普通光学显微镜

1、 课程简介：课程简介： 本实验课程主要面向本实验课程主要面向“食品科学与工程食品科学与工程”、“食食品质量与安全品质量与安全”等专业本科生，以专业基础课程等专业本科生，以专业基础课程食食品微生物学品微生物学为理论基础，是对学生进行独立的相关为理论基础，是对学生进行独立的相关微生物研究能力培养的重要环节。共有学时数微生物研究能力培养的重要环节。共有学时数3434学时，学时，教学内容内容包括：教学内容内容包括： “ “细菌、酵母菌、放线菌等的细菌、酵母菌、放线菌等的形态观察形态观察”、“培养基的制备和灭菌培养基的制备和灭菌”等。实验教学等。实验教学包括设计型、技能型和综合型实验内容，可提高学生包括

2、设计型、技能型和综合型实验内容，可提高学生的动手能力和解决实际问题的能力。的动手能力和解决实际问题的能力。 【实验目的【实验目的】【实验原理【实验原理】 显微镜的构造：机械部分与光学部分显微镜的构造：机械部分与光学部分 光线在穿过折射率不同的介质时发生折射光线在穿过折射率不同的介质时发生折射介质的折射率对光线通路的影响介质的折射率对光线通路的影响 【实验内容与步骤【实验内容与步骤】低倍镜观察低倍镜观察调节照明调节照明确定目标确定目标高倍镜观察高倍镜观察油镜观察油镜观察镜头的维护镜头的维护正确放置显微镜正确放置显微镜 【】 【实验目的【实验目的】【实验原理【实验原理】电镜照片 细菌的芽孢壁比营养

3、细胞壁厚，致密，透性细菌的芽孢壁比营养细胞壁厚，致密，透性差，着色和脱色都比营养细胞困难，故一般采用差，着色和脱色都比营养细胞困难，故一般采用一种碱性染料并在微火上加热，或延长染色时间，一种碱性染料并在微火上加热，或延长染色时间，使菌体和芽孢都染上颜色以后水洗或稀酸冲去菌使菌体和芽孢都染上颜色以后水洗或稀酸冲去菌体的染料，芽孢仍保留颜色，再用另一种对比鲜体的染料，芽孢仍保留颜色，再用另一种对比鲜明的染料使菌体着色，如此可明显区分芽孢和营明的染料使菌体着色，如此可明显区分芽孢和营养体结构。养体结构。4 4、荚膜染色原理、荚膜染色原理 荚膜与染料亲和力低。在用简单染色法时，荚膜与染料亲和力低。在用

4、简单染色法时，可以辨认出来。而通过荚膜染色也可以把它和细可以辨认出来。而通过荚膜染色也可以把它和细胞区别开来胞区别开来 细菌荚膜细菌荚膜涂片涂片固定固定染色染色干燥干燥水洗、吸干水洗、吸干 镜镜检检【实验内容与步骤【实验内容与步骤】 革兰氏阳性菌（左）和革兰氏阴性菌（右）革兰氏阳性菌（左）和革兰氏阴性菌（右）细胞壁结构的比较细胞壁结构的比较 2、革兰氏染色过程、革兰氏染色过程金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌枯草杆菌枯草杆菌（G+） 细菌芽孢细菌芽孢3、芽孢染色过程、芽孢染色过程 5 5、菌落特征的观察、菌落特征的观察细菌菌落特征图细菌菌落特征图涂片涂片固定固定染色染色干燥干燥水洗、吸干水洗、吸干

5、镜镜检检电镜照片 革兰氏阳性菌（左）和革兰氏阴性菌（右）革兰氏阳性菌（左）和革兰氏阴性菌（右）细胞壁结构的比较细胞壁结构的比较 革兰氏染色过程革兰氏染色过程金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌枯草杆菌枯草杆菌（G+） 细菌的芽孢壁比营养细胞壁厚，致密，透性细菌的芽孢壁比营养细胞壁厚，致密，透性差，着色和脱色都比营养细胞困难，故一般采用差，着色和脱色都比营养细胞困难，故一般采用一种碱性染料并在微火上加热，或延长染色时间，一种碱性染料并在微火上加热，或延长染色时间，使菌体和芽孢都染上颜色以后水洗或稀酸冲去菌使菌体和芽孢都染上颜色以后水洗或稀酸冲去菌体的染料，芽孢仍保留颜色，再用另一种对比鲜体的染料，芽孢仍

