检验主管技师-临床血液学2021全1、讲义

1、一、一期止血缺陷筛查试验二、二期止血缺陷筛查试验三、壁检验四、血小板检验五、凝血因子的检测六、抗凝物质测定七、病理性抗凝物检测八、纤溶活性测定九、血液流变学检测一、一期止血缺陷筛查试验1.时间（bleeding time，BT）（1）原理：测定在皮肤受特定条件外伤后，自然停止所需的时间即为时间。BT 反映了毛细与血小板的相互作用，包括内皮下组织与血小板黏附（通过 vWF 的作用）、血小板的和等反应，以及 PGI2 与 TXA2 的动态平衡。（2）临床意义：时间延长见于血小板减少症；性血小板功能异常，如血小板无力症、血小板池病；获得性血小板功能异常，如尿毒症、药物影响、异常蛋白血症、骨髓增生性疾

2、病；性血友病；遗传性周围结缔组织病如艾-唐综合征。时间缩短见于某些严重的状态和血栓性疾病。2.束臂试验（tourniquet test 或 capillary fragility test，CFT）（1）原理：通过前臂局部加压，使静脉血流受阻，给毛细以负荷，观察前臂皮肤一定范围内新出现的点数目，来估计壁的完整性及其脆性。（2）临床意义：新点的数目超过正常为阳性，见于：壁结构和（或）功能缺陷，如遗传性性毛细扩张症、过敏性紫癜、单纯性紫癜及其他性紫癜。血小板的量和（或）质异常，如性和继发性血小板减少症、血小板增多症、性）和获得性血小板功能缺陷症。性血友病（vWD）。性（遗传二、二期止血缺陷筛查试验

3、1.凝血酶原时间测定（prothrombime，PT）（1）原理：在受检血浆中加入过量的组织凝血活酶（人脑、兔脑、胎盘及肺组织等制品的浸出液）和钙离子，使凝血酶原变为凝血酶，后者使蛋白原转变为蛋白。观察血浆凝固所需时间即凝血酶原时间。该试验是反映外源凝血系统最常用的筛选试验。（2）参考值及方式直接患者及正常对照的 PT 秒数，参考值为 1113s。超过正常 3s 为异常。凝血酶原时间比值（prothrombime ratio，PTR）=受检者 PT（s）/正常对照 PT（s）。宜用多份正常人血浆 PT 的几何均数，或其混合血浆的 PT，参考值为 10.15。国际标准化比值（ernational

4、 normalized ratio，INR），INR=PTRISI。ISI：所用组织活酶的国际敏感度指数（ernational sensitivity index，ISI）（3）临床意义PT 延长见于遗传性外源凝血系统的因子、和蛋白原减低，但均很少见。肝脏疾病：由于外源性凝血因子主要在肝脏，因而肝脏疾病时，PT 延长。维生素 K 缺乏症：胆石症、胆道肿瘤、慢性肠炎、偏食、27 月龄的新生儿以及长期服用广谱抗生素的患者等血液循环中抗凝物质增加，如肝素或 FDP 增多等。DIC 和有较强的抗凝能力，故也使 PT 延长。性纤溶时，由于 FDP 生成增加，FDP用于香豆素类等口服抗凝剂的，一般认为以维

5、持 PT 值在参考值的 2 倍左右（1.32.5 倍）即 2530s，或 PTR 为 1.31.5（最大不超过 2），INR 以 2.03.0 为宜。PT 缩短见于口服、状态和血栓性疾病等。（4）注意事项：HCT 影响：不同患者 HCT 不同，导致血浆量多少不一，因此游离的 Ca2浓度不同，从而导致 PT 结果异常。对于 HCT35%和55%的患者，采血量或抗凝剂用量按下述公式计算。采血量（ml）=抗凝剂用量（ml）9（1-0.45）/（1-HCT）。血浆标本离心：相对离心力 1500g、离心 10 分钟乏血小板血浆，若血浆中富含有血小板，PT 将假性缩短。溶血、脂血标本：溶血时由于红细胞中有

