MRSA耐药机制及检测方法学习教案

1、会计学1MRSA耐药机制及检测方法耐药机制及检测方法第一页，编辑于星期六：二十点 四十八分。第1页/共29页第二页，编辑于星期六：二十点 四十八分。治疗困难，病死率高治疗困难，病死率高第2页/共29页第三页，编辑于星期六：二十点 四十八分。缓慢生长，在数小时反又迅缓慢生长，在数小时反又迅速增殖。速增殖。第3页/共29页第四页，编辑于星期六：二十点 四十八分。胺类、利福平均产生不同程胺类、利福平均产生不同程度的耐药，唯对万古霉素敏度的耐药，唯对万古霉素敏感。感。第4页/共29页第五页，编辑于星期六：二十点 四十八分。第5页/共29页第六页，编辑于星期六：二十点 四十八分。的难题的难题第6页/共2

2、9页第七页，编辑于星期六：二十点 四十八分。第7页/共29页第八页，编辑于星期六：二十点 四十八分。第8页/共29页第九页，编辑于星期六：二十点 四十八分。第9页/共29页第十页，编辑于星期六：二十点 四十八分。第10页/共29页第十一页，编辑于星期六：二十点 四十八分。中高亲和力中高亲和力PBPs结合结合- 内酰内酰胺类抗生素失活后，胺类抗生素失活后， PBP2a可代替可代替PBPs，维持细菌的生，维持细菌的生长和存活，从而使长和存活，从而使MRSA表现表现出耐药性出耐药性第11页/共29页第十二页，编辑于星期六：二十点 四十八分。端反向重复序列，且均插入到端反向重复序列，且均插入到环状染色

3、体的环状染色体的SmaIG部位编部位编码码A蛋白的蛋白的spa基因和腺嘌呤生基因和腺嘌呤生物合成必须的物合成必须的purA基因之间，基因之间，具有位置特异性具有位置特异性第12页/共29页第十三页，编辑于星期六：二十点 四十八分。粒中，使耐药性进行水平性粒中，使耐药性进行水平性的转移或者在不同家系的葡的转移或者在不同家系的葡萄球菌间传播萄球菌间传播第13页/共29页第十四页，编辑于星期六：二十点 四十八分。化，活化的化，活化的mecR1蛋白能够去蛋白能够去除除mecI蛋白对蛋白对mecA基因地阻基因地阻遏作用，使遏作用，使mecA编码产生编码产生PBP2a蛋白蛋白第14页/共29页第十五页，编

4、辑于星期六：二十点 四十八分。第15页/共29页第十六页，编辑于星期六：二十点 四十八分。第16页/共29页第十七页，编辑于星期六：二十点 四十八分。第17页/共29页第十八页，编辑于星期六：二十点 四十八分。MRSA对甲氧西林的高度耐对甲氧西林的高度耐药，其机制尚未阐明药，其机制尚未阐明第18页/共29页第十九页，编辑于星期六：二十点 四十八分。1femA和和femB为两个相连的开放阅读框，对细菌细胞壁的五甘氨酸侧链以及肽间桥的生物合成是必需的。当其失活时，为两个相连的开放阅读框，对细菌细胞壁的五甘氨酸侧链以及肽间桥的生物合成是必需的。当其失活时， MRSA对对-内酰胺酶类抗生素以及多种其它

5、类抗生素的耐药性降低内酰胺酶类抗生素以及多种其它类抗生素的耐药性降低2femC的作用引起谷氨酰胺合成酶基因的作用引起谷氨酰胺合成酶基因glnA转录和活化及异谷氨酰胺的酰胺化，其失活时，糖肽的交叉连接降低，转录和活化及异谷氨酰胺的酰胺化，其失活时，糖肽的交叉连接降低，MRSA对对-内酰胺酶类抗生素耐药性降低内酰胺酶类抗生素耐药性降低 2femF基因的编码产物涉及基因的编码产物涉及L-赖氨酸与胞壁酰二肽链的连接，其突变失活时引起的耐药性的改变得具体机制还有待研究。赖氨酸与胞壁酰二肽链的连接，其突变失活时引起的耐药性的改变得具体机制还有待研究。femD和和femE对细菌的确切作用还未阐明对细菌的确切

