临床微生物标本的正确采集与运送

1、2022-7-1Dr.HU Bijie1临床微生物标本临床微生物标本正确采集与运送正确采集与运送胡必杰胡必杰2022-7-1Dr.HU Bijie2 用机关枪打鸟或用牛刀杀鸡的时代已经过去用机关枪打鸟或用牛刀杀鸡的时代已经过去 抗感染需要：瞄准器、激光制导炸弹抗感染需要：瞄准器、激光制导炸弹MRSA？ESBL？VRE？PDR-AB?白念？曲霉？白念？曲霉？2022-7-1Dr.HU Bijie3微生物让人类步步为营，微生物让人类步步为营，我们应该追求：我们应该追求：“准确的病原学诊断准确的病原学诊断“针对性病原学治疗针对性病原学治疗正确的微生物标本采集和运送，是正确的微生物标本采集和运送，是准

2、确的病原学诊断的前提！准确的病原学诊断的前提！2022-7-1Dr.HU Bijie4根本原那么根本原那么1.及时采集微生物标本作病原学检查及时采集微生物标本作病原学检查2.在抗菌药物使用前采集标本在抗菌药物使用前采集标本3.采样时严格执行无菌操作采样时严格执行无菌操作4.采样后立即送检采样后立即送检5.5.棉拭子标本宜用运送培养基棉拭子标本宜用运送培养基6.混有正常菌群污染标本，不可置肉汤培养混有正常菌群污染标本，不可置肉汤培养7.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂。标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂。8.8.送检标本应注明来源和检验目的送检标本应注明来源和检验目的2022-7-1Dr.

3、HU Bijie5血培养标本血培养标本采集与运送采集与运送2022-7-1Dr.HU Bijie6关于血培养关于血培养 疑心有血液感染时，抽取血培养的次数应是疑心有血液感染时，抽取血培养的次数应是A 1次次B 至少至少2次次 C 4次次D 越多越越多越好好 如果血培养标本不能及时运送，应暂存何种环境如果血培养标本不能及时运送，应暂存何种环境A 4 B 18 C 室温室温 D 无所谓无所谓 败血症的血液细菌培养出现阳性结果最快时间是败血症的血液细菌培养出现阳性结果最快时间是A 100/ml 痰、尿标本不能及时运送呢？不能及时运送呢？2022-7-1Dr.HU Bijie7报警时间报警时间48h

4、90 72h 99天天株数株数血培养不是血培养不是“马后炮马后炮真菌生长报警时间真菌生长报警时间 177株，株，19932000年年2022-7-1Dr.HU Bijie8你认为对吗？你认为对吗？为了提高病人血培养的阳性率，为了提高病人血培养的阳性率，最好的抽血时间是：最好的抽血时间是： A.发热开始时发热开始时 B.寒战开始时寒战开始时 C.发热最顶峰时发热最顶峰时 D.寒战结束时寒战结束时 E.预计寒战发热前预计寒战发热前 2022-7-1Dr.HU Bijie9血培养的数量血培养的数量v研究结果研究结果一套血培养的阳性率为一套血培养的阳性率为65二套血培养的阳性率为二套血培养的阳性率为8

5、0三套血培养的阳性率为三套血培养的阳性率为96vCLSI建议方针建议方针对于每位需要血培养的患者需采取对于每位需要血培养的患者需采取2至至3套。套。对于成年患者的血培养，只采对于成年患者的血培养，只采单一的血培养是不允许的单一的血培养是不允许的。因为单一血培养的结果的临床意义很难解释。因为单一血培养的结果的临床意义很难解释。采血培养后的采血培养后的2至至5天内，不需要重复采血培养，因为治天内，不需要重复采血培养，因为治疗后的疗后的2至至5天内血液中的感染细菌不会马上消失。天内血液中的感染细菌不会马上消失。CLSI指南：血培养的原那么和流程指南：血培养的原那么和流程2022-7-1Dr.HU B

