菊花的组织培养技术

1、第六节 主要经济植物组织培养技术一、菊花的组织培养技术二、蝴蝶兰的组织培养技术三、大花蕙兰的组织培养技术四、美国红栌的组织培养技术五、马铃薯的脱毒与快繁技术 蔡艳丽菊花的组织培养技术（一）培养意义（一）培养意义 菊花的繁殖可以用播种法、扦插法、分株法、组织培养法。在种苗生产上运用最为广泛的方法是扦插和组培。由于菊花的病毒病种类比较多，而且危害也较为严重。使用扦插繁殖苗，容易引起病毒病的扩张和蔓延，因此茎尖脱毒培养和组培快繁生产母株植株，再生产扦插苗的技术，对优良品种的脱毒和复壮有重要意义。1.外植体的选择与处理2.外植体的清洗、消毒与接种 3.初代培养4.增殖与继代培养 5.生根和移栽 二、培

2、养程序1.外植体的选择与处理 以花序轴为外植体时，选取具有该品种典型特征的，饱满壮实的花蕾，最好是将要开放而没有开放的花蕾，这时花瓣外好象有一层薄膜包围着，里面仍是无菌的，采回实验室后做表面消毒，便于无菌条件下剥离出花序轴。2.外植体的清洗、消毒与接种 材料初步切割后，用洗衣粉水漂洗，再用自来水冲净后，在超净工作台上将其放入70%75%的酒精中浸润30 s，转入2%次氯酸钠溶液中消毒815 min，并不时摇动，最后于无菌水中漂洗35次后待用。 茎段从两端切去一小段；花蕾须剥去花被，用中部花瓣或花序轴接种。3.初代培养 在2426，每天1216 h，光强 1 0004 000 Lx条件下，外植体

3、经培养后，一般1020 d茎尖处可分生出新芽，茎段的叶腋处也会萌发出新芽。而花蕾外植体经过1520 d的培养，会形成愈伤组织；再经过2030 d的培养，愈伤组织就会分化出较多的丛生芽 。4.增殖与继代培养 将从以上外植体诱导分化出的单芽或丛生芽，分切成数段或数块放入增殖培养基中继代培养。开始分化率和分化苗的数量都较小，随继代次数增加，分生苗很快就能够增多起来。 增殖方法还有：用产生的嫩茎为材料，培养其长到一定高度时，将嫩梢剪成一节带一叶的茎段，然后插入MS或MS+NAA0.1 mg/L的培养基中培养，45周后，腋芽即生长成小植株，再照上述方法切剪茎段，重复培养，从而达到快繁的目的。5.生根和移

4、栽 菊花无根苗生根一般较容易，通常在增殖培养时久不转瓶，即可生根，但这种根的根毛较少或无，不利于将来移栽和生长，所以常用下列方法处理： （1）无根苗的试管生根，切取3 cm左右无根嫩茎，转插到12MS+NAA(或IBA)0.05 mg/L的培养基中，经10 d左右即可生根，然后移栽驯化。 （2）无根嫩茎直接插植到基质中生根。剪取23 cm无根苗，插植到珍珠岩或蛭石的基质中，基质事先用生根激素溶液浸透，l0d后生根率可达95100。6.出瓶苗的过渡管理 菊花的有根苗移栽成活容易，将有根的植株从瓶中用镊子轻轻夹出，洗净根部黏附的琼脂，栽入蛭石基质中。然后加设小拱棚以保湿，随着幼苗的生长，逐渐降低空

5、气湿度和基质含水量，转为正常苗的管理阶段。移栽前期将空气湿度保持在75%85%之间，遮光率为40%，环境温度控制在2026，就可使试管苗在20d左右移栽成活，并长出新根新叶。 分化芽二、蝴蝶兰的组织培养技术（一）培养意义（一）培养意义 蝴蝶兰属于兰科、蝴蝶兰属，为多年生热带花卉，是世界上栽培最广泛、最受喜爱的洋兰之一。 蝴蝶兰的繁殖大多采用分株的方法，得到种苗量少，不能满足栽培的需求。通过组织培养技术繁育蝴蝶兰种苗，实现“兰花工业”是目前繁殖率最高、种苗质量最优秀的方法。（二）培养程序1.外植体的选择 2.外植体的处理、接种与初代培养3.增殖与继代培养 4.壮苗与生根培养 5.驯化移植 二、培

6、养程序1.外植体选择 蝴蝶兰的组织培养外植体有茎尖、茎段、叶片、花梗腋芽、花梗节间、根尖等，各部位都能诱导成功，只是难易程度不一。 用花梗腋芽或花梗节间作外植体，容易诱导，外植体表面灭菌成功率高，是最合适的外植体取样部位。2.外植体的处理、接种与初代培养 花梗腋芽的培养：花梗腋芽的培养：剪取整枝花梗，清水冲洗30 min，将花梗剪成长约23 cm带腋芽的切段，用无菌吸水纸或纱布吸干水分，带入无菌操作室按无菌操作程序进行接种。先用70%的酒精溶液浸泡30 s，再用0.1%的升汞溶液浸泡810 min，用无菌水反复冲洗58次，接种在MS+BA 3 mg/L的培养基上，可使腋芽萌发为丛生芽。 取生长

