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文档简介

1、TECANe仪器使用手册infinite200文件版本:1.2 说明:本手册并非Tecaninfinite200操作手册的中文版,仅供Tecaninfinite200酶标仪使用者麥考。仪器的性能和使用只能以Tecaninfinite200原厂说明书、TecanMagellan软件原厂说明书、Tecanl-Control软件原厂说明书.TecanNanoQuant原厂说明书为准。因不怡当的理解和使用本手册带来的经济损失和知识产权纠紛,由手册使用者自行承担,本手册编制奢不承担任何连带责任。 声明概况TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark41.1仪黠概述5 HYPERL

2、INK l bookmark61.2仪器支持的检測功能5 HYPERLINK l bookmark81.3计和要求6安装 HYPERLINK l bookmark122.1仪器安装72.1.1开箱7 HYPERLINK l bookmark162.1.2取消托架面定还7 HYPERLINK l bookmark182.1.3装入滤光片(仅F200)8 HYPERLINK l bookmark202.2加电开机9 HYPERLINK l bookmark262.3移机和运输11仪黠性能3.1技术规格參数12 HYPERLINK l bookmark323.2荧光133.3荧光偏援143.4光吸收

3、15 HYPERLINK l bookmark363.5辉光型发光163.6闪光型发光163.7双色发光173.8比色杯光吸收18 HYPERLINK l bookmark423.9加样器18使用 HYPERLINK l bookmark464.1使用须知19 HYPERLINK l bookmark4842I-Control软件的安装和联机19 HYPERLINK l bookmark504.3Magellan软件的安装和联机20 HYPERLINK l bookmark524.4使用IControl软件读取数据224.5各种測畳的金数设26 HYPERLINK l bookmark584.

4、5.1逸择板型26 HYPERLINK l bookmark604.5.2光吸收測26 HYPERLINK l bookmark624.5.3荧光测量28 HYPERLINK l bookmark644.5.4发光测量30 HYPERLINK l bookmark664.5.5动力学測31Magellan软件操作简介5.1直取数据33 HYPERLINK l bookmark725.2主菜单按钮说明345.3创建/编辑測方法36 HYPERLINK l bookmark765.3.1ft分析方法说明38 HYPERLINK l bookmark785.4评估结果43 HYPERLINK l b

5、ookmark805.5软件的注册43维护 HYPERLINK l bookmark826.1维护44 HYPERLINK l bookmark866.2液体派出的处理446.3仪聽消奉456.3.1消声方法45 HYPERLINK l bookmark926.3.2消毒步骤46附录1附1加液黑的使用方法W1.1加液磁述47 HYPERLINK l bookmark100附1.2加液鄂的使用48 HYPERLINK l bookmark102附1.2.1加液器使用注意事顼48 HYPERLINK l bookmark104附1.2.2加液器的维护(Service)指令50 HYPERLINK

6、l bookmark106附1.2.3加液器的加液操作55 HYPERLINK l bookmark108附1.3加液器的维护59附录2附2NanoQuant模块的使用方法TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark114附2.1NanoQuant60 HYPERLINK l bookmark112附2.2NanoQuant模块的使用方法60 HYPERLINK l bookmark118附2.3NanoQuant板的维护67 概况1.1仪器概述TecanInfinite200是Tecan公司生产的全自动多功能微孔板阅读器,支持ANSI/SBS标准的6孔板至384孔板,

7、与Tecan自动工作站兼容。TecanInfinite200分为两个型号:InfiniteM200采用光栅设计;InfiniteF200采用滤光片设计。1.2仪器支持的检测功能荧光强度(FI:FluorescenceIntensity)顶部测量荧光强度(FI:FluorescenceIntensity)底部测量时间分辨荧光(TRF:FluorescenceTimeResolved)闪烁荧光(FlashFluorescence)荧光偏振(FP:FlourescencePolarization)(仅F200)光吸收(Absorbance)比色杯光吸收(Absorbancewithcuvette)(

8、仅M200)加液器光吸收(Absorbancewithinjectors)微量核酸、蛋白光吸收检测(UVAbsorbancewithNmnoQumt)辉光型发光(GlowTypeChemi-orBioluminescence)生物发光能量共振转移(ERET:BioluminescenceResonanceEnergyTransfer)闪烁型发光(FlmshLuminescence)1.3计算机要求最低配置:奔腾III或其它相应性能处理器1GHz20GB硬盘256MB内存1个USB接口CDROM显示器分辩率:1024X768推荐配置:奔腾4或其它相应性能处理器2GHz40GB硬盘512MB内存2

