X5型大孔树脂分离纯化夏枯草中两种五环三萜酸

1、X5型大孔树脂分散纯化夏枯草中两种五环三萜酸【摘要】目的研究从夏枯草提取液中分散纯化齐墩果酸和熊果酸的工艺。要领夏枯草乙醇提取液经溶剂萃取和酸碱沉淀后，再用大孔吸附树脂进一步富集纯化两种五环三萜酸。结果X-5型大孔树脂富集纯化齐墩果酸和熊果酸的最优条件为：接纳两者总浓度为1.324g/L的夏枯草样品液上柱，调治pH=7摆布，室温下以流速1.0BV/h吸附饱和；解吸时先用水淋洗，再用30%，50%，70%，90%(V/V)(pH=11)乙醇解吸，流速1.0BV/h，网络90%乙醇洗脱液，所得产物中两者总含量到达87.30%，收率为81.30%。结论该工艺简朴可行，产物中目的组分纯度和收率较高，易

2、实现产业化。【关键词】大孔树脂夏枯草齐墩果酸熊果酸分散纯化夏枯草PrunellavulgarisL.是唇形科植物夏枯草的枯燥果穗，具有落压、抗炎、按捺免疫、抗菌和落血糖等作用1，此中两种重要五环三萜类身分齐墩果酸和熊果酸已被证明具有抗癌、消炎和抗病毒等作用2，3。硅胶柱层析是最常用的分散纯化三萜类身分的技能，但其工艺流程较长，硅胶不易于再生，产业化本钱高。比年来，大孔吸附树脂技能以其奇特的上风普及用于中草药中水溶性物质的分散，如水溶性生物碱、黄酮类、苷类、皂苷类、多酚类或酸性化合物、糖类、维生素、色素等4，5。大孔吸附树脂分散脂溶性身分，特殊是三萜皂苷元的研究很少6，7。本文实行挑选大孔吸附树

3、脂对夏枯草中两种五环三萜酸举行富集纯化，以期对中药夏枯草产物的开拓和拓展齐墩果酸及熊果酸的药源孝敬一点菲薄之力。1东西与要领1.1仪器和试剂夏枯草为市售药材，经断定为PrunellavulgarisL.的枯燥果穗；齐墩果酸(leanliaid,A)和熊果酸(Ursliaid,UA)比较品(HPL纯度98%)购自中国药品生物成品检定所；D4020，S-8，X-5，AB-8，NKA-9，D3520，D4006，NKA-II型大孔吸附树脂购自南开大学化工场；别的试剂均为阐发纯，实行用水为二次蒸馏水。PHS-3型细密酸度计上海雷磁仪器厂；岛津L-2022A高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器VPSPD

4、-10A，HederaDS-2色谱柱(4.6250，5)。1.2大孔吸附树脂的预处置惩罚树脂先用无水乙醇浸泡24h，待充实溶胀后用无水乙醇在提取器内提取8h，以撤除树脂中所含杂质。湿法装柱至柱高2/3处，依次用以下溶液冲洗：95%(V/V)乙醇以流速2BV/h洗至流出液澄清；水以2BV/h的流速洗尽乙醇，(Hl)=5%的水溶液以流速46BV/h举行淋洗，并浸泡24h，水洗至中性；(NaH)=2%的水溶液以流速46BV/h举行碱洗，水洗至中性，即处置惩罚完毕。1.3样品制备及测定要领将夏枯草在烘箱中60下枯燥24h，破坏过40目筛。称量约莫2.0kg粉末，参加10L95%(V/V)乙醇80下回流

5、两次，2h/次，得深绿色浸膏。加适量水制成悬浮液后经石油醚、氯仿、正丁醇萃龋将氯仿萃取部门浓缩蒸干，无水乙醇溶解后，用5%NaH调治溶液pH=11，所得滤液用10%Hl酸化至pH=3，再参加1倍量pH=3的蒸馏水，过滤所得沉淀用蒸馏水洗至中性，60真空枯燥，得到包罗A和UA在内的三萜酸富集物，用pH=7的75%(V/V)乙醇溶液配制成两者总量为2.137g/L的夏枯草样品液。1.4大孔吸附树脂挑选选择D4020，S-8，X-5，AB-8等8种大孔吸附树脂举行实行，测定这8种树脂对夏枯草中两种五环三萜酸的静态吸附量息争吸率以挑选树脂。取1.0g预处置惩罚好的大孔吸附树脂于带塞的磨口锥形瓶中，参加

6、A和UA总浓度为2.137g/L的夏枯草样品液40.00l，于室温下振荡180r/in24h至吸附平衡，测定滤液中两者含量，按式(1)盘算各树脂的静态吸附量。用pH=11的90%(V/V)乙醇溶液40.00l对吸附饱和的树脂举行解吸，测定解吸液中两者的含量，按式(2)式盘算解吸率。吸附量g/g-eV式(1)解吸率%=V11(-e)V100%式(2)此中起始浓度，e平衡浓度，V吸附液体积，树脂质量，1为解吸液浓度，V1为解吸液体积。1.7动态吸赞同动态解吸实行将10g已预处置惩罚的树脂湿法装入250层析柱中，将夏枯草样品液以必然的流速通过色谱柱，测定流出液中A和UA的含量，观察上柱液pH值、浓度

