HLADRB1高分辨测序分型与48例非亲缘性脐血移植者GVHD相关性分析

1、HLA-DRB1高区分测序分型与48例非亲缘性脐血移植者GVHD相干性阐发杨昕，廖灿，李焱，黄以宁，许遵鹏，汤雪薇，吴洁莹，陈劲松，吴韶清【摘要】1998年6月至2022年7月，广州脐血库向海内21家移植中央提供非亲缘异基因脐血移植54例。本研究接纳PR产物直接测序法对HLA-DRB1举行高区分分型PR-sequeningbasedtypingPR-SBT，并结合HLA-SSP低区分分型效果，探究非亲缘性脐血移植供/受者HLA-DRB1等位基因及其亚型与脐血移植GVHD产生率的干系。使用盐析或柱提法提取48例非亲缘性脐血及移植患者全血DNA，接纳HLA-SBT要领别离对HLA-DRB1等位基因

2、举行高区分分型，并与HLA-SSPHLA-sequeningspeifipriers低区分效果举行比力阐发。效果表白：接纳双盲法对48例非亲缘性脐血移植供/受者样本HLA-DRB1举行高区分分型，效果HLA-DRB1等位基因亚型匹配全相合病例的GVHD产生率25%明显低于不完全相合病例的GVHD产生率65.6%P=0.008。结论：对HLA-DRB1接纳高区分分型要领在非亲缘性脐血移植HLA分型方面具有紧张的临床应用代价。【关键词】非亲缘性脐血移植rrelativeAnalysisbeteenHLAHighReslutinTypingandGVHDin48asesReEivedUnrelate

3、dUbilialrdBldTransplantatinAbstratUnrelatedubilialrdbldunitsfr54asesin21transplantentersereprvidedbyGuangzhurdBldBankinhinafr1998t2022.ThisstudyasaiedtidentifyHLA-DRB1allelesbyeansfPRsequeningbasedtypingethds(SBT)andtanalyzetherrelatinbeteenHLA-DRB1allelesandGVHDinunrelatedubilialrdbldtransplantatin

4、(UBT).48utf54patientsreeivedUBTereflledup.DNAereextratedfrrypreservatinbldfreipients/dnrsithUBT，HLA-DRB1allelestypingerednebySBT.paredithlreslutinresultsfHLA-DRB1alleles，highreslutinresultsereanalyzedtseeanyrrelatinbeteenHLA-DRB1allelesandGVHD.byduble-blindstatistiallyanalysisfHLA-DRB1highreslutinin

5、48dnr/reipienttypingsinUBT.TheresultsshedthattheinidenefGVHD(25%)inpatientshhasHLA-DRB1allelesathedithdnrssignifiantlyler(65.6%)thanthatinthepatientsithHLA-DRB1allelesisathed(P=0.008).ItisnludedthatHLA-DRB1byhighreslutintypingethdisiprtantinlinialappliatininUBT.Keyrdsunrelatedubilialrdbldtransplanta

6、tin；HLA-DRB1allele；GVHDHLA高区分分型要领的创立，进一步展现了异基因造血干胞移植与HLA等位基因的干系。有研究表白，HLA-DRB1等位基因差异与GVHD之间存在强相干性，并且DRB1不相合与存活期收缩严密相干1。但是，如今的研究表白并不是全部等位基因差异与它的不相容是同等的，有些HLA等位基因的不相合是可以耐受的2，3。因此，接纳HLA高区分分型对移植供受体举行回首性研究，不但可以对HLA血清学分型起到积极的校正作用，并且对研究哪些HLA等位基因相合可以显着削弱GVHD，哪些等位基因不相合可以耐受等方面以及订定相对个别化的HLA分型计谋都具有紧张的临床应用代价。本研究

7、接纳以测序为底子的HLA分型技能HLA-sequeningbasedtypingHLA-SBT对可随访的48例脐血移植病例HLA-DRB1分型举行了回首型阐发，以查明HLA低高区分分型环境下的匹配程度与GVHD的相干性，开端探究了HLA-DRB1等位基因匹配程度对非亲缘脐血移植GVHD的影响。质料和要领研究工具选择脐血泉源捐赠的脐血全部来自广州市妇婴病院产科。这些脐血于第三产程网罗，脐血的分散、冷冻、保存以及相干的检测详见文献2。移植供受体选择来自21家移植中央共74例非亲缘性脐血移植病例，剔除多份脐血移植病例13例，无法统计阐发病例7例及待随访病例6例，选择48例非亲缘性脐血移植供受者举行统

8、计阐发。移植受者一样平常环境、疾病状态以及移植后随访资料由各个移植中央提供(表1。Table1.Inidenefdiseasesin48UBTreipients略实行要领移植供/受体DNA提取均接纳GTDNA提取试剂盒举行提龋HLA-SSP分型接纳neLabda公司的HLA-SSP分型试剂盒举行分型。HLA-SBT要领接纳ABIPRIS3100型测序仪举行阐发。PR扩增：DNA4l与PRixFrensi公司提供16l混淆，再参加Gld酶0.3l举行扩增反响。PR条件如下：9510分钟；9620秒，6030秒，723分钟，36个循环；保存在4；消化：向PR产物中参加3lExSAP-IT，举行消化