6、作用还未阐明 第19页/共29页第二十页，编辑于星期六：二十点 四十八分。 药物敏感试验方法药物敏感试验方法 NCCLS推荐使用药敏纸片法、苯唑西林推荐使用药敏纸片法、苯唑西林(oxacillin)盐琼脂筛查法、盐琼脂筛查法、-内酰胺酶检测、内酰胺酶检测、E-test 试验和试管双倍稀释法等试验和试管双倍稀释法等 缺点缺点：易受培养基成分影响，较耗时，且错误应用抗生素会引起更为严重耐药的耐药菌株的出现：易受培养基成分影响，较耗时，且错误应用抗生素会引起更为严重耐药的耐药菌株的出现 快速乳胶快速乳胶(Latex) 凝集法凝集法PBP2a 单克隆抗体致敏的乳胶颗粒与单克隆抗体致敏的乳胶颗粒与MRS

7、A 的膜蛋白提取物作用的膜蛋白提取物作用,产生肉眼可见的凝集颗粒产生肉眼可见的凝集颗粒,证实有证实有PBP2a 的存在的存在,以此判断该菌为以此判断该菌为MRSA 此法简便、快速、准确此法简便、快速、准确,检测检测1 份标本只需份标本只需15 min，和，和PCR法一样有极高的灵敏度和特异性，有较好的应用前景法一样有极高的灵敏度和特异性，有较好的应用前景 免疫学方法免疫学方法基质辅助激光解吸电离基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱飞行时间质谱 可简易分析低纯度的固体混合物样品可简易分析低纯度的固体混合物样品, 检测范围可到检测范围可到350 KD 。根据细菌的全细胞图谱差异，鉴定未知细菌。耗时少

8、，重复性高。根据细菌的全细胞图谱差异，鉴定未知细菌。耗时少，重复性高 缺点：要求特殊仪器，结果处理方法复杂，不适于普遍开展缺点：要求特殊仪器，结果处理方法复杂，不适于普遍开展第20页/共29页第二十一页，编辑于星期六：二十点 四十八分。 分型方法分型方法传统方法是噬菌体分型技术传统方法是噬菌体分型技术,根据分离菌株对各噬菌体的敏感性和噬菌体裂解情况进行分型。目前采用的一些分子生物学进行基因分型的方法有：脉冲场凝胶电泳根据分离菌株对各噬菌体的敏感性和噬菌体裂解情况进行分型。目前采用的一些分子生物学进行基因分型的方法有：脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresi

9、s , PFGE)、逆向凝胶电泳、逆向凝胶电泳(field inversion gelelectrophoresis ,FIGE) 、随机扩增多态性、随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA，RAPD）、）、 多位点序列分型（多位点序列分型（multilocus sequencing typing，MLST）等）等 mecA 基因高度保守基因高度保守,根据其核苷酸序列设计不同的引物根据其核苷酸序列设计不同的引物,用用PCR对菌株中对菌株中PBP2a 靶靶DNA 特定片段特定片段mecA 进行扩增进行扩增,以以mecA 基因存在与否判定是否为基因存在

10、与否判定是否为MRSA 菌株，不受药敏实验条件的影响菌株，不受药敏实验条件的影响,因而特异性高因而特异性高,被公认为是其诊断的被公认为是其诊断的金标准。金标准。mecA和和femB 基因表达均为阳性基因表达均为阳性,方能确诊为方能确诊为MRSA 第21页/共29页第二十二页，编辑于星期六：二十点 四十八分。第22页/共29页第二十三页，编辑于星期六：二十点 四十八分。霉素肠球菌霉素肠球菌第23页/共29页第二十四页，编辑于星期六：二十点 四十八分。药物合用，加强治疗效果药物合用，加强治疗效果第24页/共29页第二十五页，编辑于星期六：二十点 四十八分。是滥用抗菌药物。是滥用抗菌药物。第25页/

11、共29页第二十六页，编辑于星期六：二十点 四十八分。目前临床滥用抗生素的现象，对目前临床滥用抗生素的现象，对MRSA的流行起了一定的扩散作用的流行起了一定的扩散作用 ，第三代头孢菌素的长期使用与，第三代头孢菌素的长期使用与MRSA的出现率呈平行关系的出现率呈平行关系 医护人员检查病人前后要严格洗手消毒，有条件应用一次性口罩、帽子、手套，医疗用品要固定，以防院内交叉感染医护人员检查病人前后要严格洗手消毒，有条件应用一次性口罩、帽子、手套，医疗用品要固定，以防院内交叉感染 合理使用抗生素合理使用抗生素 早期检出带菌者早期检出带菌者 加强消毒制度加强消毒制度 医院应加强对新入院及医院应加强对新入院及MRSA易感者的检查，尤其是烧伤病区、易感者的检查，尤其是烧伤病区、ICU、呼吸病房、血液科和小儿科等。同时细菌室应选用准确的检测手段，发现、呼吸病