6、促凝成分，可使 PT 假性缩短；脂血干扰某些仪器检测过程中的浊度变化，因此会引起 PT 检测结果的异常。2.活化部分凝血活酶时间测定（activated partial thromboplastime，APTT）（1）原理：37条件下，以白陶土激活因子和，以脑磷脂（部分凝血活酶）代替血小板第三因子，在 Ca2参与下，观察乏血小板血浆凝固所需的时间，即为活化部分凝血活酶时间，是内源凝血系统较敏感和常用的筛选试验。（3）临床意义对内源凝血途径因子（、）缺乏较 CT 敏感（血小板异常不影响 APTT），能检出：C小于 25%的轻型血友病。对凝血酶原、病。APTT 及纠正试验结果判定蛋白原缺乏则不够敏

7、感，故 APTT 延长的最常见疾病为血友在使用肝素治疗时，多用 APTT 监测药物用量，一般以维持结果为基础值的 2 倍左右（1.53.0倍）为宜（75100s）。性血友病：由于患者 vWF 缺陷，使 F不稳定，导致 F：C 活性减低，故 APTT 延长。异常抗凝物增多：F抑制物，狼疮抗凝物（LAC）。纤溶：性和继发性纤溶（如 DIC），产生大量的 FDP，使 APTT 延长。（4）注意事项：同 PT。三、壁检验1.性血友病因子检测（vWF）：含量测定、功能分析，。所含因子结果因子因子被纠正不被纠正正常新鲜血浆因子或缺乏病理性循环抗凝物质正常因子缺乏正常 BaSO4吸附血浆因子缺乏（1）原理v

8、WF 抗原测定：可利用免疫电泳法、ELISA 或胶乳凝集散射比浊法进行准确定量。vWF 瑞霉素辅因子活性检测：在瑞霉素存在的条件下，vWF 通过与血小板膜 GPb-相互作用使正常血小板发生凝集。凝集的强度与被检血浆中 vWF 的含量和结构有关。（2）临床意义vWF 减低：主要用于 vWD 的和分型。vWF 增高：vWF 是一种急性时相反应蛋白，很多情况下都增高，常见于血栓性疾病（如心肌梗死等）、肾小球疾病、DM、妊高征及大手术后。2.血浆 6-酮-素 F1（6-Keto-PGF1）检测【临床意义】血浆 6-酮-PGF1减低：见于血栓性疾病，如急性心肌梗死、心绞痛、脑病变、动脉粥样硬化、肿瘤转移

9、、肾小球病变、周围血栓形成及血栓性血小板减少性紫癜等。3.血浆血栓调节蛋白（thrombomodulin antigen，TM：Ag）的检测【临床意义】血浆 TM 检测是了解内皮细胞损伤的最好的指标。血浆 TM 水平增高见于SLE、DIC、急性心肌梗死、TTP、HUS、脑血栓、白血病等。、四、血小板检验1.血小板生存时间（plaet survival time，PST）原理：丙二醛（MDA）法或 TXB2 法临床意义：血小板生存期缩短，见于：血小板破坏增多性疾病：如性血小板减少性紫癜、同种和药物免疫性血小板减少性紫癜、脾功能、系统性红斑狼疮；血小板消耗过多性疾病：如 DIC 等；血栓性疾病：如

10、心肌梗死、心绞痛等。2.血小板相关免疫球蛋白（plaet assoted immun- oglobulin，PAIg）检测原理：PAIg 包括 PAIgG、PAIgM、PAIgA 和 PAC3。临床意义PAIg 增高：见于 ITP，90%以上 ITP 患者的 PAIgG 增高，若同时测定 PAIgM、PAIgA 和 PAC3，其灵敏度可高达 100%。但其特异性较低，PAIg 只能作为筛查指标。观察病情：经治疗后，ITP 患者的 PAIg 水平下降；复发后，则又可升高。3.血小板试验（plaet aggregation test，PAgT）血小板曲线与血小板状态对应示意图（2）临床意义1）PA