6、ijie10血培养的采血量血培养的采血量 对于成年患者，每套血培养瓶推荐的采对于成年患者，每套血培养瓶推荐的采血量为血量为20至至30ml 对于婴幼儿患者，采血量不超过患者总对于婴幼儿患者，采血量不超过患者总血量的血量的12022-7-1Dr.HU Bijie11血培养中需氧瓶与厌氧瓶的分配血培养中需氧瓶与厌氧瓶的分配 对于常规的血培养，建议采取包括需氧对于常规的血培养，建议采取包括需氧和厌氧的一套血培养瓶和厌氧的一套血培养瓶 当采血量不能满足推荐的采血量时，首当采血量不能满足推荐的采血量时，首先应进行需氧瓶的培养先应进行需氧瓶的培养2022-7-1Dr.HU Bijie12皮肤消毒与污染防治

7、皮肤消毒与污染防治 碘酊、次氯酸和洗必泰的消毒效果要好碘酊、次氯酸和洗必泰的消毒效果要好于碘酒于碘酒 碘酊和洗必太的消毒效果大致相当碘酊和洗必太的消毒效果大致相当 消毒次序消毒次序 消毒皮肤范围消毒皮肤范围2022-7-1Dr.HU Bijie13标本的运送标本的运送 血培养瓶在采血接种后必须马上送检血培养瓶在采血接种后必须马上送检 血培养瓶在采血接种后在室温中不得超血培养瓶在采血接种后在室温中不得超过数小时过数小时 血培养瓶不得在采血接种后放入冰箱或血培养瓶不得在采血接种后放入冰箱或冷冻冷冻2022-7-1Dr.HU Bijie14添加剂树脂、活性炭、抗凝剂添加剂树脂、活性炭、抗凝剂 和无添

8、加剂的血培养瓶相比，拥有添加和无添加剂的血培养瓶相比，拥有添加剂的血培养瓶的阳性率更高剂的血培养瓶的阳性率更高 含有添加剂的血培养瓶的阳性率更高，含有添加剂的血培养瓶的阳性率更高，但同时污染菌的生长也会更迅速但同时污染菌的生长也会更迅速2022-7-1Dr.HU Bijie15常见问题常见问题 厌氧菌厌氧菌培养有价值吗？培养有价值吗？ 真菌真菌培养需要另开单子吗？培养需要另开单子吗？ 分枝杆菌分枝杆菌培养有专门的培养瓶吗？培养有专门的培养瓶吗？ 骨髓培养能增加阳性率吗？骨髓培养能增加阳性率吗？ 开始治疗后，间隔多少长时间复查？开始治疗后，间隔多少长时间复查？2022-7-1Dr.HU Biji

9、e16真菌血培养真菌血培养 有三种自动化的血培养系统可以进行真有三种自动化的血培养系统可以进行真菌血培养菌血培养 真菌血培养最好在需氧瓶进行真菌血培养最好在需氧瓶进行 能够中和能够中和灭活抗生素的血培养瓶可以提灭活抗生素的血培养瓶可以提高真菌的检出率高真菌的检出率2022-7-1Dr.HU Bijie17婴幼儿的血培养婴幼儿的血培养 不必像成年患者一样采取不必像成年患者一样采取2至至3套血培养瓶套血培养瓶 一些研究建议只采取一瓶需氧瓶进行培养一些研究建议只采取一瓶需氧瓶进行培养 对于婴幼儿患者，采血量不超过患者总血量的对于婴幼儿患者，采血量不超过患者总血量的12022-7-1Dr.HU Bij

10、ie18特别注意：感染性心内膜炎特别注意：感染性心内膜炎u抽取血培养的时机抽取血培养的时机uABEABE：必须在根据经验使用抗生素前：必须在根据经验使用抗生素前3030分钟之内抽取血培养分钟之内抽取血培养uSBESBE：(1)(1)在在30min-1h30min-1h之内连续抽取数套血培养之内连续抽取数套血培养;(2);(2)皮肤消毒皮肤消毒尤为重要，因为其主要的病原菌为皮肤定植菌如凝固酶阴性尤为重要，因为其主要的病原菌为皮肤定植菌如凝固酶阴性的葡萄球菌。必须取自外周静脉而非留置的静脉装置的葡萄球菌。必须取自外周静脉而非留置的静脉装置, ,否那么否那么会判有很高的污染风险从而导致错误的心内膜炎

