胆固醇酯转运蛋白(CETP)-TaqIB基因多态性与散发性阿尔茨海默病

1、胆固醇酯转运蛋白(CETP)-TaqIB基因多态性与散发性阿尔茨海默病 分类号 密级 UDC 编号 中 南 大 学 CENTRAL SoUTHUNIVERSITY 硕士学位论文 论文题目： 胆固醇酯转运蛋白 CETP TaqIB 基因多态性与散发性阿尔茨海默病 学科、专业： 神经病学 研 究 生： 王鹏 导师姓名及其 专业技术职称： 肖志杰教授 中 南 大 学 二零一一年五月 一令一一，牛血月 分类号VDC 密级 硕士学位论文 散发性阿尔茨海默病 The betweenthe ester仃ansfer relationship choleste拶l and protein CETP genep

2、olymorphism sporadic AIzheimersdisease 作者姓名： 王鹏 学科专业： 神经病学 学院 系、所 ：湘雅二医院 指导老师： 肖志杰教授 一 论文辩论日期一三一一：兰_ 三 辩论委员会主席 中 南 大 学 二零一一年五月 一令一一，年直月 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作 及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方 外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获 得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的 同志对本研究所作的奉献均已在论文中作了明确的说明。 作者签名：

3、2壁竺塑 日期：j銎旦年白上日 学位论文版权使用授权书 本人了解中南大学有关保存、使用学位论文的规定，即：学校有权 保存学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学 位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或局部内容，可以 采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息 研究所将本学位论文收录到?中国学位论文全文数据库?，并通过网络向 社会公众提供信息效劳。 硕士学位论文 中文摘要 摘要 目的 研究阿尔茨海默病 AD 患者和正常老年人之间血清脂质水 与散发性阿尔茨海默病 SAD 关系及其对血脂、认知功能的影响。 方法采用病例对照研究，对lOO例散发性阿尔茨海

4、默病患者和102 例健康对照者进行研究。全部被试者均进行简易精神状态量表 MMSE 、 分；采用氯仿法抽提外周血白细胞基因组DNA、多聚酶链式反响和限制 性片段长度多态性法 PCR-RFLP 测定CETPTaqIB基因型。 结果 48、B28217 CETPTaqIB三种基因型频率分别为B18135、B182 与对照组B181304、B 因频率分布无显著性差异p O05 。不同基因型之间血清高密度脂蛋白、 甘油三酯、胆固醇水平无统计学差异。 2在认知功能评分方面，AD组韦氏记忆量表、威斯康星卡片分类测 验成绩较对照组明显偏低 p O05 ；在AD组中记忆商数、完成分类数 与MMSE得分呈正相关

5、 O05 ，与胆固醇水平呈负相关趋势，但无统 计学意义 p O05 。 硕十学位论文 中文摘要 1Bl纯合 绩差异无统计学意义，B2等位基因携带者长时记忆评分高于B WCST中完成分类数呈下降趋势，持续性反响呈上升趋势，但差异无统 计学意义。 结论1血清胆固醇水平升高与阿尔茨海默病发病可能有关。 2CETPTaqIB基因多态性与老年人血脂水平可能无关。 3CETP-TaqIB基因多态性与阿尔茨海默病发病可能无关。 与短时记忆、瞬时记忆无关；不同基因型间威斯康星卡片分类测验评分 无明显差异。 关键词阿尔茨海默病， 胆固醇，认知功能 CETP-TaqIB， U 硕士学位论文 英文摘要 ABSTRA

6、CT TIo thedifIferenceinthe mnction objectiVeexplore cognition betweenAlzheimertsdisease and controlsTb patientshealthlyaged theassociationbeweenthe estertransfer inVestigate choleste叮l andblood protein CETP 1aqIBpolymo叩hism lipid disase，the mnction patientscognition 1 caseswith MethodsThiswaSacaseco

7、ntrol enrolledOO study，which AlzheimerIdiseaseandl02 controlsAllthe weremeasured healmy objects withminimentalstate Hachinshischemicscore examination M口SE and thesame mildtomodetatewithADand61 HIS ，at time，49 patients healthy controlsweremeasuredwitllWechsler Wiscons访 Memo叫Scale 、7vMS and card chain

8、 sortingtest WCST Polymerase usedtodetemine CETPTaqIBgene len曲polymo讪ism PCR_RFLP was polymo叩hism ResuIts1The ofAD were CETPTaqIBgen啊pe能quenciespatients 48and distribution BlBI35、BlB2 B28217；the genotype CETP-1aqIB inthe withtheno姗olcontrolwere 539and subjects BlBl304、BlB2 167There、rasno association

9、in B282 genotype significant CETPTaqIB andalleledisibutionbetweenAD andthe controls patients healthy p O05 Therewerenodi di您：rent intheleVelofTG、 frerences锄ong genotype HDL、TC nI 2The scoresofWbchsler andWisconsinCard Memo拶Scale Sorting Tbst were lowerthanmatinnormal ifl舢 patients obVioysly OOl，ZKO0

10、5 The showedthattherewere reg胛ssionanalysis positive con-elationsbeMeenthescoreofMMSEand Memo叮Quotient classification MQ ，Complete numbersinAD trendof patientsThenegative correlation wasfoundbe铆eentheleVel ofsellJmTCand MQ，Complete classificationno number，but statistically significancep 005 3 Inthe

