加样回收实验

1、会计学1加样回收实验加样回收实验二、用途（一）药品质量标准起草时，分析方法需经验证。（二）药物生产方法变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，分析方法需经验证。第1页/共59页第2页/共59页四、验证内容 验证内容有：准确度、精密度（重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性第3页/共59页 （一） 准确度（accuracy） 准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。 测定回收率R（recovery）的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。 第4页/共59页 回收试验 空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值

2、为M%100AMR空白回收率第5页/共59页 加样回收试验 已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M%100APMR第6页/共59页 数据要求 规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备高、中、低三个不同浓度样品各测三次。第7页/共59页1. 1. 含量测定方法的准确度含量测定方法的准确度 原料药原料药可用已知纯度的对照品或可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与样品进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。进行比较。 第8页/共59页 制剂制剂可用含己知量被测物的各组可用含己知量被

3、测物的各组分混合物进行测定，即采用在空白辅分混合物进行测定，即采用在空白辅料中加入原料药对照品的方法。料中加入原料药对照品的方法。 如不能得到制剂的全部组分，可如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测向制剂中加入已知量的被测物进行测定，或与另一个已建立准确度的方法定，或与另一个已建立准确度的方法比较结果。比较结果。第9页/共59页 中药分析的准确度一般用加样回中药分析的准确度一般用加样回收试验衡量。中药回收率一般要求在收试验衡量。中药回收率一般要求在9595105%105%范围内，有些方法操作步骤范围内，有些方法操作步骤繁多时，可要求在繁多时，可要求在9090110%110

4、%范围内。范围内。RSDRSD一般在一般在2%2%以内。以内。 第10页/共59页2 2杂质定量测定的准确度杂质定量测定的准确度 可向原料药或制剂中加入已知量可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如果不能得到杂质或杂质进行测定。如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较。成熟的方法进行比较。第11页/共59页 （二）精密度（二）精密度（precisionprecision） 精精密度是指在规定条件下，同一个均匀密度是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差（的接近程

5、度。用偏差（d d）、标准偏差）、标准偏差( (SDSD) )、相对标准偏差、相对标准偏差( (RSDRSD) )（变异系数（变异系数，CVCV）表示。）表示。 第12页/共59页偏差（d）：测量值与平均值之差xxdi第13页/共59页00BAB-A00100100平均值平均值A第14页/共59页标准（偏）差（SD或S）12nxxSi第15页/共59页相对标准（偏）差（RSD），也称变异系数（CV）%100 xSRSD第16页/共59页 1. 1. 重复性重复性(repeatability):(repeatability):在在相同条件下，由同一个分析人员测定相同条件下，由同一个分析人员测定所

6、得结果的精密度；在规定的范围内所得结果的精密度；在规定的范围内，至少用，至少用9 9次测定结果评价，如制备次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次或把被测三个不同浓度样品各测三次或把被测物浓度当作物浓度当作100%100%，至少测，至少测6 6次进行评次进行评价。价。第17页/共59页 2. 2. 中间精密度中间精密度 同一实验室，同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。备所得结果的精密度。 3. 3. 重现性重现性(reproducibility)(reproducibility)不不同实验室，不同分析人员测定结果同实验室，不同分析人

7、员测定结果的精密度。的精密度。 数据要求：需报告数据要求：需报告RDRD，RSDRSD和可和可信限。信限。第18页/共59页 （三）检测限（三）检测限（limit of detectionlimit of detection， LODLOD） 检测限系指试样在确定的实验检测限系指试样在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低条件下，被测物能被检测出的最低浓度或含量。浓度或含量。 是限度检验效能指标，无需定是限度检验效能指标，无需定量测定，只要指出高于或低于该规量测定，只要指出高于或低于该规定浓度即可。定浓度即可。 第19页/共59页1 1非仪器分析目视法非仪器分析目视法 用已知浓度的被测物，试

8、验出用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量能被可靠地检测出的最低浓度或量。第20页/共59页 2 2信噪比法信噪比法 用于能显示基线噪音的分析方法用于能显示基线噪音的分析方法（仪器分析方法），是把已知低浓度（仪器分析方法），是把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比（的最低浓度或量。一般以信噪比（S/NS/N）3131或或2121时的相应浓度或注时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。入仪器的量确定检测限。 第21页/共59页第22页/共59页（四）定