7、期在45 d以内的蝴蝶兰花梗，经无菌操作消毒后，（消毒方法同花梗腋芽）斜切成11.5 mm厚的薄片，平放在固体培养基上。培养温度2428，光照强度500 Lx，每天光照16 h培养。培养基用1.2倍的V&W无机盐配方，加肌醇100 mg/L，维生素B1、B6和烟酸各0.5 mg/L，BA1 mg/L，蔗糖2%。形成原球茎快而多。花梗节间的培养：花梗节间的培养：3.增殖与继代培养 原球茎的增殖培养基以MS+BA 5 mg/L +NAA 0.1 mg/L的增殖效果最好。在不含或只含低浓度BA 0.10.5 mg/L的KC或MS培养基上培养约40 d后，原球茎表面分化一些绒毛状物，进而分化出

8、芽。大约3个月就可以发育形成完整小植株。 花梗腋芽诱导出丛生芽后，接种于继代培养基 13MS+NAA 0.5 mg/L+ BA110 mg/L (pH5.6左右)，每4050 d继代1次，增殖倍数23倍。4.壮苗与生根培养 将分化形成的完整小植株移入壮苗培养基MS(KC)+NAA 0.1 mg/L+10%香蕉汁中。培养1个月后，平均每株有4条根、4片叶片，植株生长健壮。当小苗高达34 cm时，转接到1/2MS+IBA0.5 mg/L的培养基上进行生根培养，约3个月转移一次新鲜的培养基，生根率可达100%。当试管苗具有34条粗壮的根、株高达到78 cm时，可以移栽。 将试管苗带瓶移出培养间，放置

9、于温室中炼苗，15 d后打开瓶盖，每天早、中、晚各喷水一次，保证足够的湿度。3 d以后，用镊子将小苗轻轻夹出培养瓶，洗净根部培养基。可先用1 500倍的多菌灵药液浸泡510 min，然后以水草包裹蝴蝶兰根部，将其定植于穴盘中。 定植前依叶子长度及根的生长状况进行分级，将大小近似的苗栽植在同一规格的穴盘中，以便日后管理。环境温度保持2528，保持湿度85%左右，防止阳光直射。当新叶长出、新根伸长时，每周1次叶面喷施0.3%0.5%KH2PO4溶液追肥，成苗率可达95%以上。5.驯化移植三、大花蕙兰的组织培养技术 大花蕙兰常规的繁殖方法有分株繁殖、播种繁殖。分株繁殖系数低且速度很慢；大花蕙兰结实极

10、少，只有在母株周围播种才可自然萌发，而且发芽率及成活率极小，故用常规的繁殖方法不能满足栽培的需求。通过组织培养技术繁育大花蕙兰种苗，是目前生产中最常用、最有效的方法。（二）培养程序1.外植体的选择与接种2.初代培养 3.增殖与继代培养4.壮苗与生根培养 1.外植体的选择与接种 用于大花蕙兰组织培养的外植体有茎尖、茎段、芽体等。芽体经过消毒后，在无菌条件下剥出茎尖，接种于启动培养基上。2.初代培养 将茎尖接种在MS+BA 1.0mg/L+NAA0.5mg/L的诱导培养基上，25d左右外植体周围开始出现许多白色、大小不一的颗粒状愈伤组织，继续培养则由白色逐渐转为绿色，即为原球茎。3.增殖与继代培养

11、 将原球茎转至12MS+BA2.05.0mg/L+NAA0.51.0mgL+活性炭0.5%的增殖培养基中进行继代培养，在几种培养基上都能快速增殖，同时分化出丛芽，形成原球茎与丛生芽同时存在的现象。4.壮苗与生根培养 将2cm左右高的茎芽从原球茎团块上切下，接种到1/2MS+ BA1.02.0mg/L +NAA0.11.0mg/L的生根壮苗培养基上培养，茎芽2周后开始生根，叶片伸长、植株增高；1个月后可长成高5cm以上的完整植株。 当瓶苗有34条根，且根长达23cm时，将培养瓶放置于有明亮散射光的温室进行炼苗，15d后即可打开瓶盖再放置23d。移栽前洗净苗根部的培养基，移栽于预先消毒过的基质中。