9、个USB接口,1个RS232接口CDROM显示器分辩率:1280X1024操作系统:WindowXPProfessional,SP1以上或WindowsVistaMicrosoftExcel2000或更高版本(使用I-Control软件时要求)安装2.1仪器安装211开箱査看仪器包装是否有破损,如有可能导致仪器损坏的破损,不可打开包装。立即联系经销商。将包装箱置于干净平整的地面或桌面上,打开包装,取出填充材料,取出仪器(重约16Kg),取下塑料封套,观察仪器有无破损,确认仪器背面的主电源开关处于关闭状态。将仪器置于安装位置。安装位置要求平整、无阳光直射、无外源震动干扰、干净无液体残留和灰尘,仪

10、器背面距离墙壁至少10cm。察看装箱单,清点配件,确保配件完整。2.1.2取消托架固定装蚤用手打开仪器微孔板托架门和比色杯/滤光片架门,旋下比色杯/滤光片架门内的固定螺栓(下图中央的红色圆柱体),旋松另第二个安装螺栓(下图下部右侧红色夹子)。 拉出微孔板托架,旋下第二个固定螺栓(下图右侧红色夹子)。滑动右侧红色固定夹子,并取下。同右侧,取下左侧红色固定夹子。将微孔板托架推回到仪器内。保存好固定夹子和固定螺栓,以备运输仪器时固定微孔板托架。2.1.3装入滤光片(仅F200)取出随机附带的滤光片箱中的滤光片架,用手搬开滤光片架门,将滤光片架插入门内的滤光片架位置,只有唯一的一个方向可以插入,滤光片

11、架会自动吸入。!切勿用力推入!滤光片的信息巳经储存在滤光片架上,仪器将自动读取,不需要用户填写或改写滤光片信息,如果要重新安装滤光片架上的滤光片,请参照原厂英文说明书相关内容进行操作。如需取出/更换滤光片架,请参考章节4.4和章节5.2中弹出滤光片架指令。2.2加电开机仪器工作电压要求:100-120V/220-240V50/60Hz;水仪器环境要求:-209至+609,相对湿度小于90%o超出工作电压范围的供电电压和不合适的工作环境都可能造成仪器工作异常,甚至仪器损坏。确认仪器背面的电源开关处于关闭状态,确认计算机处于关闭状态。用随仪器配套的USB连接线连接仪器和计算机。如果有加样器,用随机

12、配套的连接线连接仪器和加样器。连接仪器电源线。启动计算机,进入操作系统,安装I-Control软件或Magellan软件。软件安装完成后,打开仪器背面的电源开关。仪器正面左侧的绿色三角形电源指示灯会闪烁十数秒,这是仪器正在进行自检,闪烁停止后,电源指示灯呈绿色发光状态时,仪器处于待机状态。仪器背面接口示意图IrL丿1仪器风扇电源风扇电源开关电源接口认证标签配置标签7仪器名称和信息保修标签USB接口加液器接口!注意:撕毁或者除去保修标签,将使保修合同失效 2.3移机和运输如果需要移动仪器,请先打开计算机,打开仪器电源,运行操作软件,用操作软件依次弹出微孔板托架,比色杯架(M200),滤光片架(F

13、200),确定仪器内部没有存留微孔板、比色杯、滤光片架或其它外来实验耗材,然后关闭操作软件,关闭仪器和计算机电源,拔下仪器的电源线和USB数据线。如需要运输仪器,请先完成上述移机程序,然后取出安装时保留下来的两个微孔板托架固定夹子和两个固定螺栓,按照上面2.1.2描述的过程执行相反的程序,将微孔板托架固定夹子和固定螺栓装上,随后用透明胶带封住微孔板托架门和比色杯/滤光片架门。将仪器置于有充分避震、防撞击和防水措施的包装箱中,即可运输。如果在移机和包装过程中有任何问题,请咨询当地代理商客户服务人员。仪器性能31技术规格参数參数待点检測软件控制接口USB滤光方式F200滤光片切换M200自动光栅支

14、持微孔板类型6孔至384孔板(SES标准格式)自定义特殊规格微孔板软件自动扫描温度控制环壇温度+5C-42C重板圆形或直线摇动,振幅1mm-6nim,步进0.5mm光源高能闪光氤灯光路Quartz/PMMA光纤和透镜荧光检测器标准型:光电倍増管(PMT)增强型:红光敏感型光电倍增管(red-sensitivePMT)发光检测器光于计数型低暗电流光电倍增管光吸收检測器光电二极管电源自感应:100-120V/220-240V50/60HZ功率150VA外形外部尺寸长:457mm宽:425mm髙:253imn重量F20014KgM20015.8Kg 环境时环埴温度操作时15C-30C59F-86F非

