微生物学实验：实验二 产胞外淀粉酶细菌的分离筛选_第1页
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文档简介

1、实验二 产胞外淀粉酶细菌的分离筛选第二模块 功能微生物的筛选和选育实验目的1.掌握固体平板的配制（倒平板）；2.了解单菌落划线分离菌种技术、进一步掌握稀释涂布分离菌种技术；3.掌握分离、鉴定产淀粉酶细菌的方法（水解圈）；实验原理 在自然界的土壤中存在产淀粉酶的细菌，通过土样悬液稀释涂布和平板划线分离于含有淀粉的培养基上，诱导产生淀粉酶。产淀粉酶的细菌可在菌落周围水解淀粉生成小分子界限糊精、麦芽糖和葡萄糖，滴加碘液，未水解的淀粉呈蓝色，水解圈无色，在淀粉平板上，产淀粉酶菌落周围会出现水解圈。实验原理透明圈（H）与菌落直径（C）比值的大小在一定程度上反映了菌株产生淀粉酶的能力：H/C值越大，表明分

2、泌的淀粉酶越多，水解淀粉的能力也就越强。实验材料样品：新鲜土壤样品（同学自备）。培养基：淀粉培养基。无菌水：带有玻璃珠装有20mL无菌水三角瓶。其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌离心管、电子天平、记号笔、玻璃涂棒、酒精灯、火柴。实验步骤一、制备淀粉培养基平板：每组制5块淀粉培养基平板。具体制法为：倒入融化好的淀粉培养基（温度为不烫手为宜）并轻轻摇晃混匀，置于桌面冷却平板。在无菌培养皿底部注明分离菌名、稀释度、组别、班级。 二、制备土壤稀释液：称取土壤2g，放入18mL带有玻璃珠的无菌水三角瓶中，振荡5min，即为稀释101的土壤悬液。然后在离心管中依次稀释至103、104稀释度。实验步骤三、稀释

3、涂布：无菌操作法分别吸取103、104土壤稀释液各0.1mL，分别加在已制好的2块淀粉平板培养基上；用玻璃涂布棒将稀释液在培养机上充分混匀铺平，静置5min；倒置于30恒温箱培养24小时。四、划线分离将101土壤稀释液用接种环挑取一环，在一块淀粉培养基上进行划线分离（每人一块）；倒置于房间30恒温箱培养24小时。实验步骤平板划线的操作方法实验步骤五、挑选单菌落转接划线24小时后，在之前稀释涂布和划线的3块淀粉培养基上选取典型细菌菌落（尽量选取边缘整齐和规则的菌落），并用记号笔进行编号。然后将编号后的菌落用无菌牙签挑取，在另1块淀粉培养基平板上分别划短线。实验步骤六、观察水解圈和测量H/C值在3块淀粉培养基上加碘液，观察是否有水解圈的产生，并测量其半径，计算H/C值。对照划线平板和编号菌落的水解圈大小，挑取水解圈最大的一个菌斑，用记号笔将其勾选出来，并在划线平板上标记好。将划线平板置于培养箱30培养。实验结果1.拍照纪录筛选培养基平板上的水解圈；2.列表记录单菌落数量、

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