11、wasno differenceinthe studypopulation，t11ere signmcant score of，MS BB and l l amongCETPTaqIB l B282 genotype，BB29enotype B2allel had scorethanB1B1 there genotype，but gene higher gentype，and was obVious claSsificationnumberwas diaerence； Complete gradually reduced thethree Sustained was among genotyp

12、es， responsegradually therewerenoobvious increased，but diaerences ConcIusionThe increasedserumcholesterolbeassoCiatedwith might ADTherewasnotobVious correlationbe似een CETPTaqIBgene andAlzheimerts polymo叩hism diseaseCETP一1aqIBpolymo印hismmight notbe associatedwithme blood lipid profileCETP1hqIBpolymo印

13、hism beaSsociatedwith elder with might long-tem memo巧inpeople，not instan伽eous shorttem werenotdiaerent memo拶and memo叮；there mWCSTExecutivemnction among waSnt CETPTaqIBgenotypes innuencd byCETP-TIaqIB polymo印hism Keywords Alzheimers cholesterol，CETP-TaqIB，disease，cognition IV 硕七学位论文 缩略词表 V 硕士学位论文 目录

14、目录 中文摘要I 英文摘要III 缩略词表V 第一章前言1 第二章材料与方法3 21研究对象3 22主要仪器及试剂4 23研究方法5 24酶切结果分析及DNA测序7 25统计学处理7 第三章结果8 31阿尔茨海默病组与对照组一般资料比拟8 32阿尔茨海默病组与对照组生化指标比拟g 33阿尔茨海默病组与对照组认知功能比拟9 34阿尔茨海默病组与对照组CETP1硇IB基因型分布比拟13 35CETP1细IB基因型对血脂的影响14 第四章讨论19 41胆固醇与阿尔茨海默病19 42 CETPIB基因型在不同人群分布比拟及对血脂的影响19 43CETPTaqIB基因多态性与阿尔茨海默病2l 44 CE

15、TPT姻IB基因型对认知功能影响22 第五章结论25 参考文献26 附蜀毛29 l 综j2睦3 致 谢45 VI 硕士学位论文 第一章前言 第一章 前言 dise嬲e 阿尔茨海默病 AlzlleimersAD 俗称老年痴呆，是老年人常见病之一，早 期表现为近期记忆力下降，进而出现持续的认知功能衰退、失语、运动能力丧失伴 有人格改变。随着人口老龄化进程加快，AD发病率逐渐上升。据估计，在2005年 我国有老年痴呆患者约500万人，且每年有30万新发病例【l】；中国阿尔茨海默病协 会一项调查说明我国每个AD病人平均治疗本钱约需112万元人民币，庞大的治疗 费用给国家及患者家庭带来沉重的经济和社会负

16、担，严重危害人们的身体健康和生 活质量。因此对阿尔茨海默病开展根底和临床方面研究，具有非常重要的意义。 阿尔茨海默病病理特征是大脑皮质和海马区域老年斑沉积、神经元内神经原纤 维缠结和神经元丧失，研究发现老年斑主要成分为淀粉样肽如Ap40和Ap42大量聚 集。神经原纤维缠结那么是由tau蛋白异常高度磷酸化，凝聚成双股螺旋丝形成。国内 外大量研究【2卅发现AD患者血清脂质水平变化类似于冠心病人：胆固醇参与淀粉样 前体蛋白处理加工、促进淀粉样肽形成：高胆固醇饮食后促进tau蛋白相关蛋白激酶 活性上调，出现大量高度磷酸化的tau蛋白；近年来分子遗传学进展也提示遗传因素 在阿尔茨海默病发病中发挥重要作用

17、，与胆固醇代谢相关的如载脂蛋白El引、胆固醇 发生有关，并已成为研究热点。所以从脂代谢角度结合遗传因素，可能有助于进一 步说明AD的病因及发病机制。 与低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白中甘油三酯交换，再被肝脏的LDL及VLDL受体摄 取进入肝细胞，在胆固醇逆向转运中起到关键作用，从而调节各种脂蛋白颗粒大小 和组成，在脂质代谢中发挥重要作用【lol。一些研究发现fll】，脑组织中胶质细胞可合 成和分泌CETP，提示其在中枢神经系统脂质转运和再分布中也发挥作用。该基因存 在多个位点变异，引起CETP活性局部或全部却失，改变血浆中高密度脂蛋白胆固醇 V等位基因纯合子HDLC水平显著升高，但AD发病风险无

18、明显增加 硕士学位论文 第一章前言 基因携带者相比，V等位基因纯合子AD发病风险增加了167倍 多态性V等位基因纯合子可能通过影响中枢胆固醇代谢途径，增加AD发病风险。 而对于CETP呦IB基因多态性与阿尔茨海默病相关性研究目前还很少。仅见l 型和等位基因频率差异无明显统计学意义。 目前对于我国南方汉族人群CETP阳IB基因多态性与阿尔茨海默病及其血脂 水平、认知功能之间关系的研究尚未见报道。通过病例对照研究比拟血清胆固醇、 高密度脂蛋白水平等在AD患者和正常人群之间的差异，调查两组人群之间的认知 功能差异及影响因素，观察CETP嘲IB基因多态性在AD患者和正常对照人群中分 布差异，并探讨CE

