乙肝两对半标准操作规程POS

1、乙肝五项（乳胶法）操作规程 POS1 .检测目的乙型肝炎病毒标志物 （HBsAg HBsAh HBeAg HBeAB HBcAb） 检测。2 .测定原理HBsAg检测采用双抗体夹心法原理，试剂含有被事先固定于膜上 测试区（T区）的抗体。检测时，标本滴入试剂加样处，标本与预包 被的乳胶颗粒（即标记物）结合的 HBsAb （即标记抗体）反应，该结 合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，乳胶抗体（标记抗体） 在层析过程中先与标本中的 HBsAg结合，随后结合物会被固定在 T 区膜上的HBsAb捕获，形成HBsAb标记抗体-HBsAg-HBsAbM合物， 从而在T区形成一条红杠。如为阴性，则 T区没

2、有红杠。HBsAb检测采用双抗原夹心法原理，试剂含有事先固定于膜上测 试区（T区）的HBsAg检测时，标本滴入试剂加样处，标本与预包 被的乳胶颗粒结合的HBsAg反应（即标记抗原）反应，该结合物随之 在毛细效应下向上层析。如是阳性，乳胶抗原（标记抗原）在层析过 程中先与标本中的HBsAb结合，随后结合物会被固定在 T区膜上的 HBsAg捕获，形成HBsAg标记抗原-HBsAb-HBsAg复合物，从而在T 区形成一条红杠。如为阴性，则 T区没有红杠。HBeAg检测采用双抗体夹心法原理。试剂含有事先固定于膜上测 试区（T区）的HBeAb检测时，标本滴入试剂加样处，标本与预包 被的乳胶颗粒结合的HB

3、eAb反应（即标记抗体）反应，该结合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，乳胶抗体（标记抗体）在层析 过程中先与标本中的HBeAg结合，随后结合物会被固定在 T区膜上 的HBeAb捕获，形成HBeAb标记抗原-HBeAg-HBeAtft合物，从而在T区形成一条红杠。如为阴性，则 T区没有红杠。HBeAg HBcAb采用竞争抑制法原理，试剂含有事先固定于膜上测试区（ T区）的抗 体。检测时，标本滴入试剂加样处，随之标本在毛细效应下向上层析。如标本中含有相应的抗体，则同膜上测试区（T）的单克隆抗体竞争，与 预包被在乳胶颗粒上的相应抗原反应。 如标本中没有相应的抗体，则 预包被在乳胶颗粒上的相应抗原

4、与膜上测试区 （T）的单克隆抗体全部 结合。阳性标本，测试区（T潜没有红色条带；阴性标本，测试区（T） 会出现明显的红色条带。3 .标本采集样本采集后应尽快分离血清或血浆以避免溶血。 检测进应尽量使 用新鲜的样本。样本若不能及时送检，可在 2-8C冷藏3天。长期保 存需冷冻于-20C,忌反复冻融。发臭、溶血等异常样本请勿使用。4 .试剂艾博生物医药有限公司5 .操作步骤5.1 使用前将试剂板和血清/血浆标本恢复至室温 （2030%）。 从原包装铝箔袋中取出试剂盒（注意：在扣开铝箔前应先恢复至室温）， 在1小时内应尽快地使用。5.2 将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血清/血浆标本，逐滴垂

5、直加入于试剂板的 五个加样子L中（每孔2-3滴）5.3 加样后立刻开始计时，等待红色条带的出现，在15分钟时读 取测试结果。在20分钟后读 取的结果无效。6 .结果判定由于前三个项目HBsAg HBsAb HBeAg使用双抗体（原）夹心法原 理，后两个项日HBeAh HbcAb使用竞争法原理。因此前一：个项日 与后两个项目判读方法是不同的，请注意区别。6.1 HBsAg HBsAb HbeAg6.1.1 阳性（十）:两条红色条带出现。一条于测试区（T）内，另一条 位于质控区（C）阳性结果表明：标本中含有待测物质。6.1.2 阴性（-）:质控区（c）出现一条红色条带，在测试区（T）内无红 色条带