6、保留颜色，再用另一种对比鲜明的染料使菌体着色，如此可明显区分芽孢和营明的染料使菌体着色，如此可明显区分芽孢和营养体结构。养体结构。细菌芽孢细菌芽孢荚膜染色原理荚膜染色原理 荚膜与染料亲和力低。在用简单染色法时，荚膜与染料亲和力低。在用简单染色法时，可以辨认出来。而通过荚膜染色也可以把它和细可以辨认出来。而通过荚膜染色也可以把它和细胞区别开来胞区别开来 细菌荚膜细菌荚膜 菌落特征的观察菌落特征的观察细菌菌落特征图细菌菌落特征图 【】 【实验目的【实验目的】【实验原理【实验原理】 放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。类革兰氏阳性细菌。 常见

7、放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基内菌表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基内菌丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。孢子的表面光并进一步分化产生孢子丝及孢子。孢子的表面光滑或粗糙、圆或椭圆，孢子有各种颜色，这些形滑或粗糙、圆或椭圆，孢子有各种颜色，这些形态特点都是鉴定放线菌的重要依据。态特点都是鉴定放线菌的重要依据。一、实验材料一、实验材料1. 菌种：菌种： 啤酒酵母、面包酵母、裂殖酵母、啤酒酵母、面包酵母、裂殖酵母、热带假丝酵母。热带假

8、丝酵母。 白色链霉菌、红色链霉菌白色链霉菌、红色链霉菌2. 2. 0.1%美蓝染液，载玻片，盖玻片美蓝染液，载玻片，盖玻片 【实验内容与步骤【实验内容与步骤】二、酵母菌二、酵母菌啤酒酵母菌落啤酒酵母菌落红酵母菌落红酵母菌落各种酵母的菌落各种酵母的菌落 细菌菌落细菌菌落 细菌菌落细菌菌落 椭圆形酵母椭圆形酵母 2个体形态特征观察个体形态特征观察酵母个体形态酵母个体形态酵母菌的芽殖酵母菌的芽殖 酵母菌的芽殖过程酵母菌的芽殖过程1 1泡；泡；2 2小管；小管；3 3核；核；4 4液泡液泡 酵母菌子囊孢子的形成过程酵母菌子囊孢子的形成过程 1 1、2 2、3 3、4 4：两个细胞结合：两个细胞结合5

9、5：接合子；：接合子；6 6、7 7、8 8、9 9：核分裂；：核分裂；1010、1111：核形成孢子：核形成孢子酵母菌假菌丝的形成酵母菌假菌丝的形成 图中图中1 1、2 2、3 3、4 4 是出芽的顺是出芽的顺序序 1. 1. 放线菌落形态及菌苔特征的观察放线菌落形态及菌苔特征的观察 观察放线菌菌落的表面形状、大小、颜色和边观察放线菌菌落的表面形状、大小、颜色和边缘等；用接种环挑取菌落，注意放线菌在基质上着缘等；用接种环挑取菌落，注意放线菌在基质上着生紧密情况。区别基内菌丝、气生菌丝及孢子丝的生紧密情况。区别基内菌丝、气生菌丝及孢子丝的着生部位，取斜面培养的白色链霉菌、红色链霉菌着生部位，取

10、斜面培养的白色链霉菌、红色链霉菌观察菌苔特征，注意孢子颜色，营养菌丝颜色和色观察菌苔特征，注意孢子颜色，营养菌丝颜色和色素分泌情况等。素分泌情况等。 三、放线菌三、放线菌放线菌菌落特征放线菌菌落特征放线菌菌丝形态放线菌菌丝形态 2个体形态特征观察：个体形态特征观察：用接种铲连同菌苔一薄用接种铲连同菌苔一薄层培养基取下一小块，平置于载玻片上进行观察，层培养基取下一小块，平置于载玻片上进行观察，注意放线菌菌丝直径大小，孢子丝的形状。在低倍注意放线菌菌丝直径大小，孢子丝的形状。在低倍镜下观察基内菌丝和气生菌丝，在高倍镜下观察孢镜下观察基内菌丝和气生菌丝，在高倍镜下观察孢子丝。子丝。 链霉菌形态链霉菌