15、操作时-200-+6000-4F-+140F相对湿度小于90%无冷凝过压级别n污染级别2用途实验室用仪器嘈声水平60dBA处直方式电于废弃物(传染性废弃物)32荧光參数特点波长范围M200230nm-850nm,lnm步进F200230nm-850nm标准型PMT激发230nm-600nm发射330nm-600nm増强型PMT激发230nm-850nm发射280nm-850nm读数时间20-2000pS延迟时间0-2000pS増益值设It值手动方式1-2550-60,000RFU优化方式自动0-60,000RFU从单孔计算自动0-60,000RFU荧光强度顶部检測性能板型96液体体积ul200

16、阅读次数25荧光检測极限pM20pM一致性25nM荧光素3%CV重复性25nM荧光素2%荧光强度底部检測性能板型96液体体积ul200阅读次数25荧光检測极限pM100pM一致性25nM荧光素3%CV重复性25nM荧光素2%3.3荧光偏振(仅F200)參数特点波长范围标准型PMT激发300nm-600nm发射330nm-600nm増强型PMT激发300nm-850nm发射标准滤光片330nm-850nm激发485(20)nm水平/垂育发散535(25)nm水平/垂直读数时间20-2000pS延迟时间0-2000pS偏振精度5mPlnM荧光素增益值设置值测童范围手动方式1-2550-60,000

17、RFU优化方式自动0-60,000RFU从单孔计算自动0-60,000RFU34光吸收#数特点波长范围M200230nm-1OOOnmlnm步进F200230nm-1OOOnm測量范围0-3OD光吸收检測性能板型96孔准确性0-2OD(l%+10mOD)准确性2-3OD2.5%一致性1OD3%CV車复性0-2OD(l%+10mOD)車复性2-3OD099835辉光型发光參数特点波长范围380nm-600nm线性动态范围10107(扩展的动态范围)检测时间l-20000ms串扰率(黑板)10光稀释10,1(不稀释)ATP輝光型发光检測性能板型96孔液体体积ul200单孔检测时间ms1000ATP

18、检测极限3fmol/孔3.6闪光型发光參数特点波长范围380nm-600nm測量范围10检测时间l-20000ms串扰率(黑板)0.01%光稀释10,1(不稀释)ATP检测极限80amol/孔37双色发光(如BRET)WavelengthnmUOUSS-ESUEJIJL參数特点波长范围见本表下面图1和图2动态范围10检測时间1-20000ms,双色各自设定板型96和384孔板图1:品红色发光透光谱Wavelengthnmccnss!EwUQl图2:绿色发光透光谱 3.8比色杯光吸收(仅M200)參数特点波长范围M200230nm-1OOOnmlnm步进測量范围0-3OD光吸收检測性能測量条件波

19、长300nm7OOnin,读25次比色杯类型12.5X12.5mm,最大高度55mm(含盖);微量比色皿:中心高15mm,测量窗口2mm准确性0-2OD(l%+10mOD)准确性2-3OD2.5%一致性1OD3%CV車复性0-2OD(l%+10mOD)車复性2-3OD0.9983-9加样器參效特点准确性10%10ul2%lOOul0.7%450ul精确度10%10ul2%lOOul0.7%450ul使用4.1使用须知+Infinite200是由计算机控制的全自动仪器,仪器表面除电源开关外,没有需要人工触动的部件;+Infinite200是精密的光学仪器,请注意防水防尘,不要在机箱上放缓冲液、试

20、剂或者重物;+仪器在弹出、吸入微孔板托架肘,请不要阻挡或者推进;+放微孔板到托架时,A1孔应处于左上角;+可接受的微孔板最大高度为23mm(含盖);+开机后稳定至少5分钟,再进行发光检测;+检测完成后及时取出微孔板*比色杯;+仪器背后右上的风扇外的空代过滤垫如积累灰尘较多,需要及时更换。4.2I-Contro1软件安装和联机I-Control软件是Tecan公司出品的Infinite系列酶标仪的数据读取软件,可以控制仪器读取原始数据并输入到Excel中。安装I-Control前请确认仪器巳经与计算机连接,电源线巳经插好,电源开关处于关闭状态。取出随仪器带来的I-Control光盘,安装光盘内的

21、I-Control软件,根据提示完成安装。安装完成后,打开仪器电源,等待仪器进入待机状态后,运行I-Control软件,点击Connect图标亠:在联机窗口中选择相应仪器,点击OK即可联机。4.3Magellan软件安装和联机Magellan软件是Tecan公司的酶标仪数据读取和数据分析软件。打开Mmgellmn软件包装盒,取出安装光盘,根据软件提示安装Magellan软件。第一次运行M忍gellmn软件时,或者移机后重新连接了仪器后,都会进入联机界面,如下图: SetupPortInfiniteSeries|Cancel|HelpInstrumentSelect:OFindanyPortOD