19、TPTaqIB基因多态性与AD患者血清胆固醇、高密度脂蛋白水平 及认知功能之间的关系。 2 硕士学位论文 第二章材料与方法 第二章材料与方法 21研究对象 散发性阿尔茨海默病患者共loo例，其中男性37例，女性63例，年龄均大于55岁， 住院的非阿尔茨海默病健康老年人，局部来源于湘雅二医院体检中心健康体检者共 例、初中35例及初中以上23例，平均年龄770士63岁。所有研究对象均为在湖 南省长期居住的汉族居民，研究对象间无血缘关系，均获得知情同意。 211病例组入选标准 所有患者均进行临床检查、简易精神状态量表筛查 MMSE ，得分低于临界值 缺血指数量表g分；汉米尔顿抑郁量表 17项版本 7

20、分；并经过至少1名神经 科医生诊断，符合美国国立神经病学、语言障碍和卒中老年痴呆和相关疾病学会工 根据临床病症、病史及神经影像学检查，排除帕金森性痴呆、脑炎后遗症、正 常颅压脑积水及脑外伤后遗症等引起的痴呆；排除脑血管病史、脑肿瘤及其他神经 系统疾病史、精神疾病史及精神病家族史。 212对照组入选标准 对照组纳入标准：与病例组在年龄、性别、生活环境相匹配的非痴呆老年人， MMSE得分大于划界值。经详细询问病史及体格检查，排除抑郁、脑血管疾病及 其他神经系统疾病；无严重的肝肾功能不全、恶性肿瘤、血液病、感染疾病。 213相关量表 stateexaminationMMSE 1简易精神状态检查量表

21、minimental ischemic 2HaChinski缺血指数量表 HachinsIdsco阳HIS 3汉密顿抑郁量表 Hamilton ScaIe Dep代ssionHAMD ScaIeWMS 4韦氏记忆量表 WechsIerMemory 3 硕士学位论文 第二章材料与方法 card test 5威斯康辛星片分类测验 Wisconsin WCST 改进版 sorting 22主要仪器及试剂 221主要仪器 精密可调微量移液器 德国Eppendorf公司 Tip头 美国AXYGEN公司 20冰箱 中国容声 高速离心机 德国Eppendorf541C 2700型PCR基因扩增仪 美国ABI

22、公司 DYY-6C型电泳仪 北京六一公司 电泳槽 北京六一公司 DK8A型电热恒温水浴箱 上海精宏实验设备公司 高温可调烤箱 上海精宏实验设备公司 BSll0S型分析天平 德国S舭rius公司 微波炉 中国格兰仕 II图像分析处理系统 Eagleeye 美国S咖ene公司 LISA300、，A型温控式高压灭菌锅、 武汉英贝科学仪器公司 恒温水浴槽 北京四环仪器制造厂 222主要试剂 饱和酚 北京索莱宝 蛋白酶K 上海生工 琼脂糖 MBI公司 乙二胺四乙酸 EDTAl 上海捷瑞生物工程公司 十二烷基磺酸钠 SDS 上海捷瑞生物工程公司 O9mo儿仃is 上海捷瑞生物工程公司 O9mo。硼酸 上海

23、捷瑞生物工程公司 MBI 呐l限制性内切酶 Fe肌e吡塔公司 MastenniX 天根生化科技 21细PCR 6DNA电泳载样缓冲液 天根生化科技 MarkerI 天根生化科技 Goldew I型核酸染色剂 天根生化科技 其他试剂均为国产分析纯 4 硕士学位论文 第二章材料与方法 223 CETPTaqlB弓l物设计 引物设计参考国外有关文献【9】，由上海博尚生物技术合成： TAGCCCAGAGAGAGGAGT 上游引物：5CAC GCC3； AGC GCCGCACACTAA 下游引物：5CTG CCA C3。 扩增序列位于CETP基因第1内含子内，扩增产物长度为535bp。 23研究方法 2

24、31一般资料收集 缺血指数量表 HIS 进行问卷调查评分、局部被试者接受汉米尔顿抑郁量表 删D 评分；包括研究对象的姓名、性别、年龄、文化程度、病程、收缩压、舒张压、家 族史、糖尿病史、高血压病史、高脂血症史、饮酒史、吸烟史及头部外伤史。 2-32认知功能测验 采用龚耀先修订的成人韦氏记忆量表 WMS 甲式选取其中局部工程，对AD组和 对照组局部被试者进行记忆力测验量化评分。本研究中测验包括长时记忆：经历、 定向、计数顺序lloo、100_1；短时记忆：图片回忆、视觉再认、视觉再生、联 想、理解；瞬间记忆：背数 顺背、倒背 。根据每一分测验的粗分 原始分 查得量 表分，根据量表总分，结合被试者

25、的年龄，换算为记忆商 MQ 。 采用刘哲宁改进的威斯康星卡片分类测验 WCST 评估局部被试者的执行功能。 该测验需要4张刺激卡片和48张反响卡片，卡片上绘有l-4个数量不同由红、绿、蓝、 黄不同颜色和方、圆、五星、三角不同形状的图案。主试者将刺激卡置于前方，要 求被试将反响卡依次放在刺激卡下方，主试者掌握分类原那么 颜色_形状_数目 并告诉被试者“对与“错，被试根据主试者的反响来推测应根据何种原那么将卡片分 类。当被试连续6次分类正确后转换下一个形式分类，依次类推，直到48张卡片分类 完毕。测量指标包括：完成分类数；正确应答数；错误应答数；持续性应答 数：持续性错误数；非持续性错误数。该测验