11、结论；会判有很高的污染风险从而导致错误的心内膜炎结论；u抽取血培养的数量抽取血培养的数量u最正确的血培养数量不确定，但只抽单瓶血培养是不够的最正确的血培养数量不确定，但只抽单瓶血培养是不够的u多套血培养可以帮助区别血培养假阳性如皮肤污染等多套血培养可以帮助区别血培养假阳性如皮肤污染等u建议：起始采集建议：起始采集3 3套血培养，如套血培养，如2424小时内仍报告阴性，那么继小时内仍报告阴性，那么继续采集续采集2 2套血培养，全部培养为套血培养，全部培养为5 5套。套。2022-7-1Dr.HU Bijie19血培养镜检血培养镜检2022-7-1Dr.HU Bijie20同样规模医院的血培养数同

12、样规模医院的血培养数 国内多数三甲综合医院国内多数三甲综合医院 210 瓶瓶/天天 复旦大学中山医院复旦大学中山医院2050瓶瓶/天天 香港玛丽医院香港玛丽医院200瓶瓶/天天 台湾大学医院台湾大学医院300瓶瓶/天天 John Hopinks Hospital 300400瓶瓶/天天2022-7-1Dr.HU Bijie21台大医院微生物科台大医院微生物科2022-7-1Dr.HU Bijie22香港大学玛丽医院微生物科香港大学玛丽医院微生物科 工作人员工作人员 医师医师4 4人人 技术员技术员3030余人余人 文秘和工人约文秘和工人约3030人人 每天接收标本约每天接收标本约800800份

13、份 血培养血培养200300200300份份 痰培养约痰培养约100100份份 工作制度工作制度2424小时值班制度小时值班制度 白天每隔半小时核对、接种新到的标本白天每隔半小时核对、接种新到的标本 夜间那么延长至夜间那么延长至1 1小时小时2022-7-1Dr.HU Bijie23John Hopinks HospitalJohn Hopinks Hospital每天接受每天接受血培养标本血培养标本300300400400份！份！2022-7-1Dr.HU Bijie24明尼苏达州一所社区医院明尼苏达州一所社区医院2022-7-1Dr.HU Bijie252006.4.17 WHO专家参观中

14、山医院专家参观中山医院2022-7-1Dr.HU Bijie26复旦大学附属中山医院血培养复旦大学附属中山医院血培养2022-7-1Dr.HU Bijie27血培养结果分析血培养结果分析复旦大学附属中山医院，复旦大学附属中山医院，2004.12007.123202株血培养别离菌2279例剔除重复菌BSI2021年度上海市感染管理督查方案年度上海市感染管理督查方案 内容内容分分评估方法评估方法扣分标准扣分标准1.1.正确掌握血培养指征：住正确掌握血培养指征：住院病人发热院病人发热3838，考虑感，考虑感染所致，伴有以下一种情况染所致，伴有以下一种情况，应抽血培养：，应抽血培养：(1) (1) 留

15、置深留置深静脉导管静脉导管=5=5天；天；(2)(2)医院内医院内肺炎。肺炎。1010到到ICUICU或病区，查找发热或病区，查找发热病人，同时伴深静脉留病人，同时伴深静脉留置导管置导管=5=5天，或医院内天，或医院内肺炎，肺炎，1010例。例。如果缺少如果缺少病例，可以从出院病例病例，可以从出院病例中查找。中查找。符合条件者，没有做血符合条件者，没有做血培养，每例扣培养，每例扣1 1分。分。2 2血培养标本采集方法：血培养标本采集方法：怀疑有血流感染时，应在不怀疑有血流感染时，应在不同部位采血，至少同部位采血，至少2 2次。次。4 4到微生物室统计连续到微生物室统计连续5050例血培养数据例