9、反响：3720分钟，8015分钟；测序反响：消化后产物Sequeningix混淆后，举行测序反响：9620秒，602分钟，25个循环。测序反响产物用NaA/EDTA去除多余的Sequeningix，并用100%及80%EtH沉淀和纯化DNA；电泳：参加15l甲酰胺，置于ABTPris3100测序仪中举行电泳；效果阐发：使用athTls及TNavigatr软件对电泳效果举行阐发，得出HLA高区分配型效果。数据统计接纳SPSS10.0统计软件包和hi-squaretest阐发。效果非亲缘性脐血移植供/受者HLA分型要领相合性48例非亲缘性脐血移植供、受者HLA接纳PR-SBT技能在低区分程度HLA

10、基因型星号后2位数与SSP分型效果符合，HLA-DRB1等位基因全相合38例79.2%，不全相合10例20.8%。接纳HLA-SBT高区分率分型效果提示：HLA-DRB1等位基因亚型全相合16例33.3%，1/2位点相合25例52.1%，2/2位点相合7例14.6%。SBT分型效果与GVHD产生率48例非亲缘性脐血移植供受者中，GVHD产生25例52.08%。对以上48例非亲缘性脐血移植供/受者HLA-DRB1等位基因亚型阐发效果表白，16例HLA-DRB1等位基因亚型全相合病例中，GVHD产生4例25%；32例HLA-DRB1等位基因亚型不完全相合中，GVHD产生21例65.6%，此中25例

11、HLA-DRB1等位基因亚型1/2位点不相合病例中，GVHD产生16例64%；7例HLA-DRB1等位基因亚型完全不相合的病例中，5例产生了GVHD71.4%。统计阐发表现，48例非亲缘性脐血移植HLA-DRB1等位基因亚型相合与不完全相合和完全不相合受者GVHD产生率具有明显的统计学差异P=0.008(表2)。Table2.HLAathingandurrenefGVHDin48asesreeivedunrelatedUBT略多因素阐发按照48例非亲缘脐血移植随访资料，将年事，体重，有核细胞输入量TN输入量，D34+细胞输入量，G-SF输入量，V熏染及HLA-DRB1匹配环境等影响GVHD的多

12、个因素举行Kruskal-allis查验，创造患者年事和HLA-DRB1等位基因匹配与否与GVHD产生率具有统计学相干性年事因素P=0.03，HLA-DRB1匹配因素P=0.009，未创造其他因素与GVHD有明显相干性。对年事因素及HLA-DRB1匹配环境举行Partialrrelatins阐发，操纵年事因素后HLA-DRB1匹配环境同GVHD仍具有明显相干性r=0.3731，P=0.01。讨论HLA高区分分型要领的创立，进一步展现了异基因造血干细胞移植与HLA等位基因的干系。有研究表白，单个等位基因的不匹配如碧眼儿HLA-A*0201和HLA-A*0205亚型可以引起严峻的移植物抗宿主病gr

13、aftversushstdisease，GVHD4。也有报道，DRB1等位基因差异与GVHD之间存在强相干性，并且DRB1不合与存活期收缩严密相干5。但是如今的研究表白，并不是全部等位基因差异与它的不相容是同等的，有些HLA等位基因的不相合是可以耐受的。在Nihlsn等6对HLA-DP抗原的报道中，接纳混淆淋巴细胞造就ixedlyphyteulture，L要领不雅察到最猛烈的LR反响与DPB1*0301和DPB1*0201有关，低LR反响与DPB1*0401和DPB1*0402有关。因此，有需要寻到哪些HLA等位基因不相合是移植病人可以耐受的，哪些HLA等位基因相合是必须的，使HLA在造血干细

14、胞移植中的应用远景更辽阔7-10。本研究通过对广州脐血库近5年来48例非亲缘性脐血移植供受者HLA-DRB1等位基因效果举行等位基因亚型阐发，以为HLA-DRB1等位基因亚型分型在脐血移植HLA分型方面具有必然的科研及临床应用代价。在本研究效果中，HLA-DRB1等位基因亚型0/2、1/2和2/2位点不相合的患者GVHD产生率别离为25%4/16、64.0%16/25和71.4%5/7。通过单因素统计阐发创造，HLA-DRB1匹配与否与GVHD产生率具有强相干性P0.01。将HLA-DRB1匹配环境与年事、体重、TN输入量、D34+细胞输入量，G-SF输入量，V熏染等因素举行多因素统计阐发，HLA-DRB1与GVHD仍具有明显相干性r=0.3731，P=0.01，说明HLA-DRB1分型接纳高区分要领可以显着削弱GVHD的产生率。因此，在非亲缘性脐血移