实验一水质的微生物检测ppt课件

1、水微生物检测南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心.教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生实验课时：8学时课程类型：专业实验课课程要求：必修每组人数：2人.实验目的与要求掌握水样采集规那么及本卷须知。熟习常用水卫生细菌学目的。熟习菌落总数、大肠菌群的测定方法及检测意义。学会对所检测的水样作综合分析。.水微生物检测的意义水体的微生物污染问题日趋严重。在各种水体，特别是污染水体中存在有大量的有机物质，适于各种微生物的生长。水体中微生物污染的来源：土壤，以及人类、动物的排泄物污染。水体中少数致病微生物主要来自人或动物的粪便污染可导致某些肠道传染病传播。水微生物检测可用于评价水质情况，预告水质的污染趋

2、势，以保证水质的卫生平安。.在实践任务中，对水质卫生质量的评价和控制，是无法对水体中各种能够存在的致病微生物一一进展检测。普通选择有代表性的一种或一类微生物作为指示菌，经过对指示菌的检测，来了解水体能否遭到过的微生物污染，能否有肠道病原微生物存在的能够。.水微生物的检测目的菌落总数(aerobic bacterial count)是指1ml水样在营养琼脂培育基中，于37经24h培育后，所生长的细菌菌落的总数。检测意义：作为普通性污染的目的，即评价被检样品的微生物污染程度和平安性。水样菌落总数越多，阐明水被微生物污染程度越严重，病原微生物存在的能够性越大，但不能阐明污染的来源。.水质微生物的检测

3、目的总大肠菌群(coliform bacteria)是指一群需氧及兼性厌氧的，37生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。检测意义：作为粪便污染的目的。水样总大肠菌群数的含量，阐明水被粪便污染的程度，而且间接地阐明有肠道致病菌存在的能够。.实验内容水样采集；菌落总数的测定；总大肠菌群的测定。.一、水样采集.采样原那么所采集的样品具有代表性。采样容器：选择硼硅玻璃瓶和聚乙烯塑料瓶。不能是新的污染源；不吸收或吸附某些待测组分；不与待测组分发生反响。保证从采样到分析期间，样品各组分的浓度不发生改动。 必需按普通无菌操作的根本要求采集，并保证在运送、储存过程中不受污染。.自来水水

4、样：先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5 min经常用水的水龙头放水13min后，采集水样于无菌锥形瓶，约占瓶容量80%，以便摇匀水样。水源水水样：选有代表性的地点及可疑地方，普通距水面下1015cm采样。采样后，将瓶塞盖好，再从水中取出。.本卷须知严厉无菌操作。做好标志：采得水样后应立刻记录水样称号、地点、时间等工程。从速送检。水样从采集到检验不应超越2h，在04下保管不应超越24h。.二、菌落总数的测定 平板菌落计数法.一生活饮用水器材与试剂 无菌1ml吸管1支/组，无菌平皿3个/组，营养琼脂。.方法水样摇匀2025次，使细菌分散。倾注培育：无菌汲取1ml水样分别置于

5、2个空平皿，另一个作空白对照。再倾注15ml琼脂约45于平皿中旋转，混匀待琼脂凝固后倒置3724h。菌落计数：用肉眼或放大镜检查，计数平皿内菌落数目。.结果分析与报告计算平均菌落数：报告方式：菌落总数(cfu/ml)。 cfu：colony forming units当检样的菌落数为l100时，按实有数报告；大于100时，采用二位有效数字报告。国家规范GB5749-2006规定生活饮用水菌落总数每毫升不得超越100个。.二水源水器材与试剂 无菌1ml吸管6支/组，无菌10ml吸管1支/组。无菌平皿9个/组，营养琼脂。90ml灭菌盐水1瓶内置适量玻璃珠，9ml灭菌盐水管3支。.方法 稀释水样：无

6、菌吸10ml混匀水样注入90ml灭菌水瓶中,混匀成1:10水样。取1:10水样1ml注入9ml灭菌试管中混匀成1:100水样。同法稀释成1:1000, 1:10000水样。.方法 倾注培育：用1ml无菌吸管汲取23个适当浓度的稀释液1ml,分别注入无菌平皿中，每个稀释度应同时做2个平皿，另取一平皿作空白对照。再做倾注培育(方法同饮用水)。菌落计数：方法同饮用水。.菌落总数测定.结果分析与报告计算不同稀释度的平均菌落数：稀释度的选择和菌落总数报告方式：首先选择平均菌落在30300之间者进展计算。 计算方法和报告方式如表1所示。.表1稀释度选择及菌落总数报告方式例次不同稀释度的平均菌落数两稀释度菌