11、gT 增高：反映血小板功能增强。见于状态和（或）血栓前状态和血栓性疾病，如心肌梗死、心绞痛等。2）PAgT 减低：反映血小板功能减低。见于获得性血小板功能减低。遗传性血小板功能缺陷。血小板无力症（Glanzmann 病），瑞霉素可诱导凝集。巨大血小板综合征：瑞霉素诱导不凝集。4.血小板反应产物测定（1）原理：-血小板球蛋白（-thromboglobulin，-TG）和血小板第四因子（plaet factor4，PF4）是血小板颗粒中特有的蛋白。是血小板活化的重要指标。二者的检测多采用 ELISA 法。（2）临床意义1）增高：反映血小板被激活及其反应，见于血栓前状态和（或）血栓性疾病，等。2）减

12、低：见于性或获得性池病（颗粒缺陷症）。5.血浆血栓烷 B2（thromboxane B2，TXB2）测定【临床意义】1）增高：见于血栓前状态和血栓性疾病。2）减低：见于环氧酶或 TX唑酮、咪唑及其衍生物等。酶缺乏症、服用抑制环氧酶或 TX酶的药物如阿司匹林、苯磺（3）注意事项：注意避免血小板体外被活化，否则导致假阳性。6.血小板膜糖蛋白（pla【临床意义】1）血小板功能缺陷：et membrane glycoprotein，GP）测定GPb 缺乏，见于巨大血小板综合征；GPb/a 缺乏，见于血小板无力症；活化后 CD62P 表达减低或缺乏，见于血小板池缺陷病。2）血栓前或血栓性疾病：CD62P

13、、CD63 表达增加是血小板活化的特异性分子标志物。7.血块收缩试验（clot retraction test，CRT）（1）原理：血小板伪足前端连接到蛋白束上。当伪足向心性收缩，使蛋白网眼缩小，测定析清的体积可反映血小板血块收缩能力。（2）临床意义1）减低：见于性血小板减少性紫癜、血小板增多症、血小板无力症、红细胞增多症、低（无）蛋白原血症、多发性骨髓瘤、性巨球蛋白血症等。2）增高：见于性（遗传性）因子缺乏症等。五、凝血因子的检测1.血浆蛋白原（fibrinogen，FIB）含量测定（1）原理：FIB 检测有凝血酶凝固法（Clauss 法）、比浊法（PT 衍生法）以及免疫学的方法等。降低见于

14、性低或无 FIB 血症、遗传性 FIB 异常、弥散性重症肝炎和肝硬化等。2.血浆因子、和的促凝活性测定内凝血（DIC）、性纤溶症、原理：一期法是将待测血浆分别与乏 F、F、F和 F基质血浆混合，进行 APTT 测定。将正常人混合血浆与乏因子血浆混合，测定 APTT，作出标准曲线。从各自的标准曲线中分别计算出受检血浆中 F：C、F：C、F：C 和 F：C 相当于正常人的百分率（%）。临床意义1）增高：主要见于血栓前状态和血栓性疾病。2）减低：F：C 减低见于血友病 A、性血友病、血中存在因子抗体、DIC；F：C 减低见于血友病 B、肝脏病、维生素 K 缺乏症、DIC、口服抗凝药物；F：C 减低见

15、于因子缺乏症、肝脏疾病、DIC 等；F：C 减低见于性因子缺乏症、肝脏疾病、DIC 和某些血栓性疾病等。3.血浆因子、和的促凝活性测定原理：同上，不同的是做 PT 测定。临床意义增高：见于血栓前状态和血栓性疾病。减低：见于维生素 K 缺乏症（FV 除外）、肝脏疾病、DIC、口服抗凝剂和血中存在相应的抑制物。性因子、和缺乏症较罕见。4.血浆因子定性试验原理：含因子的血浆钙化凝固后不再溶于尿素溶液中，而缺乏的血浆聚合物则可溶于 5mol/L 尿素溶液中。临床意义：本试验简单、可靠，是十分有用的过筛试验。若蛋白在 24h 内，尤其是 2h 内完全溶解，表示因子缺乏，见于性因子缺乏或获得性因子缺乏。六