9、量限（1imit of quantitation，LOQ） 指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度要求。 第23页/共59页 常用信噪比法确定定量限，一般以信噪比（S/N）为101时相应的浓度或注入仪器的量进行确定，也可按1984年国际纯粹和应用化学联合会(IVPAC)规定：用仪器所测空白背景响应标准差（SD）的10倍为估计值，再经试验确定方法的实际测定下限。 第24页/共59页第25页/共59页 （五）专属性（五）专属性（specificity specificity ） （选择（选择性）：性）： 指有其他成分（杂质、降解物、辅料指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）

10、可能存在情况下采用的方法能准确测等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性，能反映该方法在有共定出被测物的特性，能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力，存物时对供试物准确而专属的测定能力，是指该法用于复杂样品分析时是否受到相是指该法用于复杂样品分析时是否受到相互干扰程度的度量。互干扰程度的度量。第26页/共59页第27页/共59页第28页/共59页 （六） 线性（Linearity） 在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。 线形通常用最小二乘法处理数据求得回归曲线的斜率（Slope）来表示。数据要求：至少需要五个浓度考察线形，需提供相关系数、y

11、截距（是检定的可能偏差）、回归斜率及方差等参数，应列出回归方程数和线性图。 第29页/共59页（七）范围（Range）： 指达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高、低限浓度或量的区间。 范围的确定可因测定项目不同而有不同要求： 含量测定范围为80%-120%；含量均匀度范围为70%-130%；杂质测定应为被测杂质限度的50%-120%；溶出度应为测定范围的20%。 第30页/共59页（八）（八） 耐用性耐用性 指测定条件稍有变动时指测定条件稍有变动时，结果不受影响的承受程度，为常规检，结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。是衡量实验室和工作人员验提供依据。是衡量实验室和工

12、作人员之间在正常情况下实验结果重现性的尺之间在正常情况下实验结果重现性的尺度。度。 分析方法重现性的测定是通过在不同的分析方法重现性的测定是通过在不同的实验室内不同的实验者对同一样品的分实验室内不同的实验者对同一样品的分别测试而获得的。（获得的这种再与正别测试而获得的。（获得的这种再与正常检定下的精密度进行比较，从而确定常检定下的精密度进行比较，从而确定该法的耐用性，或称粗放度）该法的耐用性，或称粗放度）第31页/共59页 （九）应用（九）应用 1. 1. 鉴别试验除专属性、耐用性外，其鉴别试验除专属性、耐用性外，其它都不要求。它都不要求。 2. 2. 杂质的限量检查除专属性、检测限杂质的限量

13、检查除专属性、检测限、耐用性外，其它都不要求。、耐用性外，其它都不要求。 杂质的含量测定除检测限外，其它杂质的含量测定除检测限外，其它都要求。都要求。 3. 含量测定及溶出量测定除检测限含量测定及溶出量测定除检测限、定量限外，其它都要求。、定量限外，其它都要求。第32页/共59页（十）各种含量测定方法对效能指标的要（十）各种含量测定方法对效能指标的要求求 1. 1. 容量分析法：用原料药精制品容量分析法：用原料药精制品( (含量含量99.599.5) )或对照品考察方法的精密度，相或对照品考察方法的精密度，相对标准差一般应不大于对标准差一般应不大于0.20.2；进行回收；进行回收率试验。率试验

14、。回收率一般在回收率一般在99.799.7100.3100.3之之间间。 第33页/共59页 2. 2. UVUV法法：用适当浓度的精制品进行：用适当浓度的精制品进行测定，其测定，其RSDRSD一般不大于一般不大于1 1。制剂的。制剂的测定，回收率一般应在测定，回收率一般应在9898102102之间。之间。第34页/共59页 线性：线性：吸光度吸光度A A一般在一般在0.20.20.70.7，浓度点浓度点n n5 5。用浓度。用浓度c c对对A A作线性回归作线性回归处理，得一直线方程，处理，得一直线方程，r r应达到应达到0.9999(n0.9999(n5)5)，方程的截距应近于零，方程的截