12、大花蕙兰对基质的要求不太严格，泥炭土与蛭石的混合物、碎陶粒、水苔都可作为基质，小苗移栽后，只要注意保湿、通风，就能正常生长，1个月后每周浇一次稀释的营养液，移栽成活率可达95%。5.驯化移植 准备移栽兰花苗 （一）培养意义（一）培养意义 美国红栌为漆树科黄栌属植物，是美国黄栌的变种类型。该植物属珍稀种类，数量甚微，目前，全世界主要采用嫁接的传统方法进行繁殖，或者用扦插、根插、分株和埋干出苗等繁殖，但这些都不能满足市场需求，并且容易传播病虫害。四、美国红栌的组织培养技术1.外植体的选择与接种2.初代培养 3.增殖与继代培养4.壮苗与生根培养 5.驯化移植（二）培养程序 以幼枝切段为外植体：取直径

13、为 515mm的当年枝条，整理成长度为22.5cm左右的小段。表面消毒后接种到诱导培养基上。1.外植体的选择与接种 外植体接种到诱MS+BA0.5mL+NAA0.1mgL上，置252培养间进行培养。15d左右即可萌发出嫩芽。2.初代培养 将长出的嫩芽剪取下来，转接到增殖培MS+BA1.0mgL+NAA0.1mgL上进行继代培养，增殖系数可达到4以上。3.增殖与继代培养 壮苗培养基为MS+BA0.25 mgL +NAA0.2 mgL上，在壮苗培养基上培养了3周4周的无根苗的茎切割成长度为0.5cm1.0cm的切段。 壮苗培养基上小苗生长至23cm高时，转接到生根培养基1/2MS+NAA0.2mg

14、L上，经10d左右茎基部切口附近即开始陆续长出不定根。再经1015d培养，即可成为根系发育良好的完整试管小植株。4.壮苗与生根培养 移栽前洗净苗根部的培养基，移栽于装有蛭石的营养钵中，然后加设小拱棚以保湿。移栽前期将空气湿度保持在75%85%之间，温度控制在2025，试管苗大约在1个月左右可长出新根新叶，移栽成活率可达90%。5.驯化移植我是马铃薯（一）培养意义一）培养意义 马铃薯为茄科茄属，一年生喜冷凉草本块茎植物，是世界第四大作物。由于长期的块茎繁殖，使马铃薯的病毒危害特别严重，直接影响其产量和品质。目前国内外脱毒种薯产量还远远不能满足种植脱毒马铃薯的要求，在国内脱毒薯的种植面积一般仅有当

15、地马铃薯的1050%，因此脱毒马铃薯的培育与繁育仍有着广阔的市场空间。五、马铃薯的脱毒与快繁技术1.获取外植体材料2.外植体消毒与接种 3.初代培养4.无病毒苗的鉴定（二）脱毒技术 直接从田间采下68cm的顶芽或腋芽，置实验室的营养液中生长，23周后除去顶芽，以促使腋芽生长，当腋芽长至12cm时，切取腋生枝作为外植体。 可选择具有品种典型性状的薯块，在室内播于土箱、沙箱中进行无菌发芽，叶未充分展开时就可剪取粗壮顶芽为外植体。1.获取外植体材料 剪取12cm长的芽，剥去易除叶片，在自来水下冲洗1h左右，于超净工作台上进行消毒灭菌。把消毒好的芽放在解剖镜下进行仔细剥离，剥去幼叶和叶原基，露出圆滑的

16、半球形生长点，用解剖刀仔细切取带有12个叶原基的茎尖（0.20.3mm)，迅速接种到培养基上。2.外植体消毒与接种 茎尖在MS+BA0.5mgL+NAA0.1mgL+2%糖（pH5.8）的培养基、温度2125、光强20003000 Lx、光照时间12h/d的条件下，接种后23周形成愈伤组织，45周出现绿色芽点，36月长成23cm小芽。3.初代培养指示植物汁液鉴定 在马铃薯的病毒鉴定中，汁液鉴定是最常用的方法，病毒、病毒和纺锤块状病毒很容易通过汁液来接种。指示植物嫁接鉴定法指示植物嫁接鉴定法 嫁接方法有枝条嫁接和块茎嫁接两种。4.无病毒苗的鉴定 1.1.直接移栽利用块茎繁殖直接移栽利用块茎繁殖 把少量无病毒小苗直接移入无虫网室的土壤中，利用产生的块茎继续繁殖。将经过56次繁殖的无病毒块茎作一级原种供给大田繁育体系进一步扩大繁殖。 2.2.扦插繁殖扦插繁殖 把无病毒植株栽于无虫网室中，12月以后切顶芽作插枝。将插枝的最下面1片叶除去，插入经过消毒的沙壤土中，插入深度为两个节间。维持土壤湿润，1周左右，插枝就能产生新根。 3.3.组织培养切段繁殖组织培养切段繁殖 将无病毒植株切段，每段带一个叶片，将切段放在培养基上，在培养间里继续培养，5d左右就能长出新根，接