16、血培养数据当天当天2 2次采血培养人数次采血培养人数占总体血培养人数的比占总体血培养人数的比例：例：6 6180，扣，扣1分分；4160，扣，扣2分；分；2140，扣，扣3分；分；10万万/ml，ESBL2022-7-1Dr.HU Bijie44你知道吗？你知道吗？ 尿液通常是无菌的或一过性有少量微生物，但是尿道尿液通常是无菌的或一过性有少量微生物，但是尿道内或尿道周围皮肤的菌群会污染尿液标本，从而可能内或尿道周围皮肤的菌群会污染尿液标本，从而可能导致错误的培养结果。导致错误的培养结果。 诊断病症明显的病人如尿急、尿频、尿痛，一份诊断病症明显的病人如尿急、尿频、尿痛，一份标本就已足够，治疗标本

17、就已足够，治疗48-7248-72小时后再采集第二份标本。小时后再采集第二份标本。对于病症不明显的病人，需采集对于病症不明显的病人，需采集2-32-3份标本。疑心肾结份标本。疑心肾结核时，应连续核时，应连续3 3天采集晨尿。天采集晨尿。 屡次收集或屡次收集或2424小时尿不能用作培养。小时尿不能用作培养。 申请单上必须注明病人病症是否明显，这对于定量培申请单上必须注明病人病症是否明显，这对于定量培养分析非常重要，尤其只有少量尿液标本。养分析非常重要，尤其只有少量尿液标本。 室温都有利于病原菌和污染菌会生长繁殖，因此假设室温都有利于病原菌和污染菌会生长繁殖，因此假设30min30min内不能及时

18、培养尿液那么必须冷藏，但也不能超内不能及时培养尿液那么必须冷藏，但也不能超过过2424小时。小时。2022-7-1Dr.HU Bijie45尿液尿液 中段尿中段尿 导尿管导尿导尿管导尿 经耻骨上皮肤穿刺采集膀胱内尿液经耻骨上皮肤穿刺采集膀胱内尿液 送检标本以晨起第一次尿液为佳送检标本以晨起第一次尿液为佳 不能立即送检者，可暂存不能立即送检者，可暂存44冰箱冰箱2022-7-1Dr.HU Bijie46清洁中段尿液清洁中段尿液 尽量取早晨第一次尿液尽量取早晨第一次尿液 弃去开始流出的尿液，以冲刷尿道口的细菌，取能代表弃去开始流出的尿液，以冲刷尿道口的细菌，取能代表膀胱部位病原菌的中段尿膀胱部位病

19、原菌的中段尿 详细告知病人以下操作步骤详细告知病人以下操作步骤 女性病人女性病人 取舒适位坐于马桶上并向一侧尽量伸展自己的膝部取舒适位坐于马桶上并向一侧尽量伸展自己的膝部 收集标本前用清洗液冲洗干净，从前向后仔细擦洗生殖收集标本前用清洗液冲洗干净，从前向后仔细擦洗生殖器部位器部位 用手握杯子外面，但不要触及杯子边缘。舍弃开始小局用手握杯子外面，但不要触及杯子边缘。舍弃开始小局部尿液，取后面的尿液，充满杯子的一半。部尿液，取后面的尿液，充满杯子的一半。 小心旋紧杯子的盖子。小心旋紧杯子的盖子。 男性病人男性病人 退回包皮并清洗龟头退回包皮并清洗龟头 按上述步骤按上述步骤-收集标本收集标本2022

20、-7-1Dr.HU Bijie47导尿管尿液导尿管尿液 集尿袋内的尿液不能用作培养；集尿袋内的尿液不能用作培养； 导尿管末端的尿液也不能用于培养，因为很难防止没导尿管末端的尿液也不能用于培养，因为很难防止没有尿道菌群污染。有尿道菌群污染。 除非是流行病学调查，长期留置导管病人常规尿培养除非是流行病学调查，长期留置导管病人常规尿培养没有临床意义，大量病原菌常可在这类病人中检出。没有临床意义，大量病原菌常可在这类病人中检出。 留置导管尿液标本常通过专门的采样端口采集，不能留置导管尿液标本常通过专门的采样端口采集，不能把导尿管与尿袋拔开后收集尿液。把导尿管与尿袋拔开后收集尿液。 采样端口用酒精消毒；