11、形态 放线菌菌丝放线菌菌丝 放线菌孢子丝放线菌孢子丝 放线菌的孢子丝描绘图放线菌的孢子丝描绘图 报告内容报告内容1. 绘出啤酒酵母、假丝酵母、裂殖酵母的个体形绘出啤酒酵母、假丝酵母、裂殖酵母的个体形态图，并标明死活细胞。态图，并标明死活细胞。2. 在同一平板培养基上长有细菌及酵母两种菌在同一平板培养基上长有细菌及酵母两种菌落，你如何区别？落，你如何区别？3. 3. 绘出白色链霉菌的气生菌丝、孢子丝和孢子绘出白色链霉菌的气生菌丝、孢子丝和孢子的形态图。的形态图。4. 4. 在显微镜下，如何区分基内菌丝和气生菌丝？在显微镜下，如何区分基内菌丝和气生菌丝？ 【实验目的【实验目的】 【实验原理【实验原

12、理】1 1 菌种：毛霉、黑根霉、青霉、黑曲霉。菌种：毛霉、黑根霉、青霉、黑曲霉。2 2 乳酸石炭酸溶液、乳酸石炭酸棉蓝溶液，乳酸石炭酸溶液、乳酸石炭酸棉蓝溶液，接种钩，接种铲。接种钩，接种铲。一、实验材料一、实验材料 【实验内容与步骤【实验内容与步骤】二、菌落特征的观察二、菌落特征的观察 用肉眼观察生长在用肉眼观察生长在PDA琼脂平板上的各琼脂平板上的各种霉菌菌落，并根据下列要求对每种霉菌的菌种霉菌菌落，并根据下列要求对每种霉菌的菌落特征加以描述。落特征加以描述。1.菌落的大小：局限生长或蔓延生长，菌菌落的大小：局限生长或蔓延生长，菌落的直径和高度。落的直径和高度。2.菌落的颜色：正面和背面的

13、颜色，培养菌落的颜色：正面和背面的颜色，培养基的颜色变化。基的颜色变化。3.菌落的形态：棉絮状、网状、疏松或紧菌落的形态：棉絮状、网状、疏松或紧密、同心轮纹、放线状的皱褶等。密、同心轮纹、放线状的皱褶等。 青霉菌落青霉菌落 曲霉菌落曲霉菌落三、霉菌个体形态的观察三、霉菌个体形态的观察 1 1乳酸石炭酸制片法观察乳酸石炭酸制片法观察 在干净的载玻片上加一滴乳酸石炭酸，用接种在干净的载玻片上加一滴乳酸石炭酸，用接种针从菌落边缘处取小量带有孢子的菌丝置于液体中，针从菌落边缘处取小量带有孢子的菌丝置于液体中，再小心地把菌丝放开，然后用盖玻片盖上，注意不再小心地把菌丝放开，然后用盖玻片盖上，注意不要产生

14、气泡。要产生气泡。A：无隔膜菌丝：无隔膜菌丝 B：有隔膜菌丝：有隔膜菌丝 霉菌的静孢子霉菌的静孢子左：毛霉的孢子囊；右：囊轴左：毛霉的孢子囊；右：囊轴中：孢子囊壁破裂，露出静孢子中：孢子囊壁破裂，露出静孢子 曲霉的分生孢子曲霉的分生孢子梗和顶囊上的分梗和顶囊上的分生孢子生孢子 青霉的帚状分青霉的帚状分生孢子梗和分生孢子梗和分生孢子生孢子 曲霉的分生孢子曲霉的分生孢子头彩图头彩图 根霉根霉毛霉毛霉霉菌的厚垣孢子霉菌的厚垣孢子 孢囊孢子孢囊孢子 【实验目的【实验目的】 【实验原理【实验原理】 【实验内容与步骤【实验内容与步骤】培养基分装培养基分装 棉塞的做法棉塞的做法 移液管包扎法移液管包扎法高压

