组织学与胚胎学教学课件西安交通大学医学院人体解剖与组

1、1组织学组织学 与胚胎学与胚胎学 教学课件教学课件西西 安安 交交 通通 大大 学学 医医 学学 院院人体解剖与组织胚胎学系人体解剖与组织胚胎学系2Dr. Jinsong Zhou绪论绪论(Introduction) I. 什么是组织学什么是组织学(Histology)?组织学是研究人体组织学是研究人体正常正常细微细微结构及其相关功能结构及其相关功能的科学。的科学。A. 微观结构微观结构: 1. 光学显微镜光学显微镜(Light microscope，LM): 计量单计量单位是位是微米微米( m )。(1 m =0.001 mm) 。2. 电子显微镜电子显微镜(Electron microsc

2、ope，EM): 计量单计量单位是位是纳纳米米(nm )。(1 nm =0.001 m) 。3光学显微镜基本结构光学显微镜基本结构：1. 照明灯照明灯(Lamp)2. 聚光器聚光器(Condenser)3. 载物台和切片夹载物台和切片夹(Mechanical stage and specimen retainer)4. 推进器推进器(Mechanical stage adjustment knob)5. 物镜物镜(Objectives)6. 粗细螺旋粗细螺旋(Course and fine focus knob)7. 目镜目镜(Oculars)8. 照相机等接口照相机等接口(Connectio

3、n to camera, etc.)4B. 相关功能相关功能: 微观结构和其功能微观结构和其功能相适应相适应，反之亦然反之亦然。C. 人体结构的人体结构的4个层次个层次:1. 细胞细胞(Cell): 人体结构的基本结构和功能单位。人体结构的基本结构和功能单位。2. 组织组织(Tissue): 由一群结构和功能相同或相似的细胞由一群结构和功能相同或相似的细胞(及其及其细胞间质细胞间质)构成。人体内有构成。人体内有4种基本组织：上皮组织，结缔种基本组织：上皮组织，结缔组织，肌组织和神经组织。组织，肌组织和神经组织。3. 器官器官(Organ): 由组织有机地结合起来而构成。由组织有机地结合起来而构

4、成。4. 系统系统(System): 由结构相似且功能相关的器官构成。由结构相似且功能相关的器官构成。5II. 为什么要学习组织学为什么要学习组织学?1. 组织学又叫组织学又叫微观解剖学微观解剖学(Microanatomy)，是，是解剖学解剖学知识知识的进一步完善。的进一步完善。2. 结构是功能的基础，学好组结构是功能的基础，学好组织学是学好织学是学好生理学生理学(Physiology)的基础。的基础。3. 只有了解正常结构，才能学只有了解正常结构，才能学习其异常变化。因此组织学是习其异常变化。因此组织学是病理学病理学(Pathology)的基础。的基础。4. 组织学成绩不及格，必须补组织学成

5、绩不及格，必须补考，重修和留级。考，重修和留级。6III. 怎样学习组织学怎样学习组织学?A. LM技术技术:分辨率分辨率(Resolution)是指能够是指能够分辨相邻两点之间的分辨相邻两点之间的最小距最小距离离。LM的分辨率约为的分辨率约为200m。1. 切片切片(Section): 将组织切薄将组织切薄使使光线可以透过光线可以透过。a. 固定固定(Fixation): 为为保存保存新鲜新鲜组织的微观结构，尽快将组组织的微观结构，尽快将组织浸入到酒精，甲醛，苦味织浸入到酒精，甲醛，苦味酸，酸，Bouins 液或液或Zenkers液液等固定剂中。等固定剂中。7b. 石蜡包埋石蜡包埋(Para

6、ffin embedding):* 脱水脱水(Dehydration): 用浓度用浓度逐渐升高的逐渐升高的酒精酒精 (70100%)将组织中的水完全置换出将组织中的水完全置换出来。来。* 透明透明(Clearing): 用用二甲苯二甲苯完全置换出酒精。完全置换出酒精。* 浸蜡浸蜡(Infiltration): 在在6062 C时，用时，用液态石蜡液态石蜡完完全置换出二甲苯。室温时全置换出二甲苯。室温时石蜡凝固石蜡凝固成固态，内含待成固态，内含待切组织。切组织。8c. 切片切片: 用切片机将组织切成用切片机将组织切成120m厚厚的蜡片，然后将其的蜡片，然后将其放放到温水上，待其完全展开后，到温水

7、上，待其完全展开后，裱到裱到有粘附剂的载玻片上。有粘附剂的载玻片上。9除切片外，还有其他处理组织的方法：除切片外，还有其他处理组织的方法：* 铺片铺片(Whole mount): 用于很薄的组织，如肠系膜。用于很薄的组织，如肠系膜。* 磨片磨片(Ground section): 用于很坚硬的组织，如骨和牙。用于很坚硬的组织，如骨和牙。* 涂片涂片(Smear): 用于液态组织，如血液，精液和唾液。用于液态组织，如血液，精液和唾液。102. 染色染色(Staining): 染料可以将微观结构显示不同的颜色染料可以将微观结构显示不同的颜色以便观察鉴别。在染色前，需要以便观察鉴别。在染色前，需要脱蜡

