新版文件培养基配制和灭菌方法验证

1、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案目录1、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证计划2、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证小组3、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案4、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证培训5、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证附属6、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证7、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证合格硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证计划根据我公司认证小组的要求及验证的安排，对硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法进行验证，具体安排如下：一、年月日年月日，制定验证方案，由硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证小组组长负责起草。二、年

2、月日年月日，验证方案、修改、审批和培训。三、年月日年月日，验证工作实施。四、年月日年月日，根据验证情况与，书写验证。五、年月日年月日，验证审核批准，合格证。硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证小组组长： 成员：一、 目的通过验证验证所采用的硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法，适合于我公司硫乙醇酸盐流体培养基的，为质量控制试验提供优质培养基。并培养基配制和灭菌的操作方法，为培养基配制和灭菌程序化。二、 适用范围提供正确的操作方法，使培养基配制和灭菌标准化、本方案适用于本公司硫乙醇酸盐流体培养基的配制和灭菌方法的验证。三、 内容1. 概述培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培

3、养基贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。方法、使用商品化脱水配制，如质量/体积、培养基培养基时，应严格按照培养基厂商提供的使用说明、条件、灭菌条件和操作步骤等。培养基若采用不适当的加热和灭菌条件，有可能引起颜色变化、降低、的改变。因此，培养基应采用验证的灭菌程序灭菌，培养基灭菌方法和条件，应通过适用性检查试验进行验证。此外，对高压灭菌器的蒸汽循环系统也要加以验证，以保证在一定的装载方式下的正常热分布。温度缓慢上升的高压灭菌器可能导致培养基的过热，过度灭菌可能会破坏绝大多数的细菌和真菌培养基促生长的质量。灭菌器中的培养基的容积和装载方式也将影响加热的速度。因此，应根据灭菌培养基的特性，

4、进行全面的灭菌程序验证。根据培养基的特性，按制定的方法进行配制和灭菌，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行培养基的配制和灭菌，若不符合，重新制定方案，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。2. 验证项目及认可标准验证内容验证项目验证标准配制灭菌前的7.2-7.4灭菌灭菌温度121灭菌时间15 分钟灭菌效果（F0 值）12灭菌后值6.9-7.3灭菌后外观性状符合规定适用性检查灵敏度检查符合规定无菌性检查符合规定连续验证 3 次配制的硫乙醇酸盐流体培养基。验证依据3.1. SN/T1538.1-2005 培养基制定指南药品生产验证指南（2003 版）（国家食品药品

5、监督管理局）药品生产质量管理指南（2010 版）3.4. 中民药典（2010 年版二部）3.5. 中国药品检验标准操作规程（2010 年版）验证方法与内容实验准备器具：电磁炉（最大功率 2000W）、大烧杯（2000ml）、不锈钢锅、玻璃棒、25250ml试管、硅胶塞、细绳、牛皮纸、分析天平、药匙、量筒（100ml、1000ml）等。设备4.1.3. 培养基及试剂名称生产厂家批号纯化水硫乙醇酸盐流体培养基营养肉汤培养基营养琼脂培养基氢氧化钠稀盐酸名称生产厂家型号校验情况生化培养箱电热恒温培养箱自动台式灭菌器电子天平数字酸度计生物安全柜超净工作台有效期验证保存三周外观性状符合规定灵敏度检查符合规

6、定无菌性检查符合规定4.1.4. 验证用菌株来源于省药品检验所验证内容执行标准a. 配制容器及配套器具的严格按照玻璃器皿操作规程执行。b. 培养基的配制严格按照培养基管理规程执行。c. 自动台式灭菌器严格按照TMQ.R-3870 型台式灭菌器使用保养操作规程执行.d. 取同一批硫乙醇酸盐流体干粉培养基配制三批进行以下验证。4.2.2. 配制灭菌过程a. 称量取硫乙醇酸盐流体干粉培养基 29.25 克,加纯化水 1000ml,加热煮沸使其完全溶解。每次按照此处方量配制 8547ml。b. 灭菌前的值测定取已配制好的硫乙醇酸盐流体培养基 100ml，放冷至 25调节值至 7.2-7.4 范围内。以

7、此比例来调节剩下的培养基的值。c. 分装将已调节好值的硫乙醇酸盐流体培养基分装至 25250ml 试管中，分装的管数为 190200 管范围，用牛皮纸按 40 管/捆的方式包扎结实。其中一管只装约20ml，以备灭菌后最终值测定。d. 灭菌器中的培养基的数量及装载方式（满载）将分装好的 5 捆（40 管/捆）培养基试管置于灭菌器中，按下图A、B、C、D、 5 点放置。EABC灭菌器柜门验证菌株菌株代数培养基培养温度培养时间（小时）大肠金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉菌嗜热脂肪芽胞菌（F012）DE指示菌的放置：将指示剂嗜热脂肪芽孢菌（菌浓度：1.69106cfu/支）5 支各放入5 捆

8、培养基中间的其中一支试管，同时将已菌培养基试管内，开始灭菌。的 5 支校正好的留点温度计6 支待灭将已装载好的硫乙醇酸盐流体培养基在 121条件下灭菌 15 分钟。灭菌结束后记录各留点温度计点温度。同时取出 5灭菌嗜热脂肪芽孢菌，直接置 5660培养 2448 小时，另取一支灭菌的嗜热脂肪芽孢菌指示剂一起培养，作为阳性对照。根据颜色判断灭菌效果，培养后全部保持紫色灭菌合格。若由紫色变为黄色为不合格。对照管应由紫色变为黄色为该指示剂有效。e. 灭菌后的值的测定取 20ml 管已灭菌的硫乙醇酸盐流体培养基，放冷至 25测定值，应在 6.9-7.3 范围内。f. 外观性状灭菌后培养基应对其外观性状仔

