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文档简介

1、生物制药工艺学实验从蛋清中提取溶菌酶实验流程柱层析前的准备工作离子交换层析法从蛋清中初步提取溶菌酶超滤法进一步分离纯化溶菌酶和盐析法浓缩、透析法除盐SDS法检测溶菌酶的纯度测定溶菌酶的活力和冷冻干燥溶菌酶实验一、柱层析前的准备工作实验目的：掌握离子交换树脂预处理的方法；掌握离子交换层析柱装填的方法。实验材料树脂：724型阳离子交换树脂层析柱:1.6cm30cm溶液：0.1M NaOH，0.1M HCl其他材料：布氏漏斗，抽滤瓶，铁架台，恒流泵，核酸蛋白检测仪等实验原理离子交换树脂及其预处理离子交换层析系统的组装离子交换层析的参数背景知识离子交换树脂结构骨架：接有功能基团，本身是惰性功能基团：连

2、接在骨架上，可与相反离子结合活性离子：与功能基团所带电荷相反的可移动的离子待交换分子：在吸附阶段可与活性离子交换，与骨架上的功能基团结合实验原理724型阳离子交换树脂 骨架：丙烯酸型； 功能基团：羧基；pK4.5； 适用的pH范围：pH514； 系弱酸性阳离子交换剂，所以 交换容量随缓冲液pH值的变化而变化，pH7时，交换容量是8.0mmol/g； Na型树脂比H型树脂更容易与溶菌酶进行交换。树脂的预处理物理处理：水洗、过筛，去杂，以获得粒度均匀的树脂颗粒；化学处理： 阳离子树脂 酸碱酸（氢型）； 碱酸碱（钠型）树脂的再生钠型阳树脂可用23M NaCl溶液再生；氢型阳树脂用强酸再生，如盐酸。若

3、有强吸附物则可用0.1N NaOH溶液洗树脂；若有脂溶性物质则可先用非离子型去污剂或者乙醇洗树脂然后再生。转型：树脂在去杂后，为了发挥其交换性能，按照使用要求人为地赋予活性离子的过程。弱酸或者弱碱性树脂：用碱（NaOH）或者酸（HCl）转型；强酸或者强碱性树脂：除了碱、酸还可用NaCl溶液转型。层析的装置层析的参数 柱床体积：离子交换树脂装柱后，从柱的底 板到树脂沉积表面的体积。 计算方法：柱床体积横截面积高度实验内容预处理724型阳离子交换树脂装填层析柱配制磷酸钠缓冲液平衡离子交换树脂预处理724型阳离子交换树脂 碱酸碱的方法（Na型） 每次用0.1N NaOH或者0.1N HCl溶液（体积

4、约为树脂的23倍）浸泡树脂1015min后，都要用蒸馏水将碱液、酸液冲洗掉。实验步骤实验步骤装填离子交换层析柱（重力沉降法）固定层析柱，保持层析柱垂直；将蒸馏水倒入层析柱中，以排出管道中的空气，当蒸馏水高度约为层析柱高的一半时，将层析柱下端的塑料管夹紧；用玻璃棒将树脂搅拌均匀，倒入层析柱内，松开下端的塑料管，树脂自然沉降，最后保持蒸馏水面高于树脂表面约2cm。注意事项：严防树脂中出现断层、气泡；保持树脂浸于蒸馏水中、不能干涸；保持树脂表面水平，不被蒸馏水扰动实验步骤配制0.1M磷酸钠缓冲液pH7.0 先配制 1M Na2HPO4 57.7mL 1M NaH2PO4 42.3mL 将两者混合后稀释至1000mL，装于试 剂瓶中。实验步骤平衡离子交换树脂 0.1M磷酸钠缓冲液恒速缓慢流经树

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