26、测量被试者抽象分类、思维概念 及转换心理定势的能力，可反映额叶执行功能。 233血液标本采集及生化指标测定 对入选的“很可能AD患者和健康对照者，采集清晨空腹静脉血5ml，装入EDTA 5 硕士学位论文 第二章材料与方法 抗凝管，放置于20冰箱保存，用于DNA的提取；空腹12小时后，全部受试者于 检测当日清晨抽取空腹静脉血5ml，在本院检验科全自动生化分析仪，测定血清甘油 酸转氨酶 ASD、尿酸 UA 。 234氯仿法抽提外周血白细胞基因组DNA 1取外周血35ml，装入15IIll离心管中，参加23倍1Bloodbu腩r，充分 lysis miIl。弃上清液。 震荡混匀，冰上静置30mill

27、至清亮。以3000rpm，离心15 2沉淀中参加Nucleic lysisbuf|衙1500肛l，充分匀浆 1ml5mlb100d 。 20SDS，摇匀，直至呈粘性透明状。 3参加150斗1 4参加5肛l的蛋白酶K 20m咖1 ，震荡混匀，37过夜。 6小心吸取上清，移液于另一15“离心管，每管参加2倍无水乙醇 预冷 ，来 回颠倒，可见白色絮状物 DNA 。 7用灭菌玻璃钩针，将DNA钩出放置于15砌Eppendorf管内。 8用70乙醇冲洗两次后，烤箱50枯燥，约3miIl。 9枯燥后参加100斗llTE液，震荡后，4放置24小时或过夜，溶解DNA。 10取20pl溶解DNA于200pl 2

28、0冰箱保存备用。 2-35多聚酶链式反响 PCR 1在O2ml PCR反响体系含：模板DNA Eppendorf管内配制25ul反响体系，25pl M嬲terlix 125pl； 20np1 1pl；上游引物和下游引物均为 10pM 1山；21的PCR 加灭菌ddH20至25pl，震荡混匀。 2应用自动循环仪扩增。扩增条件：预变性940C3min，反响循环：变性940C 50秒、退火580C50秒、延伸720C1分钟，循环30次；最后720C延伸lO分钟。 Goldew 琼脂糖粉放入后微波炉内加热熔化。冷却至60，参加3“l I型核酸染色 剂，混匀，倒入电泳槽中，插入梳子，待凝固。 4向电泳槽

29、中倒入lxTBE，其量以没过胶面2衄为宜，小心移去梳子。去除 样品孔内有气泡。 6 硕士学位论文 第二章材料与方法 Markerl分别上 5按5“l扩增产物混匀lpl6DNA电泳缓冲液，将混合物及5 Ll 样，电压looV，电泳30分钟后紫外检测灯下观察目的基因扩增片段。 236限制性片段长度多态性测定 在02ml 补充体积至20“L，在65恒温箱保温2小时。采用2琼脂糖凝胶电泳别离酶 I酶解片段作为DNA片段标 切产物，将5“l酶切产物参加上样缓冲液，以M扯er view 准物，Gold I型核酸染料染色，电泳30分钟后紫外灯下观察结果并照相记录。 24酶切结果分析及DNA测序 Bl有酶切位

30、点，等位基因B2无酶切位点，因此三种基因型的电泳图谱 见附录 535bp。 测序，测序图 见附录图22、23 。 25统计学处理 应用SPSS130软件包进行统计分析。计量资料统计指标均进行正态性检验， 不符合正态分布的指标，经对数转换呈正态分布后进行统计分析。计量资料以均 数士标准差 j插 表示。计量资料的两组间比拟采用独立样本，检验，两组以上采 的组间比拟采用卡方检验。符合正态分布的变量资料间相关性分析采用pearson 相关分析。双侧尸 O05为具有统计学显著性差异。 7 硕士学位论文 第三章结果 第三章结果 31阿尔茨海默病组与对照组一般资料比拟 如表31所示，阿尔茨海默病组与对照组在

31、年龄、性别构成无显著差异，在老年 人常见的血管危险因素如高血压病史、糖尿病史、冠心病史，生活方式如吸烟史、 饮酒史，病例组和对照组相比差异无统计学意义 P 005 ，但病例组中高脂血症患 者明显多于对照组，差异有统计学意义 P O05 。 表31两组组间一般临床资料比拟 注：与对照组比拟，木P 005，料尸 00l 32阿尔茨海默病组与对照组生化指标比拟 经正态性检验发现血清空腹血糖水平呈偏态分布，经对数转换后呈正态分布。 如表32所示在血脂指标中高密度脂蛋白胆固醇 HDLC 、低密度脂蛋白胆固醇 组，但差异无统计学意义僻 o05 。 R 硕士学位论文 第三章结果 表32阿尔茨海默病组与对照组

32、生化指标比拟 xs 注：与对照组比拟，卵 005 33阿尔茨海默病组与对照组认知功能比拟 按照世界卫生组织?国际疾病分类?第10版 ICD一10 痴呆严重程度分级：轻 度：记忆障碍涉及日常生活，但能独立生活，主要影响近记忆，而远记忆可以受或 不受影响；中度：较严重的记忆障碍，已影响到患者独立生活，可伴有括约肌障 碍；重度：严重的记忆智能障碍，完全需他人照顾，有明显括约肌障碍。根据上 述标准，49例轻度和局部中度AD患者接受韦氏记忆量表 WMS 和威斯康星卡片 分类测验 WCST 评分；对照组中依自愿原那么有6l例被试者接受上述两量表评分。 331阿尔茨海默病与对照组WMs评分比拟 如表331所