9、细检查，如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。中培养基发生颜色变化、浑浊；固体培养基表面产生裂缝或涟漪等异常现象，不符合使用规定时，应停止使用，重新进行配制和灭菌程序验证。硫乙醇酸盐流体培养基的适用性检查无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。无菌性检查每批培养基随机取 5 支（瓶），培养 14 天，应无菌生长。灵敏度检查菌液接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，

10、3035培养 1824 小时；上述培养物用 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml含菌数小于 100cfu（菌落形成） 的菌悬液。菌液内使用。后若在室温下放置，应在 2 小时内使用，若保存在 28，可在 24 小时培养基接种取每管装量为 12ml 的硫乙醇酸盐流体培养基 9 支，分别接种小于100cfu 的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各 2 支，另 1 支不接种作为空白对照，培养三天，逐日观察结果。结果判断空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。组织实施验证机构的组成5.2. 公司验证，负责所有验证工作的和组织、审批验证方案和验证、发

11、放验证。5.3. 硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证工作小组，负责该验证项目的验证方案起草、实施、组织与协调实施，负责验证样品检测，完成各项果进行评定、完成验证。，根据检验和验证结四、 附件及相关表格文件部门部门职责责任人工作划分质量部方案起草、实施、书写操作实施质量部取样、检验、出操作实施验证方案审定、批准、实施、验证合格证方案审核方案批准硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证文件编码：项目姓 名签 名日期起草审核审核批准生效日期年份一、 验证概述培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。方法、中民和灭菌程序行一次。药典2

12、010 年版二部规定：在中，若采用已验证的配置培养基且过程受控，那么同一批脱水培养基的适用性检查试验可只进本公司采用的培养基均是三药科技开发公司生产的市售脱水培养基。为规范生测实验在配制培养基时标准化、程序化并符合中民药典2010 年版二部规定，特对培养基的配制程序进行验证。验证组织与实施验证小组成员及职责分工1.2. 本验证由质量部负责并由相关根据硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案所规定的方法与步骤实施。2. 实施时间为：年月日年月日。二、 各项目验证结论1. 灭菌前后值日期：年月日2. 外观性状日期年 月日年月日结果判定配制批号灭菌后保存三周后配制批号灭菌前值灭菌后值结果判定部门部

13、门职责责任人工作划分质量部方案起草、实施、书写操作实施质量部取样、检验、出操作实施验证方案审定、批准、实施、验证合格证方案审核方案批准3. 留点温度计温度日期：年月日4. 指示剂培养结果日期：年月日灭菌后培养基无菌性检查配制批号：日期：年月日5.2. 配制批号：日期：年月日5.3. 配制批号：日期：年月日天数第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天结果判定天数第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天结果判定天数第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天

14、第13天第14天结果判定配制批号灭菌后指示剂颜色结果判定ABCDEABCDEABCDE阳性对照配制批号灭菌后温度结果判定ABCDEABCDEABCDE6. 灭菌后培养基灵敏度检查6.1. 菌液计数结果日期：年月日6.2. 培养基灵敏度检查结果日期：年月日6.3. 培养基灵敏度检查结果日期：年月日6.4. 培养基灵敏度检查结果日期：年月日配制批号检查项目第一天第二天第三天结果判定对照管金黄色葡萄球菌管配制批号检查项目第一天第二天第三天结果判定对照管金黄色葡萄球菌管铜绿假单胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢杆菌管配制批号检查项目第一天第二天第三天结果判定对照管金黄色葡萄球菌管铜绿假单胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢

15、杆菌管指示菌名称菌液浓度（cfu/ml）标准浓度平板 1平板 2平均菌落数金黄色葡萄球菌 CMCC(B) 26 003100铜绿假单胞菌 CMCC(B) 10 104生孢梭菌 CMCC(B) 64 941枯草芽孢杆菌 CMCC(B) 63 501保存三周后培养基无菌性检查培养基无菌性检查结果配制批号：日期：年月日7.2. 培养基无菌性检查结果配制批号：日期：年月日7.3. 培养基无菌性检查结果配制批号：日期：年月日8. 保存三周后培养基灵敏度检查8.1. 菌液计数结果日期：年月日指示菌名称菌液浓度（cfu/ml）标准浓度平板 1平板 2平均菌落数天数第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第

16、8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天结果判定天数第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天结果判定天数第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天结果判定铜绿假单胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢杆菌管8.2. 保存三周后培养基灵敏度检查结果日期：年月日8.3. 保存三周后培养基灵敏度检查结果日期：年月日8.4. 保存三周后培养基灵敏度检查结果日期：年月日三、 建议、结果分析和验证总结1. 建议1.1. 加强生测室检验的操作技能培训，使培养基配制和灭菌过程标准化，程序化。1.2. 当硫乙醇酸盐流体培养基在日常无菌检测时，应对其外观性状进行检查，不符配制批号检查项目第一天第二天第三天结果判定对照管金黄色葡萄球菌管铜绿假单胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢杆菌管配制批号检查项目第一天第二天第三天结果判定对照管金黄色葡萄球菌管铜绿假单胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢杆菌管配制批号检查项目第一天第二天第三天结果判定对照管金黄色葡萄球菌管铜绿假单胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢杆菌管金黄色葡萄球菌 CMCC(B) 26 003100铜绿假单胞菌 CMCC(B) 10 104生孢梭菌 CMCC