8、入水脱蜡入水，因为染料，因为染料是水溶性的。是水溶性的。11a. 最常用的染料是最常用的染料是苏木素苏木素(Hematoxylin, H)和和伊红伊红(Eosin, E)。* 苏木素是苏木素是碱性碱性染料，染料，蓝紫色蓝紫色，可以使细胞核等着色。被苏木，可以使细胞核等着色。被苏木素着色的结构本身为素着色的结构本身为酸性酸性，具有，具有嗜碱性嗜碱性(Basophilic)。12 * 伊红是伊红是酸性染料酸性染料，粉红色粉红色。可以将大多数细胞的细胞质染成。可以将大多数细胞的细胞质染成红色。红色。被伊红着色的结构本身为被伊红着色的结构本身为碱性碱性，具有，具有嗜酸性嗜酸性(Acidophilic)

9、。* 不易被苏木素和伊红着色的结构具有不易被苏木素和伊红着色的结构具有嗜中性嗜中性(Neutrophilic)。13 肥大细胞的颗粒被甲苯铵蓝肥大细胞的颗粒被甲苯铵蓝(一种蓝色染料一种蓝色染料)染成紫红色染成紫红色b. 如果某结构显示的颜色和染料本身的颜色不同，该结如果某结构显示的颜色和染料本身的颜色不同，该结构具有构具有异染性异染性(Metachromasia)。c. 如果某结构能将银离子还原成银原子，并吸附银原子如果某结构能将银离子还原成银原子，并吸附银原子而使自身显示棕黑色，该结构具有而使自身显示棕黑色，该结构具有嗜银性嗜银性(Argyrophilic)。14网状纤维具有嗜银性，因此可以

10、用银盐染色来显示。网状纤维具有嗜银性，因此可以用银盐染色来显示。15 H&E染色的中等动静脉染色的中等动静脉d. 不同的染色方法，其结果不同。不同的染色方法，其结果不同。16醛复红染色的中等动静脉醛复红染色的中等动静脉17在染色后，重新进入酒精和二甲苯，最后用中性树胶在染色后，重新进入酒精和二甲苯，最后用中性树胶封片封片，以便长期保存。，以便长期保存。* 切片切片: 固定固定 梯度酒精梯度酒精 二甲苯二甲苯 石蜡。石蜡。* 染色染色: 石蜡石蜡 二甲苯二甲苯梯度酒精梯度酒精 水。水。* 保存保存: 水水 梯度酒精梯度酒精 二甲苯二甲苯中性树胶。中性树胶。18B. EM技术技术:1. EM可分为

11、可分为透射电透射电镜镜(TEM)和和扫描电镜扫描电镜(SEM)2类。类。 2. EM的原理和的原理和LM相相似，但用似，但用电子束电子束代替代替光线，光线，磁场磁场代替玻璃代替玻璃透镜。分辨率约为透镜。分辨率约为0.2 nm。 193. EM的组织的制备与的组织的制备与LM的相似，但有以下不同的相似，但有以下不同:a. 通常使用戊二醛和四氧化锇作通常使用戊二醛和四氧化锇作双重固定双重固定。b. 切片切片超薄超薄 (厚度小于厚度小于90nm)，塑胶塑胶包埋。包埋。c. 用用重金属盐重金属盐如醋酸铀或醋酸铅等染色。因此，所有如醋酸铀或醋酸铅等染色。因此，所有 原始的电镜图片都是原始的电镜图片都是黑

12、白黑白的。的。20SEM显示巨噬细胞表面显示巨噬细胞表面21TEM显示胰腺腺泡显示胰腺腺泡细胞内部结构。细胞内部结构。22C. 特殊的染色方法特殊的染色方法:1. 组织化学组织化学(Histochemistry, 细胞化学细胞化学)法法: 通过生物化学的通过生物化学的 方法在原位产生不溶解的有颜色的反应产物，来显示方法在原位产生不溶解的有颜色的反应产物，来显示 微细结构的位置，然后用显微镜观察。微细结构的位置，然后用显微镜观察。 PAS 反应反应: 用来显示用来显示多糖多糖的分布。先用过碘酸的分布。先用过碘酸(Periodic acid )将多糖氧化，在多糖表面形成戊二醛结构，然后将多糖氧化，

13、在多糖表面形成戊二醛结构，然后用无色亚硫酸品红用无色亚硫酸品红( Schiff试剂试剂) 还原戊二醛形成还原戊二醛形成紫红色紫红色沉淀沉淀。23肝脏的肝脏的PAS染色染色242. 免疫细胞化学免疫细胞化学(Immunocytochemistry)染色法染色法:a. 待测结构或化学物质被看作抗原待测结构或化学物质被看作抗原(Antigen)，通过非常敏感，通过非常敏感和专一的免疫反应使抗原和被标记的抗体和专一的免疫反应使抗原和被标记的抗体(Antibody)结合，结合，然后显示标记物，在原位产生不溶有色的反应产物，最后然后显示标记物，在原位产生不溶有色的反应产物，最后用显微镜观察。用显微镜观察。25b. 2种基本染色法种基本染色法: * 直接法直接法: 第一抗体被标记。第一抗体被标记。* 间接法间接法: 第一抗体也被看作抗原，而第二抗体被标记。因第一抗体也被看作抗原，而第二抗体被标记。因为信号被放大，因此更加敏感。为信号被放大，因此更加敏感。3. 放射自显影放射自显影(Autoradiography): 给细胞所要代谢的物质分子给细胞所要代谢的物质分子上