6、出现。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。6.1.3 无效：质控区（c）未出现红色条带，表明不正确的操作过程 或试剂盒已经变质损坏。在 此情况下，应再次仔细阅读说明书，并 用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号 产品，并与当地供应商联系。6.1.4 注意：在进行HBsAg HBsAb HbeAg测试时，测试区（T）内 的红色条带可显现出颜色深浅 的现象。只要在规定的观察时间内， 不论该条带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应该判为阳性结果。6.2 HBeAb HBcAb6.2.1 阳性（+）:仅质控区（C）出现一条红色条带.在测试区（T）内无红色条带出现。阳性结果表明：标

7、本中含有待测物质6.2.2 弱阳性（十）:质控区（C）出现一条红色条带，在测试区（T）内有 非常弱的红色条带出现。阳性结果表明：标本中含有待测物质。6.2.3 阴性（-）:两条红色条带出现。一条于测试区（T）内，另一条 位于质控区（Cb阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。6.2.4 无效：质控区（C床出现红色条带，表明不正确的操作过程 或试剂盒已经变质损坏。在此情况下，应重新测试。如果问题仍然存 在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。7 .质量控制7.1 请控制判读时间，测试结果应在测定开始后20分钟左右读取, 30分钟后读判定无效。7.2质控区内（C区）一条红色条带的出现是试

8、验结果可靠的前提。质控内（C）所显现的红色条带是判定标本是否足够， 层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。8 .注意事项8.1 乳胶法乙肝五项检测试剂板（血清/血浆）只是定性的筛选乙 肝病毒血清标志物的存在，不能确定血样中病毒的含量。8.2 由于在技术上和操作上可能出现的失误，同时也由于标本中 存在的干扰物质，检测结果可能有错误。对可疑结果应作相应的进一 步检测。8.生物安全防护8.3 在检测前，所有标本均应视为“阳性”标本即生物危险 品。8.2如操作中不慎洒落血液，要及时对污染台面消毒处理。8.4 操作前一定要做好自身防护（穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套）8.5 HBV对低温、

9、干燥、紫外线、70%乙醇均有耐受性。煮沸100c 10分钟、高压蒸汽灭菌121c15分钟或加热160c2小时均可灭活 HBV。510g/L次氯酸钠30分钟，1: 4000福尔马林37c72小时， 0.5%过氧乙酸15分钟均可破坏其传染性。9 .临床意义9.1 HBsAg阳性：血清HBsAg阳性，表示受检者处于 HBV的感染 状态。HBsAg也可从许多乙肝检验对象体液和分泌物中测出， 如唾液、 精液、乳汁、阴道分泌物等。9.2 HBsAb阳性：多见于乙型肝炎处于恢复期或既往曾感染过 HBV, 现在已恢复，而且对HBV有一定的免疫力；同时，HBsAb阳性是对接 种乙肝疫苗后产生效果，即接种免疫成功

10、的指标。9.3 HBeAg阳性：见于HBV感染的早期，表示血液中含有较多的病毒颗粒，提示肝细 胞有进行性损害和高度传染性；乙型肝炎加重之前，HBeAg即有升高， 有助于预测肝炎病情，HBeAg持续阳性，易转为慢性乙型肝炎；HBeAg和HBsAgt匀为阳性的孕妇，可以将乙型肝炎传播病毒给新生儿， 其感染的阳性率为70%90%。9.4 HBeAb阳性：多见于HBeAg转阴的检验对象，意味着HBV部 分被清除或抑制，病毒复制减少，传染性降低；部分慢性乙型肝炎、 肝硬化、肝癌检验对象可检出 HBeAb;在HBsAg和HBsAb阴性时， 如能检出HBeAh和HBcAb,也能确诊为乙型肝炎近期感染。9.5 HBcAb阳性：说明既往感染过乙肝病毒。它是感染病毒后最早呈阳性，也是最晚转阴性的一项，而且有些人一辈子都是阳性。附：HBcAb-lgG阳性：高滴度表示正在感染 HBV,低滴度则是既 往感染过HBV的指标，具有流行病学的意义。HBcAb-IgM阳性：抗-HBc