16、、抗凝物质测定1.抗凝血酶（antithrombin activity，AT-：A）测定活性、抗原（AT：Ag）测定【临床意义】增高见于血友病、白血病和再生性贫血等的急性期以及口服抗凝药物治疗过程中。减低见于合征等。性和获得性 AT-缺乏症，后者见于血栓前状态、血栓性疾病和肝脏疾病、肾病综2.血浆蛋白 C（protein C，PC）测定（1）血浆蛋白 C 活性、抗原测定【临床意义】减低见于：性 PC 缺陷：根据 PC：A 和 PC：Ag 可分为型（PC：Ag 与 PC：A均减低）和（PC：Ag 正常而 PC：A 减低）；获得性 PC 缺陷：DIC、肝功能不全、手术后、口服双香豆素抗凝剂、呼吸窘

17、迫综合征等。3.血浆蛋白 S 测定（1）血浆总蛋白 S、游离蛋白 S 测定【临床意义】减低见于性和获得性 PS 缺陷症，后者见于肝脏疾病、口服抗凝药物等。七、病理性抗凝物检测1.狼疮抗凝物质（lupusoagulants，LAC）测定（1）筛检试验原理：在脑磷脂和激活剂存在的条件下，检测血浆凝固时间（即 APTT）。若被检血浆中有狼疮抗凝物质存在，则血浆凝固时间（APTT）延长。临床意义：筛检试验的血浆凝固时间延长（筛检试验阳性）见于有狼疮抗凝物质存在的患者、性凝血因子缺乏、口服抗凝剂、肝素治疗以及 DIC 等。（2）确诊试验1）原理：筛检是阳性的血浆，若属于有狼疮抗凝物质存在者，则在加入血小

18、板溶解物后，延长的APTT 被纠正。2）结果判断：筛选试验测定值/确诊试验测定值=0.81.2。若筛查试验和确诊试验的凝固时间都延长，且比值在正常范围内，提示被检血浆中无狼疮抗凝物存在，可能有其他异常抗凝物存在；若筛查试验的凝固时间延长，而确诊试验的凝固时间缩短（被纠正），提示有狼疮抗凝物存在。3）临床意义：狼疮抗凝物质存在见于系统性红斑狼疮（SLE）、自发性小板减少症等。、多发性血栓形成和血4）临床评价：LAC 的检测也可利用改良的 Rul 蛇毒稀释试验进行检测，该试验不受 F及 F异常的影响，受检血浆中肝素含量1.0U/ml 对结果也无影响。2.凝血因子抑制物检测【临床意义】阳性见于反复输

19、血、接受抗血友病球蛋白治疗的血友病 A 患者、SLE、类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、妊娠、DM、结节病等。3.血浆游离肝素时间（甲苯胺蓝纠正试验）（1）原理1）甲苯胺蓝纠正试验：如果待测血浆的凝血酶时间（TT）延长，加入一定量甲苯胺蓝后，TT 明显缩短或恢复正常，提示血浆中肝素或类肝素物质增多。2）血浆肝素定量：在待测血浆中加入过量的抗凝血酶（AT）和 Fa，普通肝素又称未分级肝素（UFH）和低分子量肝素（LMWH）均可与 AT 形成复合物并灭活 Fa，剩余的 Fa 水解发色底物（S-2765），出黄色对胺，颜色的深浅与血浆中 UFH 或 LMWH 浓度呈负相关。（2）临床意义：血液中肝素增多