15、蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅 斜面的摆放方法斜面的摆放方法几种常用培养基几种常用培养基 【思考题【思考题】 【实验目的【实验目的】 从混杂的微生物群体中获得只含有某从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。分离与纯化。 需要严格的无菌操作，否则使得微生需要严格的无菌操作，否则使得微生物实验毫无意义。物实验毫无意义。 【实验原理【实验原理】 【实验内容与步骤【实验内容与步骤】无菌操作环节无菌操作环节分离接种前，将无菌室、接种室、实验台消毒；分离接种前，将无菌室、接种室、实验台消毒；进入无菌室前，工作人员应肥皂洗双手，穿戴工作服

16、、进入无菌室前，工作人员应肥皂洗双手，穿戴工作服、鞋、帽。鞋、帽。接种的试管、三角瓶作好标记，注明培养基、菌种名接种的试管、三角瓶作好标记，注明培养基、菌种名称、日期，移入接种室内的物品，需消毒；称、日期，移入接种室内的物品，需消毒；操作过程不能离开酒精灯火焰，不许交谈；操作过程不能离开酒精灯火焰，不许交谈；接种工具使用前、后均要经火焰灼烧灭菌。接种工具使用前、后均要经火焰灼烧灭菌。操作动作应正确，轻而迅速。操作动作应正确，轻而迅速。实验内容与步骤实验内容与步骤二、稀释平板分离法二、稀释平板分离法制备样品稀释液制备样品稀释液加入加入15ml15ml、45455050培养基，混匀，凝固，制成平板

17、培养基，混匀，凝固，制成平板吸取吸取1ml1ml稀释样液注入相应编号的无菌平皿中稀释样液注入相应编号的无菌平皿中倒置，适温培养倒置，适温培养(24(2448h48h），观察计数），观察计数称取（称取（吸吸取取10ml ）10g样品样品 放入装放入装90ml无菌水的三角瓶里无菌水的三角瓶里 震荡混匀震荡混匀20min ，制成稀释液制成稀释液10-1 用无菌吸管吸取用无菌吸管吸取1ml的的10-1稀释液，注入装稀释液，注入装9ml无菌水试管中无菌水试管中 制成稀释液制成稀释液10-2 以同样的方法进一步稀释成以同样的方法进一步稀释成10-3、10-4、10-5 、 10-6每稀释一个浓度，必须更换

18、一支无菌吸管。每稀释一个浓度，必须更换一支无菌吸管。选取三个高稀释度，每个稀释度制二套平板。选取三个高稀释度，每个稀释度制二套平板。吸样时应来回吹吸三次。吸样时应来回吹吸三次。用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。品确定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。则低。 样品稀释流程图样品稀释流程图 固体培养基溶化，冷却至固体培养基溶化，冷却至5050在酒精灯火焰旁，倒制平板在酒精灯火焰旁，倒制平板灼烧接种环灼烧接种环取样取样伸入培养皿伸入培养皿轻轻划线轻轻划线倒置，适温培养倒置，适温

19、培养(24(2448h48h），观察计数），观察计数三、平板划线分离法三、平板划线分离法平板划线分离法平板划线分离法平板划线分离和分区示意图平板划线分离和分区示意图平板划线分离生长的菌落平板划线分离生长的菌落平板划线操作要点平板划线操作要点【实验目的【实验目的】【实验原理【实验原理】【】【实验【实验】手指的实验手指的实验未洗的手指未洗的手指清水洗净的手指清水洗净的手指肥皂洗净的手肥皂洗净的手指指 微生物的温度存活试验微生物的温度存活试验 根据微生物最适生长的温度范围，可分高根据微生物最适生长的温度范围，可分高温菌、中温菌、低温菌。自然界中绝大部分微温菌、中温菌、低温菌。自然界中绝大部分微生物属

