实验六 微生物大小及数量的测定

1、 一、实验目的和内容一、实验目的和内容 目的：学会测微尺的使用和计算方法及对单细胞微生物目的：学会测微尺的使用和计算方法及对单细胞微生物的测量。的测量。 内容：内容：1. 1. 学会并掌握测微尺的使用。学会并掌握测微尺的使用。 2 2测定酿酒酵母菌体的大小。测定酿酒酵母菌体的大小。 二、实验材料和用具二、实验材料和用具 酿酒酵母菌悬液酿酒酵母菌悬液 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。 镜台测微尺镜台测微尺目镜测微尺目镜测微尺 目镜测微尺每格实际代表的长度随物镜的放大倍数而改变，也会因使用不同的显微镜而产生误差，因此在使用前必须用镜台测微尺进行校正。

2、 酵母菌数量的测定酵母菌数量的测定 一一 、目的要求、目的要求 1 1明确血球计数板计数的原理。明确血球计数板计数的原理。 2 2掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法。掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法。 二二 、 基本原理基本原理 用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三数方法。该计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，各列有一个个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，各列有一个方格网，中间的大方格即为计数室。计数室的刻度

3、一般有两种方格网，中间的大方格即为计数室。计数室的刻度一般有两种规格，一是大方格分成规格，一是大方格分成2525个中格，而每个中格又分成个中格，而每个中格又分成1616个小格个小格；另一种是大格分成；另一种是大格分成1616个中格，而每个中格又分成个中格，而每个中格又分成2525个小格，个小格，每个大格中的小格都是每个大格中的小格都是400400个。每一个大格边长为个。每一个大格边长为lmmlmm，面积为，面积为lmmlmm2 2，盖玻片与载玻片之间的高度为，盖玻片与载玻片之间的高度为0.lmm0.lmm，故计数室的容积为，故计数室的容积为0.lmm0.lmm3 3。 计数时，通常数五个中格的

4、总菌数，然后求得计数时，通常数五个中格的总菌数，然后求得每个中格的平均值，然后再换算成每个中格的平均值，然后再换算成lmllml菌液中的总菌菌液中的总菌数。数。 如果是如果是2525个中方格的计数板个中方格的计数板, , 1mL1mL菌液中的总菌数菌液中的总菌数=A/5=A/5252510104 4B=50000ABB=50000AB（个）（个） A A为五个中方格中的总菌数，为五个中方格中的总菌数，B B为菌液稀释倍数为菌液稀释倍数. .如果是如果是1616个中方格的计数板，个中方格的计数板， 1mL1mL菌液中的总菌数菌液中的总菌数=A/5=A/5161610104 4B=32000ABB

5、=32000AB（个）（个） （三）器材（三）器材 1 1菌种菌种 酿酒酵母酿酒酵母 2 2仪器或其他用具仪器或其他用具 血球计数板，显微镜，盖玻片，无血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细滴管。菌毛细滴管。 （四）操作步骤（四）操作步骤 l l菌悬液制备菌悬液制备 以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。 2 2镜检计数室镜检计数室 在加样前，先对计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，在加样前，先对计数室进行镜检。若有污物，则需清洗， 吹干后才能进行计数。吹干后才能进行计数。 3 3加样品加样品 将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛

6、细将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细 滴管将摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘凹槽滴加滴管将摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘凹槽滴加, ,菌菌 液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数室均液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数室均 能充满菌液。能充满菌液。 取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有气泡产生。取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有气泡产生。 4 4显微镜计数显微镜计数 加样后静止加样后静止5min5min，然后将血球计数板置于显微镜载物台上，先，然后将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。用低倍镜找到计数室所

7、在位置，然后换成高倍镜进行计数。 每个计数室选每个计数室选5 5个中格个中格( (可选可选4 4个角和中央的一个中格个角和中央的一个中格) )中的菌体中的菌体进行计数。压线的菌体一般记上不记下进行计数。压线的菌体一般记上不记下, ,记左不记右。如遇酵记左不记右。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品。计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。的含菌量。 5 5清洗血球计数板清洗血球计数板 使用完毕后，将血球计数板在水龙头用水冲洗干净，切勿用硬使用完毕后，将血球计数板在水龙头用水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每小格物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复