7、、流速等因素对树脂吸附性能的影响，确定最正确的吸附工艺条件。对已吸附样品的树脂用乙醇溶液举举措态解吸实行，观察洗脱剂pH值、流速等对树脂解吸性能的影响，测定差异条件下解吸液中A和UA的浓度，确定最正确的解吸工艺条件。2结果2.1树脂挑选结果在雷同的实行条件下，测得各树脂的静态吸附解吸结果如表1所示，X-5型大孔树脂对夏枯草中两种三萜酸具有较高的吸附量息争吸率。实行结果表白，吸附量较大的多为非极性或弱极性树脂，如X-5、D4020、AB-8型等。缘故原由大概是夏枯草中三萜类身分为皂苷元，属于弱极性物质，与这类大孔树脂具有特异性吸附。而X-5型大孔树脂较别的几种非极性树脂吸附、解吸本领更好，这大概

8、跟其较大的比外貌积和孔径有关。表1大孔吸附树脂的布局性能参数及静态吸附解吸结果略2.2静态吸附动力学历程在充实时间内用X-5型大孔树脂吸附夏枯草样品液至饱和，吸附时按时取样测定A和UA的浓度，绘制静态吸附动力学曲线见如图1。结果表白8h后树脂吸附平衡。2.3静态吸附等温线在室温下，配制差异浓度的夏枯草样品液，用X-5型大孔树脂吸附饱和，测定吸附平衡时A和UA的浓度，盘算饱和吸附量，绘制静态吸附等温线见图2。接纳rigin软件的线性拟合东西，使用Languir等温吸附方程的线性情势对实行结果举行拟合，如图3所示。Languir等温吸附方程式是创立在试验底子上的吸附理论，其方程式如下：qe=qKe

9、/(1+Ke)。此中K是Languir等温吸附方程式常数，q是吸附剂饱和吸附量，qe为平衡时的吸附量，e为平衡时的溶液浓度。以浓度e为自变量，e/qe为因变量，化Languir方程为线形方程e/qe=1/qK+e/q。代入实行数据得方程e/qe=0.01485+0.02504e，相干系数R2=0.99870，拟合结果比力抱负。2.5上柱液的pH值对树脂吸附量的影响取5份X-5树脂10g，湿法装入250色谱柱中，将A和UA浓度为1.324g/L的样品液260l调成差异pH值(3，5，7，9，11)的溶液，在雷同条件下举举措态吸附。结果表白，pH=7时打孔树脂的吸附量最大。上柱液的pH过小，蒸馏水

10、第一步洗脱时便有三萜酸沉淀析出，大孔树脂为非特异性吸附；上柱液的pH值过大，A和UA形成盐，在上柱液中溶解性能加强，也倒霉于树脂吸附。2.6上柱液的浓度观察正确移取雷同物质量的A和UA以差异浓度、雷同流速通过装有10gX-5大孔树脂的层析柱，测定流出液浓度见表2。当夏枯草样品液的浓度为1.324g/L时，大孔树脂的吸附量最大，以是选择动态吸附的上样浓度为1.324g/L。表2上柱液浓度对动态吸附的影响略2.7上柱液的流速对树脂吸附量的影响将260l，1.324g/L的夏枯草上柱液调治pH=7，以差异流速(0.5BV/h，1.0BV/h，1.5BV/h，2.0BV/h，2.5BV/h)通过装有1

11、0gX-5大孔树脂的层析柱，观察差异流速对树脂吸附量的影响见图5。X-5大孔树脂对A和UA的最正确吸附流速为1.0BV/h。流速过大，树脂吸附率落落；流速过小那么到达吸附平衡时间延伸。2.8洗脱剂的选择按照环保工艺的要求，接纳乙醇水溶液为洗脱剂。由于X-5型树脂为非极性大孔树脂，故极性小的溶液洗脱本领强。因此洗脱时，先用极性较强的蒸馏水将非特异性吸附物质重要为多糖和一些杂质洗脱，然后由低到高用差异浓度乙醇溶液强别的身分洗脱，末了接纳高浓度乙醇将目的组分洗下。本实行以蒸馏水、30%，50%，70%，90%(V/V)乙醇溶液作为层析柱洗脱剂。2.9洗脱剂pH值对大孔树脂解吸附的影响将夏枯草样品液调

12、治pH=7上柱，静置480in后，依次用蒸馏水、30%，50%，70%(V/V)乙醇洗脱，再用pH=11的90%乙醇洗脱，测定洗脱液中A和UA的含量。按同样要领调治pH别离为713的90%乙醇洗脱，测定两者的含量如图6。洗脱剂的pH值越大，洗脱剂的洗脱本领越强。当pH=11时，洗脱率可以到达81.30%。缘故原由大概是在解吸历程中，吸附的A和UA与碱性洗脱剂产生反响天生钠盐，导致大孔树脂对两者的吸附本领落落，钠盐较易进入洗脱液中。pH值继承升高，洗脱率根本保持稳定。因此，洗脱剂的pH值选择在11摆布。2.10动态解吸洗脱液流速的影响对吸附饱和的树脂用pH=11，2.0BV的90%(V/V)乙醇

13、以差异流速举行洗脱，实行结果表白，流速越慢树脂解吸结果越好，但太慢又会使事情周期延伸，因此实行选择流速1.0BV/h。3结论X-5型大孔吸附树脂可以或许有用地富集纯化夏枯草中两种五环三萜酸身分，产物中目的组分的纯度和收率较高，结果证明该工艺流程简朴易行。终极产物中两种三萜酸A和UA共存，需经制备色谱进一步分散得到单体。【参考文献】1肖培根.新编中药志.北京：化学产业出书社，2001：763.2肖坤福，郑云法，刘成左，等.熊果酸的研究希望J.时珍国医国药，2022,16(12)：1298.3王德仁.齐墩果酸研究新希望J.天津药学，2022,15(3)：56.4闫磊，何再安，刘焱文.大孔吸附树脂在中药研