33、示，与对照组比拟，阿尔茨海默病组WMS各项成绩均下降，在长时 482士056 存在统计学差异，说明病例组的时空间定向力、长时记忆受损；视觉再认 图片回忆 11士148vs696士382 、视觉再生 16l士119vs855士287 、 理解记忆 116士O87vs665士267 、联想学习 O86士124vs55l士38 、 AD患者短时记忆、瞬时记忆、注意力、理解能力受损突出，更易受累；病例组记忆 商数显著低于对照组。进一步，按长时记忆、短时记忆和瞬时记忆三种记忆类型分 类比拟，病例组记忆评分仍显著差于对照组 见图31 。 9 硕士学位论文 第三章结果 表331两组间1lMS测定成绩比拟 注

34、：与对照组比拟，叩 O05，P O01 332阿尔茨海默病组与对照组间wCST评分比拟 如表332、图32所示，与对照组比拟，阿尔茨海默病组WCST各项成绩中完 成分类数、正确数明显减少，差异有统计学意义 尸 001 ；而代表执行功能下降的 指标如持续性反响、持续性错误、非持续性错误显著增多，差异有统计学意义 尸 O01 。 表322两组间wCST测定成绩比拟 注：与对照组比拟，木P 005，料中 O0l lO 硕士学位论文 第三章结果 图31两组间不同记忆类型评分比拟 5O 目病例组 一对照组 奄 ? 嘲 桑 盟 堙 O 一I一 长时记忆 短时记忆 瞬时记忆 注：与对照组比拟，宰尸 O05木

35、宰尸 O01 4O 图32两组间wCST成绩比拟目病例组 3O 2O 螺镁工su参 lO O 完成分类数 正确数 持续性反响持续错误非持续错误 注：与对照组比拟，宰尸 O05料尸 001 333阿尔茨海默病组认知功能分析 病例组血清胆固醇 TC 水平、病程、年龄、MMSE得分、收缩压、舒张压均呈 正态分布，因此上述指标与代表记忆水平的记忆商数的双变量相关性分析采用 硕士学位论文 第三章结果 清胆固醇水平、病程、年龄、收缩压和舒张压无相关性 尸 005 。 表333病例组记忆商数与TC等指标的相关性分析 注：与对照组比拟，料P 00l 如表334、图3_4所示，AD组威斯康星卡片分类测验各项成绩

36、与血清胆固醇 TC 水平、病程、年龄、收缩压、舒张压均无相关 尸 005 ：完成分类数与患者MMSE 表334病例组wcST评分与TC等指标的相关性分析 注：宰尸 005料JP 00l 12 硕士学位论文 第三章结果 80 奄60 毒40 簟 赠20 0 0 5 1 0 1 5 Z0 Z5 30 MMS已得分 图33痛例组MQ与MMS已得分相关性 r O376尸 O01 2 繇 球l 淼 皤 硬O O 20 4 0 60 8O 记忆商敦 图州病例蛆钟CSr中完成分类数与MQ相关性 r 0。O408尸 OOl I 34阿尔茨海默病组与对照组CETPTaqB基因型分布比拟 型次之。其中等位基因频率

37、分布以Bl等位基因为常见基因，B2等位基因少见。按 选择的研究人群基因频率能够代表群体的基因分布。阿尔茨海默病组与对照组 CETPTaqIB基因型及等位基因的分布比拟采用卡方检验，结果显示两组间基因型及 等位基因的分布，差异无统计学意义 芦0615，尸 O763 。 13 硕士学位论文 第三章结果 表34病例组与对照组CETPTaqIB基因型分布比拟 35CETPTaqIB基因型对血脂的影响 纯合子携带者的血脂指标分布，差异仍无统计学意义 P 005 。 表35CET卜TaqIB基因型与血清TG等的关系 I B基因型对认知功能的影响 36CETPTaq 在记忆功能调查中，首先获得原始分再根据韦

38、氏记忆量表的各个计算公式推算 得出量表分，并以此为标准代表个体的记忆功能测验水平：最后各项量表分相加得 14 硕士学位论文 第三章结果 BlB2型和B282型三者在韦氏记忆量表中各项评分无统计学差异，在评价研究对象 总体记忆水平的记忆商数 MQ ，差异亦无统计学意义 尸 O05 。 表361 CElPTaqIB基冈型与韦氏记忆景表评分的关系 进一步按照长时记忆、短时记忆和瞬时记忆三种记忆类型比拟，如表362、图 37所示，B2等位基因携带者的长时记忆评分高于B181纯合子，差异有统计学意义 KO05 但在短时记忆、瞬时记忆评分中，两者间差异无统计学意义 胗O05 表362CETPTaqIB基冈

39、型中B2等位基冈与韦氏记忆晕表评分的关系 注：与对照组比拟，柙 O05 在威斯康星卡片分类测验中，完成分类数是测验结束后所完成的归类数，用来 测量被试者掌握分类概念的程度；正确应答数即所有符合所要求应对原那么的应答数： 15 硕士学位论文 第三章结果 上述两者评分越高代表被试者认知执行能力越强。如表363所示，在本研究中完成 合所要求应对原那么的应对数；持续性反响指明知根据某一属性来分类是错误的， 但还是继续按这一属性来分类：持续性错误数：指在分类原那么改变后，被试者不 能放弃旧的分类原那么，仍继续按原来分类原那么进行分类；上述三者评分越高代表 被试者认知执行功能越差，其中持续性反响为所有指标