21、必要时，可先夹住导尿管但不采样端口用酒精消毒；必要时，可先夹住导尿管但不能超过能超过3030分钟；将注射器针头插入采样端口，抽吸出分钟；将注射器针头插入采样端口，抽吸出尿液；注入无菌杯或试管中。尿液；注入无菌杯或试管中。 标记标记 申请单上注明尿液采自留置导尿管。申请单上注明尿液采自留置导尿管。 运送运送 30 30分钟内不能送往实验室，将标本冷藏。实验室分钟内不能送往实验室，将标本冷藏。实验室没有接收人员时可将标本置于实验室冰箱里。没有接收人员时可将标本置于实验室冰箱里。2022-7-1Dr.HU Bijie48耻骨上穿刺吸取尿液耻骨上穿刺吸取尿液 常用于患儿、泌尿道厌氧菌感染或脊柱损伤病人

22、等。常用于患儿、泌尿道厌氧菌感染或脊柱损伤病人等。 可防止尿道或会阴细菌的污染，但对膀胱内少量尿液可防止尿道或会阴细菌的污染，但对膀胱内少量尿液的小儿难以实施。的小儿难以实施。 方法：消毒自脐以下至尿道之间区域的皮肤，局麻穿方法：消毒自脐以下至尿道之间区域的皮肤，局麻穿刺点部位；在耻骨联合与脐连线上，高于耻骨联合刺点部位；在耻骨联合与脐连线上，高于耻骨联合2cm2cm处进针刺入膀胱；取处进针刺入膀胱；取20ml20ml尿液；置于无菌带螺旋帽尿尿液；置于无菌带螺旋帽尿杯中并送往实验室。杯中并送往实验室。 可用于厌氧菌检测可用于厌氧菌检测2022-7-1Dr.HU Bijie49手术切口与软组织感

23、染手术切口与软组织感染标本标本采集与运送采集与运送2022-7-1Dr.HU Bijie50手术切口、烧伤创面与脓液手术切口、烧伤创面与脓液 采取病灶深部的脓液和分泌物采取病灶深部的脓液和分泌物 脓肿采样方法脓肿采样方法 采样前局部免用抗菌药物或消毒剂采样前局部免用抗菌药物或消毒剂2022-7-1Dr.HU Bijie51皮肤组织标本皮肤组织标本损伤、脓肿、烧伤、渗出液损伤、脓肿、烧伤、渗出液 标本的选择更大程度上依赖于感染的程度和性质而不标本的选择更大程度上依赖于感染的程度和性质而不是可疑的病原体。是可疑的病原体。 对大多数开放伤口，采集前应先去除外表菌群。对大多数开放伤口，采集前应先去除外

24、表菌群。 除非有渗出物，枯燥、结痂伤口一般不做培养。除非有渗出物，枯燥、结痂伤口一般不做培养。 闭合脓肿应取渗出物和脓肿壁标本。闭合脓肿应取渗出物和脓肿壁标本。 开放脓肿处理同开放伤口。开放脓肿处理同开放伤口。 烧伤伤口应在广泛清洗和清创术后采集培养。建议取烧伤伤口应在广泛清洗和清创术后采集培养。建议取活检标本，伤口外表定量培养不一定有意义。活检标本，伤口外表定量培养不一定有意义。 代表性的标本应采自病灶活动区域或基底部有而不仅代表性的标本应采自病灶活动区域或基底部有而不仅仅是脓液。仅是脓液。2022-7-1Dr.HU Bijie52方法方法 未破裂脓肿：不能用拭子。消毒覆于脓肿外表的皮肤，未

25、破裂脓肿：不能用拭子。消毒覆于脓肿外表的皮肤，用注射器将脓肿内容物吸出。然后切开脓肿、引流，用注射器将脓肿内容物吸出。然后切开脓肿、引流，取局部脓肿壁送检。送检时，标本都置于厌氧培养基取局部脓肿壁送检。送检时，标本都置于厌氧培养基中。中。 开放病灶和脓肿：尽量去除外表菌落，用拭子采集病开放病灶和脓肿：尽量去除外表菌落，用拭子采集病灶及底部或边缘的标本，置于需氧培养基中。也可对灶及底部或边缘的标本，置于需氧培养基中。也可对渗出液作需氧培养。开放病灶不能做厌氧培养。渗出液作需氧培养。开放病灶不能做厌氧培养。 烧伤伤口：清创，出现渗出液后以拭子用力采集，仅烧伤伤口：清创，出现渗出液后以拭子用力采集，