22、emomode # 请在“Instrument”下拉菜单中选择“Infinite”,在Port”项中选择“findany”,在“Stack”项中选择“findany”或者“None”,点击OK即可。软件连接仪器需要一段时间,请耐心等待,正常情况下会在弹出窗口中出现仪器的名称,选择仪器名称,点击确认即可联机成功。注意:请不要点击弹出窗口左下角的“Showsimulatedinstruments”,选择这个选项将显示出虚拟的仪器,联接了虚拟仪器,软件将无法控制仪器。如果没有出现仪器请确认以下情况:仪器电源是否打开,仪器前面板右侧的绿色三角形是否明亮;仪器与计算机的USE端口是否连接正常;计算机是否

23、感染木马病毒,或者存在操作系统的故障。排除上述情况后,重新打开软件,再次联机。联机成功后酶标仪的微孔板托架会自动弹出。4.4使用IControl软件读取数据使用I-control软件联机成功后,进入测量流程编辑界面:菜单条工具条指令栏状态栏工作流程板信息栏双击指令栏中的栏目即可在工作流程板中添加相应的测量或者动作,信息栏中会显示当前流程的信息。工具条中图标说明:新建一个测量流程;辰打开一个测量流程文件;凰保存一个测量流程;B提高当前指令的级别;日降低当前指令的级别;5tart开始执行一个测量流程;皿断开仪器;M弹出微孔板托架;厘吸入微孔板托架;辱弹出比色杯(M200);血吸入比色杯(M200)

24、;M弹出滤光片架(F200)o Infinite酶标仪的测量控制是一个近似模块化编程的流程设计,指令条的长度越长等级越高,低等级的指令从属于高等级的指令,指令流程按照自上而下的顺序执行。一个典型的测量指令流程如下:一PmlulPklc000000-00OOOOOGOO0QOO範7006005000036388OQO12111Coo 虽aJNirtXofl-BcrwubnWatMcrBMeewnerrf2arW)ip農口Rcfcrctxr上面流程是:第一个指令Plate,选一种微孔板;第二个指令是PartofPlate,选择板上的一部分进行测量;第三个指令是一个测量和测量参数。I-Control

25、的指令栏LabWarePlatePartofPlateWellCuvette(M200only)MeasurementsAbsorbsnc巳AbsorbanceScan(M200andM1000only)FluorescenceIntensityFluorescenceIntensityScan(M200andM1000only)FluorescencePolarization(F200.F500andM1000only)LuminescenceLuminescenceDualColorActionsTemperatureShakingInjectionDispenseMovePlateMov

26、eCuvette(M200only)KineticKineticCycleKineticConditionMiscellaneousCommentUserRequestWaitforTemperatureWait仃impIncubaKionLabWare是测量使用的耗材;Measurements是各种不同的测量;Actions是测量中可以做的动作,包括温度控制、震板、加液、分液、移动板和移动比色杯;Kinetic是动力学测量指令;MisceUaneous杂项,包括注释、提示、测量温度范围设定、计时器、孵育设定。具体的功能和设定请参考I-Control软件说明书或东胜创新培训课件光盘内容。根据实

27、验的要求设计出测量流程后,点击,按照提示保存测量流程文件后,仪器即开始执行测量流程,测量参数和结果将自动导出到Excel中。4.5各种测量的参数设量4.5.1选择板型使用PSte指令时,需要在下拉菜单中选择测量使用的板的类型。菜单中有预存的板型文件,文件的命名规则是:前三个字母代表板的品牌;中间的数字表示孔数;后两个字母代表板底的形状和板的颜色:f-平底板、v-V型底板、u-U型底板、t-透明板、b-黑色板、w-白色板。如COS96ft,即COSTAR公司生产的Corning96孔平底透明板。如果使用国产板,选择“COS”-Corning板即可。4.5.2光吸收测量Read%VAbsotbnc

28、e刚gnm50(ia)(WiWvelengihtMeasurementJReFeicrcfr:Mdiiple!RpeiWell|MutiptereadsperweI光吸收测要使用透明板,测量参数设置如下:在Wavelength项中填入测量波长,如果有参比波长就在Reference中填入;在Read项Numbersofflashes中填写每孔读取的次数,一般选择35次即可,结果自动给出平均值。在Settletimes中填写静置时间,即当前孔移动到检测位置后,到开始测量的间隔时间,用以抵消微孔板移动时产生的液面波动,一般来说96孔板可设置也可以不设,但建议设置,48孔和孔数更少的板必需设置静置时间

