《高效液相色谱岛津LC1-0A基础知识》ppt课件

1、目的目的:规范岛津规范岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的运用。型高效液相色谱仪的运用。范围范围:适用于岛津适用于岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的运用。型高效液相色谱仪的运用。职责职责:质检员对本规程的实施担任。质检员对本规程的实施担任。 本系统由本系统由2个个LC-10ATvp溶剂保送泵分主溶剂保送泵分主/A泵和副泵和副/B泵、泵、Rheodyne 7725i手动手动进样阀、进样阀、SPD-10Avp紫外紫外-可见检测器、可见检测器、N2000色谱数据任务站和电脑等组成，另外还色谱数据任务站和电脑等组成，另外还包括打印机、不延续电源等辅助设备。包括打印机、不延续电源等辅助设备。1 、预备

2、所需的流动相，用适宜的、预备所需的流动相，用适宜的0.45m滤膜过滤，超声脱气滤膜过滤，超声脱气20min。2 、根据待检样品的需求改换适宜的洗脱柱留意方向和定量环。、根据待检样品的需求改换适宜的洗脱柱留意方向和定量环。3、 配制样品和规范溶液也可在平衡系统时配制，用适宜的配制样品和规范溶液也可在平衡系统时配制，用适宜的0.45m滤膜过滤。留意腐滤膜过滤。留意腐蚀性与有机系的的溶剂蚀性与有机系的的溶剂4 、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道能否衔接正常。、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道能否衔接正常。 接通电源，依次开启不延续电源、接通电源，依次开启不延续电源、B泵、泵、A 泵、

3、检测器，待泵和检测器自检终了泵、检测器，待泵和检测器自检终了后，翻开打印机、电脑显示器、主机，最后翻开色谱任务站。后，翻开打印机、电脑显示器、主机，最后翻开色谱任务站。三、三、 开机开机1、 波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按func键，用数字键输入所需波长值，按键，用数字键输入所需波长值，按Enter键确认。按键确认。按CE键退出到初始屏幕。键退出到初始屏幕。2 、流速设定：在、流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按泵显示初始屏幕时，按func键，用数字键输入所需的流速柱在线时键，用数字键输入所需的流速柱在线时流速普通不超越流速普通不超越1ml/min，按，

4、按Enter键确认。按键确认。按CE键退出。键退出。3 、流动相比例设定：在、流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按泵显示初始屏幕时，按conc键，用数字键输入流动相键，用数字键输入流动相B的浓度百的浓度百分数，按分数，按Enter键确认。按键确认。按CE键退出。键退出。4、 梯度设定：梯度设定：4.1 ：在：在A泵显示初始屏幕时，按泵显示初始屏幕时，按edit键，键，Enter键；键；4.2 ：用数字键输入时间，按：用数字键输入时间，按Enter键，反复按键，反复按func键选择所需功能键选择所需功能FLOW设定流速，设定流速，BCNC设定流动相设定流动相B的浓度，按的浓度，按Enter键

5、，用数字键输入设定值，按键，用数字键输入设定值，按Enter键；键；4.3： 反复上一步设定其它时间步骤；反复上一步设定其它时间步骤；4.4 ：用数字键输入停顿时间，反复按：用数字键输入停顿时间，反复按func键直至屏幕显示键直至屏幕显示STOP，按，按Enter键。按键。按CE键退出。键退出。1： 将将A/B管路的吸滤器放入装有预备好的流动相的储液瓶中；管路的吸滤器放入装有预备好的流动相的储液瓶中；2 ：逆时针转动：逆时针转动A/B泵的排液阀泵的排液阀180，翻开排液阀；，翻开排液阀；3 ：按：按A/B泵的泵的purge键，键，pump指示灯亮，泵大约以指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的

6、流速冲洗，的流速冲洗，3min可设定可设定后自动停顿；后自动停顿；4 ：将排液阀顺时针旋转究竟，封锁排液阀。：将排液阀顺时针旋转究竟，封锁排液阀。5 ：如管路中仍有气泡，那么反复以上操作直至气泡排尽。：如管路中仍有气泡，那么反复以上操作直至气泡排尽。6 ：如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下衔接纳，放入废液瓶中，设流速为：如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下衔接纳，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按，按pump键，冲洗键，冲洗3min后再按后再按pump键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。1、查看基线：、查看基线：1.1：按：按翻开翻开