20、于中温菌，但不同微生物对温度的抵抗生物属于中温菌，但不同微生物对温度的抵抗力不同，特别是芽孢杆菌对温度抵抗力强。力不同，特别是芽孢杆菌对温度抵抗力强。化学药物对微生物的影响化学药物对微生物的影响青霉素的杀菌过程青霉素的杀菌过程【实验目的【实验目的】【实验原理【实验原理】【】【】细菌细菌37黄为阴性黄为阴性E.coli、肠细菌、肠细菌 1-2环环48h加加2-3滴甲基红液滴甲基红液桔红为阳性桔红为阳性细菌细菌产气杆菌、肠细菌产气杆菌、肠细菌1-2环环3724h加加1/2培养液的培养液的40% NaoH与等量的与等量的5% -萘酚萘酚否则为阴性否则为阴性红色为阳性红色为阳性缩合缩合脱羧脱羧加强碱液

21、加强碱液3715-30分钟分钟M中的胍基中的胍基葡萄糖2COCOOHCH3CH3COCOHCOOHCH3CH3COCHOHCH3-2HCH3CHOHCHOHCH3乙酰甲基甲醇CH3COCOCH3-2H+OH-二乙酰丙酮酸乙酰乳酸2,3-丁二醇-CO2-CO2CH3COCOCH3二乙酰+ HN=CNH2NH2NNHNCCCCH3CH3+2H2OV.P试验反应过程试验反应过程细菌细菌E.coil、肠细菌、肠细菌1-2环环3748h否则为阴性否则为阴性红色为阳性红色为阳性加加23滴吲哚试剂滴吲哚试剂否则为否则为阴性阴性红色为红色为阳性阳性E.coli、肠细菌、肠细菌1-2环环3748h注意：加入试剂

22、后不可再摇动，否则被混合，红色不明显。注意：加入试剂后不可再摇动，否则被混合，红色不明显。吲哚试验反应过程吲哚试验反应过程E.coil、肠细菌、肠细菌1-2环环3748h加格里斯试剂加格里斯试剂A和和B液各一滴液各一滴阴性阴性立即或立即或10分钟分钟红色为红色为阳性阳性产生杆菌、肠细菌产生杆菌、肠细菌1-2环环372-4d二苯胺和浓硫酸二苯胺和浓硫酸无兰色为无兰色为阳性阳性兰色为兰色为阴性阴性阴性阴性加格里斯试剂加格里斯试剂A和和B液各一滴液各一滴立即或立即或10分钟分钟红色为红色为阳性阳性产气杆菌、肠细菌产气杆菌、肠细菌1-2环环372-4d二苯胺和浓硫酸二苯胺和浓硫酸无兰色为无兰色为阳性阳

23、性兰色为兰色为阴性阴性HNO2+NH2SO3H重氮化作用N2SO3+H2O对重氮苯磺酸N2SO3NH2N=NO3SNH2-N-萘胺偶氮苯磺酸（红色）硝酸盐还原反应过程硝酸盐还原反应过程黑色沉淀为阳性黑色沉淀为阳性E.coli、淡、淡6112 1-2环环3724h细菌细菌否则为否则为阴性阴性细菌细菌否则为否则为阴性阴性绿色变蓝色为绿色变蓝色为阳性阳性E.coli、产气杆菌、产气杆菌1-2环环372-4d溴麝香草酚溴麝香草酚蓝由蓝由绿色变绿色变为深兰色为深兰色。E.coil、肠细菌、肠细菌1-2环环3748h呈固体为呈固体为阴性阴性呈液体为呈液体为阳性阳性E.coli、产气杆菌、产气杆菌1-2环环

24、室温室温2-3dE.coli加碘液加碘液苏云金杆菌苏云金杆菌否则为阴性否则为阴性有透明圈为有透明圈为阳性阳性1d【】【】【实验要求与安排实验要求与安排】要求：根据国标检验程序每个小组从准备材料到检验结要求：根据国标检验程序每个小组从准备材料到检验结果要独立完成检验任务，并呈交检验报告。果要独立完成检验任务，并呈交检验报告。安排：安排：1、根据学号顺序、根据学号顺序4个人为一个检验小组。个人为一个检验小组。 2、每个小组购置四种不同的罐头产品（最好购、每个小组购置四种不同的罐头产品（最好购买到可能会有问题的产品）。买到可能会有问题的产品）。 3、 利用课余时间提前准备实验材料，并最终由利用课余时间提前准备实验材料，