20、主要见于普通肝素抗凝治疗及体外循环、血液透析等。血浆中肝素浓度是监测普通肝素用量的最好方法，肝素浓度一般维持在 0.20.4U/ml 时，可取得较好的疗效。肝素样抗凝物增多见于严重肝病、系统性红斑狼疮、流行性热、过敏性休克等。（3）结果判读：加入甲苯胺蓝后，比未加前 TT 缩短 5s 以上，提示肝素或类肝素物质增多，血浆肝素浓度 0.0010.009U/ml。八、纤溶活性测定1.凝血酶时间（thrombime，TT）及甲苯胺蓝纠正试验（1）原理：受检血浆中加入“标准化”凝血酶溶液，测定开始出现纠正试验：甲苯胺蓝可纠正肝素的抗凝作用。蛋白丝所需的时间。（2）临床意义：受检 TT 值延长超过正常对

21、照 3 秒为延长，见于低（无）蛋白原血症；血中FDP 增高（DIC）；血中有肝素和类肝素物质存在（如肝素治疗中、SLE 和肝脏疾病等）。2.血浆纤溶酶原测定（1）血浆纤溶酶原活性（plasminogen activity，PLG：A）测定，血浆纤溶酶原抗原（plasminogen antigen，PLG：Ag）测定【临床意义】增高表示纤溶活性减低，见于血栓前状态和血栓性疾病。减低表示纤溶活性增高，见于性纤溶、继发性纤溶和性 PLG 缺乏症。3.血浆组织纤溶酶原活化剂测定（1）血浆组织纤溶酶原活化剂活性（ti原测定2）临床意义e plasminogen activator activity，t-

22、PA：A），抗增高：表明纤溶活性，见于性纤溶症、继发性纤溶症如 DIC 等。减低：表明纤溶活性减弱，见于血栓前状态和血栓性疾病，如动脉血栓形成、深静脉血栓形成、高脂血症、口服、缺血性中风等。血浆纤溶酶原活化抑制物测定【临床意义】增高见于血栓前状态和血栓性疾病。减低见于血浆2 纤溶酶抑制物测定性和继发性纤溶症。（1）原理：血浆2 纤溶酶抑制物活性（2色底物法。plasmin inhibitoractivity，2PI：A）检测，发（2）临床意义：增高见于静脉和动脉血栓形成、分娩后等。减低见于肝病、DIC、手术后、性2PI 缺乏症。6.血浆鱼精蛋白副凝固（plasma protamine para

23、coagulation test，3P）试验（1）原理：受检血浆中加入硫酸鱼精蛋白溶液，如果血浆中存在可溶性蛋白单体-蛋白降解产物复合物，则鱼精蛋白使其解离释出物，此为阳性反应结果。蛋白单体。蛋白单体自行聚肉眼可见的状（2）结果判断：正常人为。（3）临床意义：阳性见于 DIC 的早、中期，但在、上消化道、外手术后、败血症、肾小球疾工、分娩等也可出现假阳性。见于正常人、晚期 DIC 和性纤溶症。7.蛋白降解产物fibrin（ogen）degradation products，FDP测定原理：胶乳凝集法临床意义：FDP 增高见于性纤溶症、DIC、8.血浆 D-二聚体（D-dimer，D-D）测定原

24、理：胶乳凝集法临床意义：D-二聚体在继发性纤溶症为阳性或增高，而、急性早幼粒细胞白血病等。性纤溶症为或不升高，此是两者鉴别的重要指标。对于临的筛检实验，APTT 和 PT 都正常多见于A.内源性凝血途径缺陷引起的 B.外源性凝血途径缺陷引起的C.共同凝血途径缺陷引起的性疾病性疾病性疾病D.各种血栓与止血改变处于代偿状态E.血液循环中存在抗凝物质正确DAPTT 是内源凝血系统较敏感和常用的筛选试验，PT 是外源凝血系统较敏感和常用的筛选试验，血液循环中存在抗凝物质两者均延长。关于 FDP 和 D-二聚体测定的叙述，下列哪项是正确的A.FDP 是指蛋白原的降解产物，不包括蛋白的降解产物B.FDP 增高