26、仅作需氧培养。也可送检活检组织标本。作需氧培养。也可送检活检组织标本。 脓疱或水疱：酒精消毒使之枯燥，对于患儿用脓疱或水疱：酒精消毒使之枯燥，对于患儿用2323号针号针头挑破脓疱，拭子采集脓疱液和基底部标本。头挑破脓疱，拭子采集脓疱液和基底部标本。 标记：不要只写标记：不要只写“伤口标记标本，应有专门的描述伤口标记标本，应有专门的描述和解剖来源。注明渗出液来自开放伤口还是闭合伤口。和解剖来源。注明渗出液来自开放伤口还是闭合伤口。2022-7-1Dr.HU Bijie53 迅速送往实验室，迅速送往实验室，1 1小时内不能培养应将标本冷藏。小时内不能培养应将标本冷藏。 皮肤消毒对培养结果至关重要。

27、皮肤消毒对培养结果至关重要。 革兰染色对标本进行评估。涂片中如出现上皮细胞提革兰染色对标本进行评估。涂片中如出现上皮细胞提示标本已被污染。没有上皮细胞而有白细胞说明标本示标本已被污染。没有上皮细胞而有白细胞说明标本采集正确。采集正确。 不要仅送检脓液。脓液不能代表伤口特点，应在病灶不要仅送检脓液。脓液不能代表伤口特点，应在病灶活动区域或基底部采集标本。活动区域或基底部采集标本。 小儿要求：小儿感染常出现皮疹如水泡等，应在这些小儿要求：小儿感染常出现皮疹如水泡等，应在这些地方仔细采集标本培养以发现病原体。创伤标本如没地方仔细采集标本培养以发现病原体。创伤标本如没有炎性细胞可能说明采集了表皮正常菌

28、群，与疾病过有炎性细胞可能说明采集了表皮正常菌群，与疾病过程无关，应重新采集。程无关，应重新采集。2022-7-1Dr.HU Bijie54传统的棉签会严重不少细菌的生长传统的棉签会严重不少细菌的生长2022-7-1Dr.HU Bijie55您认识这些工具吗：运送培养基？您认识这些工具吗：运送培养基？2022-7-1Dr.HU Bijie56粪便粪便标本标本采集与运送采集与运送2022-7-1Dr.HU Bijie57你会选择粪便检验工程吗？你会选择粪便检验工程吗？ 粪常规培养：沙门菌，志贺菌粪常规培养：沙门菌，志贺菌 粪特殊培养：霍乱与副霍乱菌，弧菌粪特殊培养：霍乱与副霍乱菌，弧菌 粪真菌培

29、养：价值？粪真菌培养：价值？ 粪艰难梭菌培养：不常规进行粪艰难梭菌培养：不常规进行2022-7-1Dr.HU Bijie58粪便粪便用棉拭挑粪便插入用棉拭挑粪便插入CaryBlairCaryBlair运送培养运送培养或或pH7.0pH7.0的磷酸盐甘油的磷酸盐甘油不易获取粪便者或婴幼儿，可用肛拭不易获取粪便者或婴幼儿，可用肛拭( (拭子前端先用无菌甘油水湿润拭子前端先用无菌甘油水湿润) )2022-7-1Dr.HU Bijie59其他感染其他感染标本标本采集与运送采集与运送2022-7-1Dr.HU Bijie60男性，男性，3333岁，因岁，因“干咳干咳2 2月余入院，偶伴喘息，无发热盗汗，阿奇霉月余入院，偶伴喘息，无发热盗汗，阿奇霉素抗感染及平喘治疗后病症无好转。素抗感染及平喘治疗后病症无好转。CTCT示示“右下肺散在片状影，并可右下肺散在片状影，并可见小空洞形成，抗感染后随访见小空洞形成，抗感染后随访“右下肺病灶无明显好转右下肺病灶无明显好转2022-7-1Dr.HU Bijie6120062006年