40、中提示有无脑损害以及是 否有额叶损害的最敏感指标。如表中所示，持续性反响在BlBl型、BlB2型和 即B2等位基因携带者个体持续性反响数多于BlBl纯合子，但两者间差异无统 计学意义。 表363CETPTaqIB基因型与威斯康星卡片分类测验评分的关系 B181型 B182型 B282型 尸值 完成分类数 314291254217 21424l O48 正确数 257158822791157 19571280 049 2291588 O49 错误数 2521157 28431280 持续反响 98611581083791 127l1177 072 持续错误 640434 1083732 9807

41、82 023 非持续错误 177179017041362 17951422 O96 进一步比拟BlBl纯合子个体和B2等位基因携带者的威斯康星卡片分类测验成 绩，各项成绩间差异未见统计学意义 P 005 ，结果见表364。 表3-64CETP_TaqlBB2等位基冈与威斯康旱卡片分类测验评分的关系 16 硕士学位论文 第三章结果 弱 叁凳 ?20 董：重 0 长时 己忆 短时记忆 瞬时记忆 图35三种基因型问不同记忆类型评分比拟 l型 2型 历 2型 垢 欢肚工S呈 加 5 0 竟成分类觳 正确数 持续性反响 持续错误 非持续错误 图3-6三种基因型问wcsT评分比拟 17 硕士学位论文 第三

42、章结果 B181型 30 B182+B282型 25 求20 瑙l5 襄10 5 一L曲 O 长时记忆 短时记忆 瞬时记忆 图37B2等位基因与B181纯合子WMS比拟 注：与B1Bl型比拟，木K005 30 目B181型 25 B182+B282型 孵0 瞽5 茸o 5 O 硼一d坷 完成分类数 正确数 持续性反响 持续错误 非持续错误 图38B2等位基因与B181纯合子WCST比拟 18 硕士学位论文 第四章讨论 第四章讨论 对其研究越来越深入。编码人类CETP的基因位于16号染色体长臂l区2带，长度 布于肝脏、小肠及脂肪等组织中，其主要生理功能催化高密度脂蛋白 HDL 中胆固 脏的LDL

43、及VLDL受体摄取进入肝细胞，在胆固醇逆向转运中起到关键作用【13】。 CETP调节脂蛋白代谢，影响高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的质和量。目前有大量研 究发现胆固醇酯转运蛋白基因存在多个位点变异【14】，可引起其结构和功能异常，并 与血清脂质水平变化、动脉粥样硬化、冠心病【限161的发生开展密切相关。其中对 CETPTaqIB基因多态性研究较广泛，而阿尔茨海默病与血脂特别是胆固醇代谢异常 亦明显相关。但两者相关性的研究报道较少，因此有必要进一步探讨CETP-T姻IB基 因多态性对阿尔茨海默病患者血脂、脂蛋白水平的影响，及其与阿尔茨海默病的关 系。 41胆固醇与阿尔茨海默病 前瞻性队列研究进行荟萃

44、分析，时间跨度从3年到29年不等，共有14331名AD患者参 与调查，结果证实中青年血清高胆固醇水平与散发性AD发病风险增加有明显一致 性，其中两项研究显示胆固醇与ApoE4存在交互作用，对认知功能有较大影响。 且胆固醇水平与AD的严重程度有关。本研究结果也证明与对照组比拟，AD组血清总 密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、ApoAI明显改变。这提示高胆固醇水平 是AD发病的危险因素，降低胆固醇可能对AD的预防和治疗有益。 42 I CETPTaqB基因型在不同人群分布比拟及对血脂的影响 19 硕士学位论文 第四章讨论 是较常见的存在于人群中的遗传变异。该位点变异导致B2等位基因处酶切识别位

45、点 消失，由于其位于内含子内，所以并不影响CETP转录翻译后氨基酸序列。研究表 明，不同人群、种族之间的CETP一伽IB基因多态性分布频率有差异。在日本，B1 等位基因频率约为571；在欧洲白种人群为5660，均以Bl等位基因为优势基 因，而在美国非洲裔人群B1等位基因分布为74【19201。本研究检测我国湖南省老 上述日本、欧洲白种人群无明显差异。 由于胆固醇酯转运蛋白 CETP 介导胆固醇酯 CE 从高密度脂蛋白向富含载脂蛋 白B的脂蛋白如极低密度脂蛋白、中密度脂蛋白及低密度脂蛋白转运，从而调节血浆 究 PHS、NPHS、nleI沁ykjaVik 分析显示：在调整性别、年龄、饮酒、吸烟、体

46、重指数、糖尿病、LDLC等影响因素 577mmo儿、582I姗。儿，呈上升趋势；与甘油三酯水平也存在相关性 经过对数 调整后尸踟02 ，在上述三种基因型个体甘油三脂水平为183mmolL、180n吼。儿、 平显著升高；同时三种基因型间甘油三脂水平也存在显著差异 P 005 ，B282型 降趋势，但并没有统计学差异。 但亦有研究得出不同的结论，赵耀等【冽对北京421名中老年人进行血脂谱水平测 定和CETP1细IB位点多态性检测发现，不同基因型间HDLC水平无显著差异，TC、 硕士学位论文 第四章讨论 可能的原因有： 1 影响血脂水平变化因素较多，尚存在其他因素如吸烟、饮酒、年 子内，其基因突变并

