸举行定量阐发,以便真实正确地反响出药材或制剂中马兜铃酸的含量,包管用

3、药宁静。如今,高效液相色谱法是在马兜铃酸含量测定中利用最多、生长也较为成熟的一种要领,但测定条件多种多样。为此,本试验从供试品溶液的制备、色谱条件的选择两个方面举行了研究,以期创立并保举一个能正确反响马兜铃酸含量的高效液相色谱法。1仪器与试剂美国科普公司ssip3000高效液相色谱仪,del500紫外检测器,hribab-212ph计,anastar色谱事情站。色谱纯试剂购自天津康科德化学试剂厂,阐发纯试剂购自山东禹王化学试剂厂。关木通(两年生)采自沈阳药科大学药用植物园,马兜铃酸a比较品购自中国生物成品检定所(批号110746-200204)。2供试品溶液的制备2.1提取溶剂的选择现有的研究

4、中,马兜铃酸的提取溶剂多数选择甲醇、乙醇、丙酮或参加必然量的酸来提取,有文献报道,丙酮-10%甲酸提取服从较高。我们也重点观察了该浓度酸及常用溶剂对提取服从的影响。取枯燥关木通药材粉末(40目),细密称定30份,各0.5g,别离参加表1所示溶剂各20l,每种溶剂各提取2份,共30份,别离浸泡2h,超声15in,过滤,滤液蒸干,残渣以甲醇溶解,定容至10l容量瓶中,微孔滤膜过滤后,供hpl测定用。结果见表1。表1差异提取溶剂的比力略从实行数据看,甲醇、乙醇不相宜对马兜铃酸举行提取,参加酸或醇水溶液,可使马兜铃酸的提取服从明显增长,综合比力种种溶剂,70%甲醇对马兜铃酸的提取服从最高,可以作为马兜

5、铃酸的最优提取溶剂。2.2提取要领的选择索氏提取法：取0.5g关木通药材粉末4份,以70%甲醇120l别离索氏提取1、2、3.5、5h,别离测定含量,结果表白3.5h后峰面积不再增长。直接加热回流法：取关木通粉末1份,提取溶剂为70%甲醇25l,提取1h,过滤,滤液举行含量测定,滤渣再重复提取2次,别离得滤液并测定含量。结果表白,关木通提取1次即1h即提取完全。超声提取法：取关木通粉末1份,提取溶剂为70%甲醇25l,提取15in,过滤,滤液举行含量测定,滤渣再重复提取4次,别离得滤液并测定含量,结果表白,关木通重复提取4次即1h,即提取完全。见图1。从图1可以看出,在提取完全的环境下,超声提

6、取法需提取4次,泯灭1h,斲丧溶剂共100l；索氏提取法需提取3.5h,斲丧溶剂120l；直接加热回流法需提取1次,提取1h,斲丧溶剂25l,即可提取完全。故发起选择直接加热回流法提龋3色谱条件3.1活动相对马兜铃酸含量测定的影响从大量的文献报道来看,马兜铃酸含量测定的活动相一样平常利用甲醇-水体系1、乙腈-水体系2,尚有接纳乙腈-0.3%(nh4)23(ph=7.5)3体系,本试验对差异活动相体系甲醇-水-冰醋酸(70301)、乙腈-水-冰醋酸(50501)、乙腈-0.3%(nh4)23(ph=7.5,2575)举行了比力,见表2。由表2可以看出,3种活动相条件均可与其他身分实现基天职离,理

7、论塔板数也切合定量阐发的要求,但在乙腈-水体系下,马兜铃酸盘算含量偏低。表2差异活动相体系的比力略3.2低酸度对色谱分散的影响由于马兜铃酸属于酸性物质,活动相中参加适量的酸可以改进峰形,但是酸的参加将会影响色谱住的利用寿命,本节探究差异酸度对马兜铃酸分散的影响,结果见表3。表3低酸度对色谱分散的影响略从表3可以看出,甲醇-1%醋酸水溶液活动相条件分散度精良,理论塔板数切合定量阐发要求,低落酸度不影响色谱分散,甲醇-1%醋酸水溶液适互助为含量测定的活动相条件。3.3痕量阐发时色谱条件的选择仪器及要领的检测限度是举行马兜铃酸痕量阐发的紧张指标,为确保用药的宁静性,要求色谱条件具有较低的检测限。马兜

8、铃酸有4处最大汲取,即224、250、319、390n。取设置好的0.05g/l马兜铃酸比较品溶液,接纳无穷稀释法,活动相选择甲醇-1%醋酸水溶液及乙腈-0.3%(nh4)23(ph=7.5),并配以差异检测波上举行最低检出限度的观察,结果见表4。表4差异色谱条件的最低检测限度(略)从表4可以看出,乙腈-0.3%(nh4)23(ph=7.5)配以224n检测波长可以得到最低的检出限度(见图2),该条件可用于限度检出。别的,按照样品在差异波长下的最低检测限可以看出,样品在390n处检测限较高,不适互助为马兜铃酸含量测按时的检测波长,而250n及319n检测波长下检出限较低(1ng),信号相对较高

9、,适互助为含量阐发的检测波长。同时,思量到224n检测波长在庞大样品阐发时易出现杂质峰滋扰,不发起作为含测检测波长。4小结与讨论本试验对高效液相色谱要领测定马兜铃酸含量的供试品溶液的制备要领举行了条件优化选择,确定供试品溶液的制备要领为70%甲醇直接加热回流法举行提龋在活动相选择上,研究创造,甲醇-1%醋酸水溶液(7030)及乙腈-0.3%(nh4)23(ph=7.5)可以满意马兜铃酸含量阐发必要,结果较为正确。当药材中马兜铃酸含量较低,需举行痕量阐发时宜选择活动相为乙腈-0.3%(nh4)23(ph=7.5),检测波长为224n。本试验初次对甲醇-水分散马兜铃酸的酸度举行了观察,创造接纳低酸度的甲醇-1%醋酸水溶液对马兜铃酸举行含量测定,不但可以得到精良的分散结果,且可以减缓活动相对色谱柱的斲丧,相宜用作马兜铃酸的含量测定要领。【参考文献】1由丽双,王智民,姜旭,等.hpl法测定差异产地关木通中马兜铃酸a的含量j.中国中药杂志,2022,28(5)：465467.2hangys,dengjs,kuyr.deterinatinfaristlhiaidintraditinalhinesepresriptins,ntainingradixaristlhiaefanghibyhplj.jliquidhratgraphyrelatedtehnlgies,20