乙肝五项操作规程

1、昆仑泌尿外科医院检验科 免疫室作业指导书文件编号;SZKL-M上05版本/修订号；1/0主题内容乙肝五项检测乳胶法操作规程生效日期:20210101页码：第1页共4页乙肝五项乳胶法操作规程1 .检测目的乙型肝炎病毒标志物HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb脸测.2 .测定原理HBsAg检测采用双抗体夹心法原理,试剂含有被事先固定于膜上测试区 T区的抗体. 检测时,标本滴入试剂加样处,标本与预包被的乳胶颗粒即标记物结合的HBsAb即标记抗体反响,该结合物随之在毛细效应下向上层析.如是阳性,乳胶抗体标记抗体 在层 析过程中先与标本中的HBsAg吉合,随后结合物会被固定在T区膜

2、上的HBsAb甫获,形成HBsAb 标记抗体一HBsAg-HBsAbt合物,从而在T区形成一条红杠.如为阴性,那么 T区没有红杠.HBsAb佥测采用双抗原夹心法原理,试剂含有事先固定于膜上测试区T区的HBsAg检测时,标本滴入试剂加样处,标本与预包被的乳胶颗粒结合的HBsA阪应即标记抗原反响,该结合物随之在毛细效应下向上层析.如是阳性,乳胶抗原标记抗原在层析过程中先 与标本中的HBsAb吉合,随后结合物会被固定在T区膜上的HBsAg甫获,形成HBsAgft记抗原 -HBsAb-HBsAgM合物,从而在T区形成一条红杠.如为阴性,那么 T区没有红杠.HBeAg佥测采用双抗体夹心法原理.试剂含有事

3、先固定于膜上测试区T区的HBeAb检测时,标本滴入试剂加样处,标本与预包被的乳胶颗粒结合的 HBeAtS应即标记抗体反响, 该结合物随之在毛细效应下向上层析.如是阳性,乳胶抗体标记抗体在层析过程中先与标本中的HBeAg吉合,随后结合物会被固定在T区膜上的HBeAb甫获,形成HBeAbB记抗原一 HBeAg-HBeAbS合物,从而在T区形成一条红杠.如为阴性,那么 T区没有红杠.HBeAg、HBcA麻用竞争抑制法原理,试剂含有事先固定于膜上测试区T区的抗体.检测时,标本滴入试剂加样处,随之标本在毛细效应下向上层析.如标本中含有相应的抗体, 那么同膜上测试区T的单克隆抗体竞争,与预包被在乳胶颗粒上

4、的相应抗原反响.如标本中 没有相应的抗体,那么预包被在乳胶颗粒上的相应抗原与膜上测试区 T的单克隆抗体全部结 合.阳性标本,测试区T将没有红色条带；阴性标本,测试区T会出现明显的红色条带昆仑泌尿外科医院检验科 免疫室作业指导书文件编号;SZKLMY-05版本/修订号；1/0主题内容乙肝五项检测乳胶法操作规程生效日期：20210101页码：第2页共4页3.标本采集样本采集后应尽快别离血清或血浆以防止溶血 .检测进应尽量使用新鲜的样本.样本假设不 能及时送检,可在2-8 C冷藏3天.长期保存需冷冻于一20C,忌反复冻融.发臭、溶血等 异常样本请勿使用.4.试剂艾博生物医药5.操作步骤5.1 使用前

5、将试剂板和血清/血浆标本恢复至室温2030 %.从原包装铝箔袋中取出试剂盒注意：在扣开铝箔前应先恢复至室温,在1小时内应尽快地使用.5.2将试剂盒置于干净平坦的台面上,用吸管吸取血清/血浆标本,逐滴垂直参加于试剂板的五个加样子L中每孔23滴.5.3 加样后马上开始计时,等待红色条带的出现,在15分钟时读取测试结果.在20分钟后 读取的结果无效.6.结果判定由于前三个工程HBsAg、HBsAb HBeAg使用双抗体原夹心法原理,后两个项日HBeAb HbcAb使用竞争法原理.因此前一：个项日与后两个工程判读方法是不同的,请注意区别.6.l. HBsAg、HBsAb HbeAg6.1.1阳性十:两