7、落总数之比 菌落总数 (cfum1) 报告方式 (cfum1) 10-1 10-2 10-312345678136527602890150多不可计27多不可计0 164 295 271 304650 1l305020466085135120 1.6 2.2 2 1640037750271001 5005130002703050011016000或1.610438000或3.810427000或2.71041500或1.5103510000或5.1105270或2.710231000或3.110410.由表2可断定水质被污染的程度。表2 普通水源水中菌落总数与水清洁程度的关系 水的类别最清洁水清

8、洁水不太清洁水不清洁水极不清洁水菌落总数 cfum110100100100010001000010000100000100000.本卷须知菌落总数测定中，应选择适宜的稀释度进展。生活饮用水，国家规范规定每毫升不得超越100个，因此可以直接汲取1毫升到平板进展培育各稀释管、相应平皿做好标志。包括：水样称号、稀释度、时间、小组。严厉无菌操作。进展水样稀释时，每一稀释度均需改换吸管。倾注时，要留意营养琼脂的温度。倾入琼脂后要混匀，待琼脂凝固后倒置培育。.三、总大肠菌群的测定多管发酵法分为三步：初发酵实验平板分别复发酵证明实验.初发酵实验：采用乳糖蛋白胨培育液37培育24h，察看产酸产气情况。平板分别

9、：对阳性管培育物，接种于品红亚硫酸钠培育基或伊红美蓝培育基，察看菌落特征，并进展革兰氏染色和镜检。复发酵证明实验：对典型和可疑菌落，接种于乳糖蛋白胨培育液，进展复发酵证明实验，并根据规范所附检数表报告结果。 .产气初发酵、复发酵实验结果.大肠菌群EMB上菌落特征.大肠菌群革兰染色形状.一生活饮用水器材与试剂 2瓶50ml三倍浓缩的乳糖蛋白胨培育液内有导管, 10支5ml三倍浓缩的乳糖蛋白胨培育液内有导管,10ml吸管1支,100ml量筒1支。EMB，革兰染液等。.方法 初步发酵实验：接种水样总量为300ml100ml 2份，10ml 10 份，12支发酵管 。37培育24h。平板分别：将产酸产

10、气及只产酸不产气(发酵乳糖)管接种EMB, 37培育24h，取典型菌落作革兰氏染色镜检。复发酵实验：革兰氏染色镜检为革兰阴性无芽胞杆菌，取该菌接种于普通浓度乳糖蛋白胨(每管接13个菌落), 37培育24h，有产酸产气者即证明有大肠杆菌的存在。 .产酸产气报告为大肠菌群阳性.结果分析与报告根据证明有大肠菌群存在的阳性管瓶数，查接种水样总量为300ml检数表表3。报告每升水样中的大肠菌群数MPN 值，Most Probable Number，最大能够数法。国家规范GB5749-2006规定生活饮用水大肠菌数每升不得超越3个。 .表3 大肠菌群数检数表接种水样总量300ml100ml 2份，10ml

11、 10 份10ml水量的阳性管数100 ml 水量的阳性管数012每升水样中大肠菌群数每升水样中大肠菌群数每升水样中大肠菌群数0l234567891033711141822273136404813182430364351606911182738527092120161230230.二水源水器材与试剂 1ml吸管3支/组，10ml吸管1支/组，10ml普通发酵管内有导管3支/组，5ml三倍发酵管内有导管1支/组。EMB，革兰染液等。.方法稀释水样：水样做1:10及1:100稀释。方法同菌落总数测定。初发酵实验：接种水样总量11.11ml， 4支发酵管。取10ml原水样注入5ml三倍乳糖发酵管内有导管；取1ml原水样、1ml 1:10及1:100稀释水样分别注入10ml普通乳糖发酵管内有导管，37培育24h。平板分别与复发酵实验：同生活饮用水。.结果分析与报告根据证明有大肠菌群存在的阳性管瓶数，查接种水样总量为11.11ml检数表表4，报告每升水样中的大肠菌群数。.表4 大肠菌群数检数表接种水样总量11.11ml10ml、1ml 、0.1ml、0.01ml 各1份接种水样总量(ml)每升水样中大肠菌群数10 10.1 0.01 地 .本卷须知总大肠菌群的测定方法，由于饮用水和水源水能够的污染程度不同，因些采用不同的接种量，检数表也不一样。当接种量超越1毫升时