47、不影响氨基酸序列，因而可能对其活性无明显影响； 3 CETP呐IB位点多态性与其基因内或其他影响血脂谱水平的基因变异位点呈连 锁不平衡，共同影响血脂水平特别是HDLC的变化。而这种连锁不平衡在不同种族、 人群、环境、性别不相同，因此导致CETPTaqIB位点多态性与血脂谱水平之间关系 存在差异； 4 国外研究结果显示，绝经前女性CETP基因对HDLC水平有显著影响， 而绝经后这种显著性差异消失，可能雌激素对HDLC影响较大。本研究中女性研究对 象，平均年龄为775岁，年龄明显偏大可能因此未能在本研究中发现CETPTqIB基因 关系还需要进一步研究。 43 I B基因多态性与阿尔茨海默病 CET

48、PTaq CETP基因存在多个位点变异，引起胆固醇酯转运蛋白活性局部或全部丧失，伴 随血浆中高密度脂蛋白胆固醇 HDLC 水平发生变化。目前主要集中于TaqIB、 定其血清脂质及脂蛋白水平。结果显示与BlBl基因型个体相比，B2等位基因携带者 HDLC水平明显升高：在校正年龄、性别、吸烟、糖尿病、高血压等因素后，B2等 护性因素，尤其在男性非吸烟患者中这种保护性作用明显。陈筱潮等【25】对7个有关国 对B2等位基因携带者OR为134，B1等位基因可能是影响中国人冠心病易感性的危险 因素。 2l 硕士学位论文 第四章讨论 阿尔茨海默病是多基因遗传性疾病，具体病因及发病机制尚不清楚。大量研究【26

49、】 发现AD患者存在血脂代谢紊乱，伴随血浆中胆固醇水平升高和高密度脂蛋白水平下 降：参与脂质代谢的载脂蛋白E ApoE 4已是公认的AD危险因素之一【2刀，已有多个 关于CE耶基因多态性与AD发病关系的研究报道。在R0纰rd锄研究中，崩嬲等t旺J 基因纯合子者皿LC水平显著升高，但AD发病风险无明显增加 等位基因携带者相比，V等位基因纯合子者AD发病风险增加了167倍 多态性V等位基因纯合子可能通过影响中枢胆固醇代谢途径，增加AD发病风险。 目前对于CETP呐IB基因多态性与阿尔茨海默病关系的研究还很少，陈大伟等 因多态性分布特点，发现无论是总样本还是经过ApoE分型，AD组和对照组中TaqI

50、B 基因型和等位基因频率分布无统计学差异。 本研究100例阿尔茨海默病患者组中，IB基因型和等位基因经检测分布符合 CETP啪IB基因型和等位基因分布频率比拟，无显著性差异 扮O05 。分析其原因 发病中有重要作用的胆固醇只存在间接影响，因此CETPTqaIB基因型与AD无明显相 关； 3 本研究样本量偏小，调查人群年龄偏大、女性所占比例较高可能影响TqaIB 基因型分布；还需进一步扩大样本量，应将CETP基因其他多态位点及与血脂相关的 其他基因纳入研究对象。 44 I CETPTaqB基因型对认知功能影响 神经心理测验可用来评定脑损伤患者的认知、记忆、注意、思维等方面的能力， 为临床认知功能

51、损害定位、定性提供依据。随着社会老龄化，痴呆患者的增多，神 经心理测验已经成为神经内科临床和科研的重要工具。其中韦氏记忆量表 WMS 硕士学位论文 第四章讨论 和威斯康星卡片分类测验 WCST 使用较广泛。 韦氏记忆量表是国内外最经典的测查记忆功能的神经心理测验之一，可比拟长 时记忆、短时记忆和瞬时记忆功能受损情况，同时可反映被试者的注意力、理解力、 视触觉、空间知觉等，为临床定性定位诊断提供帮助。对有关记忆本质研究【28】发现 在切除颞叶及其内侧海马结构的患者可出现严重的缺失记忆，Scoville在尸检中观察 发现记忆缺失严重程度与海马损伤范围之间呈正咄291，Jack等【301对AD患者和

52、健康 对照者同时进行认知功能分析并对海马、海马旁回等体积测量，结果说明AD组海马 体积显著萎缩，是内颞叶记忆系统受损最敏感的指标，并与患者病情严重程度呈正 相关。 速度等认知功能，并检测其1405V基因型。结果显示与I等位基因纯合子者比拟，V等 在本研究中，对AD组患者和对照组均进行认知功能测定包括MMSE、WMS和 WCST评分并同时比拟呐IB三种基因型个体间记忆功能差异，结果发现病例组韦氏 记忆量表中长时记忆、短时记忆、瞬时记忆评分均差于对照组，差异有统计学意义， 其中短时记忆差异显著，说明AD患者在定向力、计算力、语言、视空间、逻辑记忆 功能方面均有损害；并且WMS评分与MMSE得分有良