15、距应近于零。第35页/共59页 3. HPLC3. HPLC法：要求法：要求RSD2RSD2，回收率回收率9898102102之间。之间。 线性范围：用精制品配制一系线性范围：用精制品配制一系列标准溶液，浓度点列标准溶液，浓度点n n应为应为5 57 7，用，用浓度浓度c c对峰高对峰高h h或被测物的响应值之比或被测物的响应值之比进行回归处理，建立回归方程，进行回归处理，建立回归方程，r r应应大于大于0.9990.999，截距应趋于零。，截距应趋于零。第36页/共59页99：73. 精密度是指（B） A. 测得的测量值与真值接近的程度 B. 测得的一组测量值彼此符合的程度 C. 表示该法测

16、量的正确性 D. 在各种正常试验条件下，对同一样品分析所得结果的准确程度 E. 对供试物准确而专属的测定能力第37页/共59页99x：76精密度是指该法（D） A. 测得的测量值与真值接近的程度 B. 测得的测量值与回收率接近的程度 C. 测量的正确性 D. 测得的一组测量值彼此符合的程度 E. 对供试物准确而专属的测定能力 第38页/共59页96：138在药物分析中，精密度是表示该法的（BD） A. 测量值与真值接近程度 B. 一组测量值彼此符合程度 C. 正确性 D. 重现性 E. 专属性 第39页/共59页95：106110应要求的效能指标： A. 检测限 B. 定量限 C. 两者均要求

17、 D. 两者均不要求95：106. 含量测定方法评估（D）95：107. 杂质限量检查（A）95：108. 杂质定量测定（B）95：109. 溶出度测定（D）95：110. 中间体含量测定（D）第40页/共59页97：126药物杂质检查所要求的效能指标为（CDE） A. 准确度 B. 精密度 C选择性 D. 检测限 E. 耐用性 第41页/共59页98：138评价药物分析所用的测定方法的效能指标有（BCD） A. 含量均匀度 B. 精密度 C. 准确度 D. 粗放度 E. 溶出度第42页/共59页例例1155A A精密度精密度 B B定量限定量限C C两者皆是两者皆是 D D两者皆不是两者皆不

18、是1. 某法测得一组测量值间彼此符合程度（A）2. 测量值和真值接近的程度（D）3. 测定结果的重现性（A）4. 可定量测得被测药物的最低水平参数（B）5. 药物分析方法的效能指标（C） 第43页/共59页例例6. 6. 相对标准差表示（相对标准差表示（C C）A. 准确度B. 回收率C. 精密度D. 纯净度E. 限度第44页/共59页例例7. 7. 精密度的一般表示方法有精密度的一般表示方法有(AE)(AE)A. 相对标准差B. 相对平均偏差C. 相对误差D. 绝对误差E. 标准差 第45页/共59页例例8. 8. 检测限的表示方法有（检测限的表示方法有（ABCABC）A. 百分数 B. p

19、pm C. ppbD. g E. ng第46页/共59页例例9. 9. 用信噪比法表示检测限时，信用信噪比法表示检测限时，信噪比一般应为（噪比一般应为（BCBC）A. 11 B. 21 C. 31D. 41 E. 51第47页/共59页例例10. 10. 用碘量法测定维生素用碘量法测定维生素C C原料药原料药时，要求碘量法应具备（时，要求碘量法应具备（ACDACD）A. 选择性 B. 定量限C. 精密度 D. 粗放度E. 线性第48页/共59页例例11. 11. 测定药物片剂的溶出度或释放测定药物片剂的溶出度或释放度时，对所用测定方法应要求度时，对所用测定方法应要求(ACD)(ACD)A. 精

20、密度 B. 定量限C. 耐用性 D. 回收率E. 检测限 第49页/共59页例例12. 12. 药物鉴别试验所要求的效能指药物鉴别试验所要求的效能指标为（标为（CECE）A. 准确度B. 精密度C. 选择性D. 检测限E. 耐用性第50页/共59页2 2杂质定量测定的准确度杂质定量测定的准确度 可向原料药或制剂中加入已知量可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如果不能得到杂质或杂质进行测定。如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较。成熟的方法进行比较。第51页/共59页 （三）检测限（三）检测限（limit of detectionlimit of detection， LODLOD） 检测限系指试样在确定的实验检测限系指试样在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低条件下，被测物能被检测出的最低浓度或含量。浓度或含量。 是限度检验效能指标，无需定是限度检验效能指标，无需定量测定，只要指出高于或低于