6、条红色条带出现.一条于测试区T内,另一条位于质控区C.阳性结 果说明：标本中含有待测物质.6.1.2阴性一：质控区c出现一条红色条带,在测试区T内无红色条带出现.阴性结果说明：标本中检测不出待测物质.6.1.3无效：质控区c未出现红色条带,说明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏. 在此情况下,应再次仔细阅读说明书,并用新的试剂盒重新测试.如果问题仍然存在,应立即停 止使用此批号产品,并与当地供给商联系.6.1.4注意：在进行HBsAg> HBsAb HbeAg测试时,测试区T内的红色条带可显现出颜 色深浅的现象.只要在规定的观察时间内,不管该条带颜色深浅 ,即使只有非常弱的色带也 应昆

7、仑泌尿外科医院检验科 免疫室作业指导书文件编号；SZKJ MY-05版本/修订号；1/0主题内容乙肝五项检测乳胶法操作规程生效日期：20210101页码：第3页共4页该判为阳性结果.6.2.HBeAb HBcAb6.2.1阳性+:仅质控区C出现一条红色条带.在测试区T内无红色条带出现.阳性 结果说明：标本中含有待测物质.6.2.2弱阳性+:质控区C出现一条红色条带,在测试区T内有非常弱的红色条带 出现.阳性结果说明：标本中含有待测物质.6.2.3阴性-:两条红色条带出现.一条于测试区T内,另一条位于质控区Co阴性 结果说明：标本中检测不出待测物质.6.2.4无效：质控区C未出现红色条带,说明不

8、正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏. 在此情况下,应重新测试.如果问题仍然存在,应立即停止使用此批号产品,并与当地供给商 联系.7.质量限制7.1请限制判读时间,测试结果应在测定开始后 20分钟左右读取,30分钟后读判定无效.7.2质控区内C区一条红色条带的出现是试验结果可靠的前提.质控内 C所显现的红色 条带是判定标本是否足够,层析过程是否正常的标准,同时也作为试剂的内控标准.8.考前须知8.1乳胶法乙肝五项检测试剂板血清/血浆只是定性的筛选乙肝病毒血清标志物的存在, 不能确定血样中病毒的含量.8.2 由于在技术上和操作上可能出现的失误,同时也由于标本中存在的干扰物质,检测结果可 能有错误.

9、对可疑结果应作相应的进一步检测.8.生物平安防护8.3 在检测前,所有标本均应视为“阳性标本即生物危险品.8.4 如操作中不慎洒落血液,要及时对污染台面消毒处理.8.3操作前一定要做好自身防护穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套昆仑泌尿外科医院检验科 免疫室作业指导书文件编号；SZKL-MY-05版本/修订号；1/0主题内容乙肝五项检测乳胶法操作规程生效日期:20210101页码：第4页共4页8.4 HBV对低温、枯燥、紫外线、70%乙醇均有耐受性.煮沸100 c 10分钟、高压蒸汽灭菌 121C15分钟或加热160c 2小时均可灭活HBV 510g/L次氯酸钠30分钟,1: 4000福尔 马林3

10、7c 72小时,0.5%过氧乙酸15分钟均可破坏其传染性.9.临床意义9.1 HBsAg阳性：血清HBsAg阳性,表示受检者处于 HBV的感染状态.HBsAg也可从许多乙 肝检验对象体液和分泌物中测出,如唾液、精液、乳汁、阴道分泌物等.9.2 HBsAb阳性：多见于乙型肝炎处于恢复期或既往曾感染过HBV现在已恢复,而且对HBV有一定的免疫力；同时,HBsAb阳性是对接种乙肝疫苗后产生效果,即接种免疫成功的指标.9.3 HBeAg阳性：见于HBV感染的早期,表示血液中含有较多的病毒颗粒,提示肝细胞有进行 性损害和高度传染性；乙型肝炎加重之前,HBeAg即有升高,有助于预测肝炎病情,HBeAg持

11、续阳性,易转为慢性乙型肝炎;HBeAg和HBsAg均为阳性的孕妇,可以将乙型肝炎传播病毒给 新生儿,其感染的阳性率为70%90%.9.4 HBeAb阳性：多见于HBeAg专阴的检验对象,意味着HBV?分被去除或抑制,病毒复制减 少,传染性降低；局部慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌检验对象可检出HBeAb在HBsA球口 HBsAb 阴性时,如能检出HBeAhffi HBcAb,也能确诊为乙型肝炎近期感染.9.5 HBcAb阳性：说明既往感染过乙肝病毒.它是感染病毒后最早呈阳性,也是最晚转阴性的一项,而且有些人一辈子都是阳性.附：HBcAb-lgG阳性：高滴度表示正在感染HBV低滴度那么是既往感染过HBV的指标,具 有流行病学的意义.HBcAb-IgM