29、;在Multiplereadsperwell选项打勾,会弹出多点测量设置窗口:Size:Border:MultipleRe-adspefWell0Multiplere-adsperwellType、Size和Border分别设置多点测量的类型、测量点距离孔边缘的距离。多点测量是指在一个孔中测量多个点,适于非均相样品的测量,但是要注意过多的点数会使得检测时间变得很长。每个点的测量值都在Excel中显示。多点测量和参比波长只能选择其一。Label项中填写的是本次测量的名称,以区别同一流程中的其它测量。AbsorbanceScanReadXS/avelenglhFrorriuIo:和Bandwidt

30、h:29610i9nm35GNumbe:ofHashes:Sctllc;time:LabelNme:Labellv光吸收扫描测量,参数设置与光吸收基本相同,需要设置扫描的起始波长和结束波长,以及波长的步进值。4.5.3荧光測量:FluoieicencelntantyWavetefDgthExcidiion:20Onm(51Emission:330:nm20ReadNumberoffejhe:|25:Settlelime:0$msGdh()ManualgairrC100-incegrauonLagbmc:integrationliwc.zModeTopOBoltomMultipleReadspe

31、rWellMi/tfiereadsperv/elOQpbm日IOCalm阳詔flamwellabelMomLabel2v荧光强度测一般使用黑色板,参数设置如下:在Wavelength5J中填入测量的激发波长和发射波长;在Read项填写每孔读取的次数和静置时间;在Mode顼中选择顶部测量/底部测量,底部测量可检测贴于板底的荧光物质,如荧光标记的贴壁细胞,底部检测要使用底部透明的黑色板;在IntegMtion项中填写L速time,即激发后到检测发射光的间隔时间,一般不需设定选择为0即可,时间分辩荧光(TRF)试剂将要求设置此选项,参见具体试剂的说明书。Integrationtime即检测发射光的时

32、间,一般设置为20-40us,或参考试剂说明书;在Gain项中选择增益值,增益值对应的是检测器的工作电压,设定恰当的增益值,会得到更好的信噪比,使得样品测量值与对照测量值的差距更加明显,Gain值设定有三个选择:Manualgain:人工设定,一般设定为60-255,值越大,检测得到的数值越大;Optimal:自动优化,软件根据样品的荧光强度计算确定Gain值,Gain值会在检测结果中显示;CalculatedfromWell:用选定孔中的样品自动计算GMn值,Gain值会在检测结果中显示;Multiplereadsperwell项:田各;Label项:略。ScnSelectionOExcii

33、.ationEmiwioniScnMadeTopQBoltonEwatationWavobriglh?Frcm:BandAidlRr.295:.850:9nmEnni?ionWovclcnhFrom:Step:BaxfcMidlh:IntegialiariLManual!G-Facloi1.001;OOptimalOCobufatcdlfromwdlUncdibidtcdG-FadorCdlibi&cRtsferencevalue:Referencerange:20LabelChange.N-ime*La网1Blank,rangeCFnge.S$merreasuiementblankHideD

34、etalsIrtegralioniLaglime:IrJtcgralionilimc:荧光偏振测畳(仅F200)参数设置基本与荧光强度测量相同,关于G-Factor的设定请参考I-Control软件说明书或东胜创新培训课件光盘内容。4.5.4发光測量发光测董一般使用白色板,发光测量的参数设置如下:在Integrationtime顼填写测量时M,Infinite发光检测器是光子计数型的PMT,测量结果自动计算为1000ms的测量值,所以测量时间的改变只会影响测量结果的准确性;Attenuatiori项是光稀释选择,对于非常强的发光,可以选择OD1,这时将使用1OD的滤光片,过滤掉90%的光,防止

35、检测器被饱和,一般情况下发光测量不需要光稀释,选择None;Settletime项:同光吸收测量和荧光测量,略;Label项:略。Fikl1:Green*Integraliontime:1000msFi讪2:MagcnkMlnlra*jntnic;1000Z啲Settlethe;0Z陋LuvninDualCdkvPa-ameter3LabelsNanw1:LabellName2:Label3v双色发光测量,参数设置同发光测量,仅需分别设置品红色发光和绿色发光的测量时间。4.5.5动力学测量动力学测是指间隔一段时间对同样的样品进行相同的测量,以发现样品随时间的变化。动力学测量只需要使用动力学循环

36、(KineticCycle)和动力学条件(KineticCondition)指令即可,在动力学循环指令下加入测量指令。G)1KineticCj/cfe3Cf*dt5KmrtclrficsvalG)Nur倏皿cycle監|2二口灰“讹血展阔0皿硼:IcomooI叭刪-Tin*:诃期Time:&0000;ms在动力学循环指令中可以设置循环的次数或者循环的总时间,和动力学的间隔时间。动力学条件的作用是在动力学循环中加入一个动作(Action),如下图就是在的第三次循环中加入一个动作:KineticCondilior)3CondicnExecutecorrmandoatcycte:3=l如下图例,就是

