生物技术制药：抗体偶联物的抗肿瘤临床研究进展

1、抗体偶联物的抗肿瘤临床研究进展目录抗体技术的发展趋势1抗体偶联物2力达霉素免疫偶联物3光免疫偶联4前景与展望5抗体技术的发展趋势技术新颖，成熟自1986年第一个抗体药物上市以来已有20多年发展历史全人源化抗体已经可以制备。发展速度快 1996年开始进入快速发展的轨道进入临床试验的药物中抗体药物的增长率(21%)远大于小分子药物增长率(仅为5%)难以形成垄断同靶点类似抗体药物可以同时进入市场抗体技术的发展趋势A抗体根据其人源化程度可分为：鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体和完全人抗体。B抗体片段Fab, scFv, diabody, triabody, minibody等C抗体偶联物由抗体或抗体片段

2、与“弹头”药物组成。D抗体融合蛋白由抗体片段和活性蛋白组成。抗体偶联物抗体弹头药物抗体偶联物抗体放射性核素放射免疫偶联物化疗药物化学免疫偶联物毒素免疫毒素抗体偶联物放射免疫偶联物通过抗体特异性结合肿瘤细胞相关抗原, 将产生高能射线的放射性核素靶向到肿瘤细胞 , 实现对肿瘤的近距离内照射治疗。化学免疫偶联物通过羟基、巯基、氨基等, 将治疗药物与单抗相连接而组成化学免疫偶联物, 避免了药物对其他正常组织的毒害作用, 选择性地发挥治疗作用。免疫毒素免疫毒素是用化学方法或基因工程方法将肿瘤选择性单抗与经修饰的多肽毒素共价连接而成的肿瘤治疗药物。抗体偶联物抗体偶联物在荷瘤动物中显示明显的抗肿瘤效果，利用

3、抗体特异性识别肿瘤抗原作用，使效应分子有效地到达肿瘤部位，选择性杀伤肿瘤细胞。可减轻效应分子的毒副作用，延长动物生存期。在人类肿瘤治疗中，对白血病和淋巴瘤有一定疗效。举例-力达霉素免疫偶联物力达霉素（Lidamycin,LDM）为110个氨基酸的蛋白，蛋白结果无抗肿瘤活性，主要活性部位为发色团，蛋白主要起保护发色团的作用。比阿霉素、丝裂霉素等常规化疗药物强10000倍以上，是迄今发现的抗肿瘤作用最强的肽类抗生素。举例-力达霉素免疫偶联物体内实验结果表明，LDM对动物移植性肿瘤有显著疗效。由于LDM具有高度抗肿瘤作用以及相对分子质量比植物或细菌来源的毒素小，是构建高效、小型化单抗导向药物较为理想

4、的“弹头”药物。免疫偶联物的制备以LDM与大鼠抗人肝癌细胞单抗3A5的Fab片段的偶联物为例：单抗3A5为IgG1型抗体。ELISA检测表明，单抗3A5对人肝癌BEL-7402等细胞系以及对小鼠肝癌H22和结肠癌C26细胞呈阳性反应，与小鼠正常肝细胞呈阴性反应。免疫偶联物的制备单抗3A5Fab片段的制备:单抗3A5以柠檬酸缓冲液调整浓度加胃蛋白酶37C反应6h 反应液以Sephadex G-150纯化收集F(ab)2F(ab)2以DTT还原1hPD-10柱用磷酸盐缓冲液除去过量DTT收集巯基化的Fab立即与LDM偶联免疫偶联物的制备强化偶联物的制备：Fab片段与LDM的直接偶联物LDM以PB缓

5、冲液溶解，加过量的MBS 室温避光反应40minPD-10柱除去过量MBS，收集第一峰，立即与巯基化的Fab片段混合室温避光反应过夜，以NEM终止反应，反应液经Sephadex G-75纯化收集既有抗体活性、又有细胞毒作用的洗脱峰，即为Fab片段与LDM的直接偶联物免疫偶联物的制备强化偶联物的制备：FabLDM强化偶联物。将 Fab LDM直接偶联物加入倍量的LDM发色团,混合过夜，以Sephadex G-25柱除去过量发色团,得强化偶联物Fab LDM.光免疫偶联光免疫疗法(PIT)是近20年来在光动力疗法(PDT)基础上发展起来的一种具有选择性杀死病变组织的治疗方法。光动力疗法是通过先给予

6、机体一定量的光敏药物,待光敏剂在肿瘤中富集后,利用特定波长的可见光激活光敏剂,产生的单线态氧杀死肿瘤细胞,从而达到治疗目的。光免疫偶联在这一过程中起着关键作用的光敏剂,已从血卟啉(HpD)为主的第一代光敏剂,发展到以二氢卟吩、酞菁等为代表的组分单一和性能良好的第二代光敏剂。光免疫偶联单克隆抗体(MAb)是实现选择性运送光敏剂到肿瘤部位的最有潜力的运输分子。它与相应的抗原具有特异性结合的特性,因而有高度的定向特异性。目前,利用单抗作为载体把药物选择性地运送到肿瘤部位的治疗方法已成为肿瘤定向治疗的一种重要方式。光免疫疗法就是将特异性单抗与光敏剂进行交联形成光免疫偶联物,通过抗体抗原的结合特异性将光

7、敏剂定向于肿瘤细胞的新疗法。前景与展望近20年来,免疫偶联药物的最大进步就是降低了人对抗体蛋白的免疫反应同时提高了细胞毒药物对肿瘤部位选择性。并且在早期的临床研究中对于如何系统性的减少或消除免疫偶联药物的毒副作用也取得了很大进展。但是免疫偶联药物目前仍然存在许多问题,比如大部分免疫偶联药物在临床试验中都显示出了缺乏显著地抗肿瘤活性的弊端。因此下一步需要解决问题就是如何提高免疫偶联药物对于实体肿瘤的渗透性,使其能够深入肿瘤组织内部,从而提高抗肿瘤活性。参考文献1黄蕾,赵福群,黄新,张复实.光免疫偶联物的研究进展J.化学进展,2007,04:527-534.2潘萌,孔蕴,陈畅,顾黎.单克隆抗体药物的研究进展J.中国生化药物杂志,2008,01:62-64.3张弢,陈卫,浦迪,张娟,王旻.抗体药物研究进展与趋势J.中国新药杂志,2008,09:713-718.4董增祥,王清清,宋海峰.治疗性单克隆抗体的研究进展及其免疫偶联物的抗肿瘤应用J.中国新药杂志,2008,15:1286-1290.5刘小云,甄永苏.力达霉素构建的小型化单克隆抗体免疫偶联物的抗肿瘤