53、好相关性，可以反响患者的认 知障碍严重程度；但与患者血清胆固醇水平、年龄、病程、血压水平无明显相关， 这与Sw锄be嘻等研究一致【321，说明虽然胆固醇水平与AD发病有关，但不能成为衡量 病情严重程度的指标，血压上下可能与认知记忆的损害无关；同时间接提示代表记 忆系统的内颞叶海马等脑结构存在病变，萎缩。进一步按照长时记忆、短时记忆和 瞬时记忆三种记忆类型分析，发现B2等位基因携带者个体wMS中长时记忆评分高于 说明CETPTaqIB基因多态性与老年人长时记忆功能差异有关，B2等位基因可能有助 于延缓老年人长时记忆功能的下降。但在短时和瞬时记忆评分如定向、视觉再认、 理解记忆、背数等无明显差异，

54、提示CETP硼IB基因多态性与老年人短时记忆、瞬 时记忆功能间差异无关。这可能是参与长时记忆和短时记忆的脑区不完全相同、记 忆存储编码、提取信息路径不同所致。 硕士学位论文 第四章讨论 执行功能为实现特定目标个体所采取灵活方式，来方案、始动、排序、监控目 标指向性行为的认知技能；其主要依赖于前额叶皮层，该部位损伤后出现概念形成、 抽象思维、决策、认知灵活、按时间先后对事件排序、对动作监控等一系列心理缺 陷。因此传统上人们将执行功能和前额叶皮层两个术语交替使用。威斯康星卡片分 类测验是反映执行功能的标准测验，是“神经心理学中典型的执行功能任务。被广 泛用于测查抽象能力和思维灵活性、定势转移能力，

55、能够较敏感的检测有无额叶执 执行功能障碍，神经生物学及神经影像学研究证实，额叶是AD患者最易受累的脑区 专一【32】L o 本研究中AD组在wCST测验中完成分类数减少、持续性错误增多，其执行功能 测验成绩明显低于健康对照组 P O05 ，相关性分析显示：执行功能与记忆、MMSE 得分具有良好的相关性 R_O03，尸 O05 ，说明良好的执行功能需要记忆功能的参 与才能完成，WCST成绩可以反映认知损害严重程度；但与血清胆固醇水平、年龄、 大小、病程长短并不能反映病情的严重程度；同时间接提示AD患者额叶受累存在病 变；其执行功能下降易出现日常生活能力减退，不能完成购物、清扫卫生等方案性 行为：

56、对错误监控能力下降，容易出现偏见思想固执，可拒绝服药就诊，给照料人 员带来更多负担。进一步分析CETP呐IB不同基因型间个体执行功能是否存在差异， 趋势，持续性反响呈上升趋势，但测验成绩无明显差异，提示CETP嘲IB基因多态 性对老年人执行功能无影响。 阿尔茨海默病发病是多基因遗传因素和环境因素共同作用的结果，其基因多态 性只会改变对疾病的易感性。因此CETP咖IB基因位点变异与AD发病无明显相关， 可能与阿尔茨海默病相关基因位点存在连锁不平衡，共同增加AD的易感性。需要进 一步大规模研究明确它们之间的关系。同时应重视对AD患者的神经心理测验，可以 早期发现其认知功能改变，做出科学诊断和针对性

57、治疗，合理评估治疗效果，有利 于延缓阿尔茨海默病发病，提高患者生活质量。 硕士学位论文 第五章结论 第五章结论 1血清胆固醇水平升高与阿尔茨海默病发病可能有关。 2CETP-1aqIB基因多态性与老年人血脂水平可能无关。 3CETPTaqIB基因多态性与阿尔茨海默病发病可能寿关。 4CETP一啪IB基因多态性与老年人长时记忆功能差异可能有关，但与短时记忆、 瞬时记忆无关；不同基因型间威斯康星卡片分类测验评分无明显差异。 硕士学位论文 参考文献 参考文献 【1】洪震我国近年阿尔茨海默病流行病学研究现状与展望老年医学与保健，2005， 1l 4 ：195一197 on aJ knetic砌uenc

58、es G RR，et agerelated P，AuStiIlMA，Fabsitz 【2】Jarvik mtotal cholesterol，low chaJlge densit r E 994，11， geno咖ee虢ctSGenetEpidemiol，l levels：longi砌i砌掣Dlipoprotein 375384 EhehaltKellerHaaSset ofme 【3】 心 E C， a1Amyloidog砌cpmcessing on raRsJCell 60 Alzheime币-锄yloidprecurSorproteindependslipid Biol，2006，l 1

59、 ：113123 Geta1 and betapeptide 【4】ButterfieldDA，Gri伍nS，Munch Anlyloid amyloid Which arecentralt0theoxidatiVes仃essand caScades岫der patllology infla吼atory 93201 AIzlleimersdiseaSebmiIlexistsJAlzheimers Dis，2002，4，l aJGenedoseof EH，Saunde体AM，Strinmaneret 【5】Corder iIllateonset 4aJlele锄IdtlleriskofAlzhe

60、imerIsdise嬲e 1， f抽iliesScience，1994，26 92l923 M，ct 【6】KolSchH，L州oh跚D，Lud、Viga1Pol舯。神ism is 嬲sociated谢mA1吐eimers 24S-hydroxyl硒egene 2002，7，899_902 1 a1GeneticV撕antSofABCA H，Chalnle稻KJ，ct modi匆 【7】Ka呦v PalIIlgren t0 meta_bolism Alztleinlersdisearisk甜ld related q饭mtitatiVe吲tsbeta-锄yloid H啪Mut吐2004，23，3