37、在一个五次循环的光吸收动力学测量,每次测量间隔1分钟,在第二个循环中进行一次震板。KineticCycleCyclesNumberofcycles:KineticIntervalODuration:00:01:000Usekineticinterval(t)Time:00:01:00c60000:(hh:mm:ss)OTime:msKineticCondition4ConditionExecutecommandsatcycle:2v|5ShakingParameterDur-ation;LinearMode;rnrnrprnFrequency;secAmplitude;AbsorbanceWa

38、velengthReadMeasurement;450:nm(9)Reference;Settletime;5704Numberofflashes;Magellan软件操作简介51直瞬取数据启动计算机后,打开仪器电源,待自检完成后,运行Magellan软件,联机成功后,酶标仪自动弹出托架,将样品板放在托架上,A1孔位置处于左上方。Magellan软件的主界面如下图: # Starmeasurement:开始一次新的测量,有四项选择:ObtainRawDataRunStripLayout金UsePredeEinedMethodStartJavoriteObtainRawData:直接读取原始数据

39、;RunStripLayout:从存在的测量方法中拉取版面设计;UsePredefinedMethod:使用存在的测量方法;StartFavorite:使用收藏夹中的测量方法。Evaluateresults:对保存的测量结果进行分析;Create/editasampleIDlist:创建/编辑样品ID列表;Create/editamethod:创建/编辑测量方法。选择软件主菜单中的“Starmeasurement”,按右下角绿色三角形按钮继续,在弹出窗口中选择“ObtainRAWdm3”,点击右下角绿色三角形按钮继续,进入测量流程编辑窗口,编辑测量流程后点击继续,测量流程的设置参见本手册章节4

40、.4和4.5。在弹出窗口中可填写结果文件的名称,实现控制微孔板进出,打开或关闭温控等动作:点击Star按钮即可开始测量获得原始数据,继续点击Finish和Save可保存数据为WSP文件(Magellan的测量数据文件格式)。5.2主菜单按钮说明S:更改当前用户。:杂项菜单,点击后进入杂项窗口,可启动以下功能:Instrumentcontrol:仪器控制,一般不需要用户更改,点击后将弹出仪器控制窗口:InstrumentControlSetupfrService:Movements.ChangeinshumentTemperalurecontiol.Definefilterslides.Ldmp

41、7lasercontrol.Inserttransportlock.Injectojcontfol.Dispenseonly.Plategeometryeditor.Ctinri&ctMovements.|Help点击Movements按钮可以控制可移动部件的进出运动,如托架、比色杯、滤光片架;UKSncel点击Temperaturecontrol可以打开/关闭温度控制功能;点击Changeinstrument可以更改联机的仪器。Filehandling:文件操作功能;Options:选顼,从这里可更改文件保存默认文件夹位置;Useradministration用户管理;Aboutmagell

42、an:软件版本和注册信息。111:温度控制,点击此按钮将弹出温控窗口:填写好目标温度(至少比室温高5度,最高42度),点击set按钮确认输入,点On按钮即可开启控温,点击Read按钮可读取当前仪器内温度,点击Off按钮关闭控温。纭L弹出/吸入微孔板托架。EitMagellan退出Magellan软件。53创建/编辑测量方法Magellan软件可以将测量流程和数据处理方法保存成一个方法文件(mth文件),以后可直接调用方法文件测量数据,并在测量结束后自动对数据进行处理,包括数据分析和结果导出。选择软件主菜单中的“6eate/editamethod,按右下角绿色三角形回按钮继续,在弹出窗口中选择“

43、New”新建方法文件,或者“Open”打开巳有的方法文件,点击右下角绿色三角形按钮继续,进入测量流程编辑窗口。编辑测量流程后点击继续,测量流程的设置参见本手册章节4.4和4.5。 在数据处理方法定义窗口中定义样品的分布和数据处理的方法。Create/tditaMethodXUndoJSet眩Nlunu闵dJ10%DZoxnrejectQAutomateddatahsra*cdhncMFCUserpfaftpt4NixrteitarratMetresnotesC2ff.meUwd1脚|start阳qi用手HX19B71FUm.打:心加Mrtho.ENF二勺.$8:S0NEXT样品定义工具窗说明:

44、WellAssignm.样品分类列表査看各类样品的定义在选定孔中填入选择的样品分类IdentifiersDef.identif.FillselectionExp.group:1;ID-Num.17cReplicatesFinumber:Deleteselectiont-实验分组样品起始ID和排布方向样品的重复孔数和排布方向删除选定孔中存在的样品分类 5.3.1数据分析方法说明数据分析方法栏说明:板面定义定义样品浓度/稀释度增加新的数据转换方法标准曲线定义判断方法定义质控参数定义数据导出设置打印设置自动数据操作设置提示信息数字格式设置记事本MethodlayoutQPlatelayoutConc

45、.-j.Dil.-,Ref.-valuesTransformeddataAddnewtransformation.WrConcentrationsStandardcurve隐藏栏目按钮EvaluatedataCutoffdefinitionQCValidationDatahandlingDataexportPrintedreportAutomateddatahandlingMiscellaneousUserpromptsNumberformatMethodnotesn-o-%更板面定义栏标签数据转换栏浓度计算栏肉1-一数据评估栏数据操作栏杂项栏 下面分别简述各种数据处理指令的内容:板面定义:即

46、定义微孔板上的样品分布,在一块板上可定义多组样品,在数据处理时相互间不干扰;定义样品浓度/稀释度:SelectIdentifier:Unit:ngHAutoFill可在弹出窗口中选择不同类型的样品,定义它们的浓度和稀释度。在定义“ST”一标准品时可输入浓度单位,并有自动填充选项。也可以在“Cone.”下方手工输入数值,但是不可以在选择自动填充时采用手工输入的方式点击“Cone.”栏。增加新的数据转换方法:如果有“EL”一空白样品存在,软件会自动提示是否生成空白扣除,点击yes确定即可自动产生空白扣除的转换方式。点击Addnewtransformation可生产一个新的数据转换,在右侧窗口选择要

47、做数据转换的孔,在上方Inputdata栏中选择数据源,在下方仗栏中填入数据转换公式,点击对号填入即可。左侧方法栏中数据转换的方法名称可以单击后修改。BlankreductionTransformeddataMethodlayoutPlatelayoutCone.,Dil.,FXcFvolucsBlankreductionTransformation2AddnewtransformationWfConcentrations令StandardcurveQeare/edit:ms-hodInputdata:J|X|fx(x-0.1)7OBL11X1SM1.11/1ST1_41/1ra1(xo丨ST

48、J2SM1_3SM1_91/1SM1_101/1SM111 # 标准曲线定义:当填写了“ST”一标准样品浓度后,就可以点击此选顼,在弹出窗口中定义标准曲线的数据源、坐标、回归方式、扩展因子、外观等设置。设置完成后软件会自动产生一个“Conc.trmnsforme”一浓度转换栏,并生成一个浓度转换,在测量获得数据后,软件将根据标准曲线公式自动计算出样品的浓度。MethodlayoutPlatelayoutDil,Ref.-valuesTransformeddataBlankreductionTransformation2AddnewtransformationCone,transforme.Co

49、ne.TransformationlAddnewcone,transforConcentrations令StandardcurveInputdata:Singlecone,(ng)fiaBL11/1SM1_11/1SM1_91/1BST1_11/1ISM1_2I11/1JSM1_101/1ST1.21/1SM1_31/1SM1_111/1回ST1.31/1SM1_41/1SM1_121/1判断方法定义:通过设置本选项,软件可以对样品进行判断和分类显示,点击后在弹出窗口中输入数据源判断值等即可。CutoffdefinitionInputdata;Rawdata阳性解性1一一-J-BL140.3一

50、十一一AFormulainpulVarhtieOpeialorsFunciion$二CompetitweTe$tCutoffresultsselection. # 质控參数定义:通过本顼设置,可以输入测量的质控标准,测量结束后软件会自动判断测量是否达到质控标准,并给出True或False的判断结果。InputdataRawdatavValidationgroup:pTValidationConditions1BL1ec. # See:gwi_|iRdi5xedoQcilrriSpdF4SdStfihImirtrWKZugAhinibfinretRrti:e.闫FrtknMInnher*L灿13

51、关于Timer设置:在使用加液器时,可设置Timer的等待时间包括不包括分液时间:Wait(Timev| # TimerOplionsWMbme:00:00:02:叶:mm闺WaitforinfectionIgnorewait戲lastkineticcpcle选择Waitforinjection等待时间中包含分液时间;不选择此项,等待时间将在分液完成后开始计算。4两个分液指令流程示例:PhleWelltnjecbonln(ectorA,Vokjrre100.Speed:200Wait(Tirarer)Luminescence(Ratio)Luminc-S-Gcnw?(R-dtro)liniec

52、tanWTl00;00;02|hhmm;S3jAlttnualion:NONEIqedorB.Voijfre100.Speed20000:00:02(hkrrnrr鞋)Menuation:NONE4MoveFloleMoveplateau这是一个整板的发光实验的检测流程,每加一种试剂,等待反应2秒钟,开始测量发光值,最后将微孔板弹出。Plate1RaftG吃旳bGiera9GPal0b咬v|D亦|P册nihcavei1丿汁介WdT2(KirwlicCycfe20cycles3强KirwfcCoFidtem4iInjcctbnInjedoik-Vurrr:20.Speed2035”Flwufes

53、cctimInlem|RA8EMC/4bcn杆旷irm.Em:wn怦和ntfh*510nnn6II:Fluoccccnoclntcmi|Rdb)iExcilickb曲帧禹240rw.w-ekrcfrc510nm7MavPlateplaleou!8这是一个整板的荧光动力学测量,分别用380nm和340nm激发,一共20个循环,在第五个循环时每孔加入了20ul试剂。附1.3加液器的维护加液器使用一段时间后,需进行彻底的清洗以洗去沉淀和避免微生物生长。先用蒸他水或去离子水清洗(Wmsh)加液器;用Prime初始化程序将注射器中灌满70%乙醇,并静置30分钟;用70%乙醇清洗加液器;用蒸馆水或去离子水

54、清洗(W忍sh)加液器;用去离子水初始化加液器;用脱脂棉蘸取70%乙醇或异丙醇擦拭加液针。 附录2附2、NanoQuant模块使用方法附2.1NanoQuant概述NanoQuant是Tecan开发的利用Infinite200酶标仪光吸收测量功能测量微量(2ul)核酸样品的工具模块,包括NanoQuant板一块.辅助加样器个说明书一套。附2.2NanoQuant模块的使用方法打开M200酶标仪电源,运行I-contro1软件VI.5,联机。点击I-control软件界面左下角的Applications标签,进入NanoQumnt检测界面。匝CommentUserRequestCff-Waitf

55、orTemperalureinfinite200AMR5IM10StandardApplications # 选择NmoQuant检测界面左侧导航栏中的QuantifyNucleicAcid”标签,进入核酸定量检测界面。FfoteBlankingQuantifyNucle;Addlndvdjdl8lIApEdlSarrisA&tfbiMo5?u-cmcri5右侧窗口中“PSte”自动选择为NanoQuantPlate,无需更改;“Elmking”窗口中,用鼠标选择至少两个检测点,作为空白样品,空白值将取平均值,如果不同点的空白CV值大于10%,空白值无效,请清洁Nanoquant板后重新做空白

56、;也可以选择MStartBlanking,按钮上面的IndividualElanking”,这时每孔的空白值将只用于各自孔的样品。0IndividualBlankingStartBlankingBlanking12AOOBCDEFGHIndividualBlankingColorCodes:Blank:DivergingBlank:MeasurementStartBlankingSampleIDcledD点击SampleID匚药亟按钮可以输入样品的序号或名称;AbsorbanceMeasurements”中的Wavelengths”即检测波长是事先设好的,不可更改;在“Sample”的“Typ

57、e”下拉菜单中选择要检测的核酸类型。-SampleType:|dsDNA3EditSamplE. # RNAssDNAtestother.随后点击“Elmking”窗口右下角的“StartEkmking”按钮,仪器将弹出酶标板托架,将巳加好空白样品的NmoQuant板放入托架,正确的放置位置是NanoQuant板上的Tecan商标处于右下角,点击弹出窗口上的“确定”按钮,即开始空白样品的测量。空白测量完毕后,测量窗口变色,NanoQuant板弹出,此时去除空白样品,加入待测样品,将NanoQumnt板放于酶标板托架上。用鼠标选择样品所在的点,点击菜单栏上的“Start”图标开始样品测量如果需要

58、重新定义空白,点击“Blanking”窗口右下角的RepeatBlanking按钮即可返回先前的定义空白样品界面。IndividualBlankingColorCodes:Blank:Selected:Unused:DivergingBlank:IMeasurement:RepeatBlankingSampleID # #测量结束,结果将自动导入Excel,随后I-control弹出窗口询问是否继续测定,如继续测定点击“确定”即可,但此时不可以改变样品的位置;如需要改变样品位置,点击“取消”,然后按照上述步骤5的方式进行操作。空白样品定义一次即可,在不关闭I-control时可一直使用。“LabelingEfficiency”测量步骤与上述相同,只需在“AbsorbanceMeasurements”中正确选择Markers”的种类。 #noQuanrMeasurements久LabefengEffKxnc)i*QudyHuckcAcril-LdbelrigEffiCTercyBUrikhj11rriMcUsIBlar

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