7、“在线色谱任务站软件，在线色谱任务站软件，1.2：输入实验信息并设定各项方法参数后，：输入实验信息并设定各项方法参数后，1.3：按下：按下“数据搜集页的数据搜集页的 按钮。按钮。 2 、等度洗脱方式、等度洗脱方式 2.1 ：按：按A泵的泵的pump键，键，A、B泵将同时启动，泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，普通最少需动相冲洗系统，普通最少需6倍柱体积的流动相。倍柱体积的流动相。 2.2 ：检查各管路衔接处能否漏液，如漏液应予以排除。：检查各管路衔接处能否漏液，如漏液应予以排除。 2.3 ：察看泵控制屏幕上的压力值，压力动摇应不超越：察

8、看泵控制屏幕上的压力值，压力动摇应不超越1MPa。如超越那么可初步判别为。如超越那么可初步判别为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操作。柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操作。 2.4 ：察看基线变化。假设冲洗至基线漂移：察看基线变化。假设冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为，噪声为25mmol/L的缓冲液的缓冲液4.每天冲洗柱每天冲洗柱5.稳定进样条件稳定进样条件,调理流动相调理流动相6.采用维护柱采用维护柱1.流速添加流速添加2.样品超载样品超载3.键合相流失键合相流失4.流动相组成变化流动相组成变化5.温度添加温度添加1.检查泵检查泵,重新设定流速重新设定流速2.降低样品量降低样品量3

9、.流动相流动相PH值坚持在值坚持在37.5检查检查柱的方向柱的方向4.防止流动相蒸发或沉淀防止流动相蒸发或沉淀5.柱恒温柱恒温1.流速下降流速下降2.硅胶柱上活性点变化硅胶柱上活性点变化3.键合相流失键合相流失4.流动相组成变化流动相组成变化5.温度降低温度降低1.管路走漏管路走漏,改换泵密封圈改换泵密封圈,排除泵排除泵内气泡内气泡2.用流动相改性剂用流动相改性剂,如加三乙胺如加三乙胺,或或采用碱至钝化柱采用碱至钝化柱3.流动相流动相PH值坚持在值坚持在37.5检查柱检查柱的方向的方向4.防止流动相蒸发或沉淀防止流动相蒸发或沉淀5.柱恒温柱恒温1.样品体积过大样品体积过大2.样品溶剂过强样品溶

10、剂过强3.柱塌陷或构成短路通道柱塌陷或构成短路通道4.柱内烧结不锈钢失效柱内烧结不锈钢失效5.进样器损坏进样器损坏1.用流动相配样用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的总的样品体积小于第一峰的15%2.采用较弱的样品溶剂采用较弱的样品溶剂3.改换色谱柱改换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件采用较弱腐蚀性条件4.改换烧结不锈钢改换烧结不锈钢,加在线过滤器加在线过滤器,过滤样品过滤样品5.改换进样器转子改换进样器转子1.进样阀剩余峰进样阀剩余峰2.样品中未知物样品中未知物3.柱未平衡柱未平衡4.三氟乙酸三氟乙酸(TFA)氧化氧化(肽谱肽谱)5.水污染水污染(反相反相)1.每次用后用强溶剂清洗阀每次用后用强

11、溶剂清洗阀,改良阀和样品的清洗改良阀和样品的清洗2.处置样品处置样品3.重新平衡柱重新平衡柱,用流动相作样品溶剂用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱尤其是离子对色谱)4.每天新配每天新配,用抗氧化剂用抗氧化剂5.经过变化平衡时间检查水质量，用经过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水级的水1.气泡气泡(锋利峰锋利峰)2.污染污染(随机噪声随机噪声)3.检测器灯延续噪声检测器灯延续噪声4.电干扰电干扰(偶尔噪声偶尔噪声)5.检测器中有气泡检测器中有气泡1.流动相脱气流动相脱气,加柱后背压加柱后背压2.清洗柱清洗柱,净化样品净化样品,用用HPLC级试剂级试剂3.改换氘灯改换氘灯4.采用稳压电源

12、采用稳压电源,检查干扰的来源检查干扰的来源(如如水浴等水浴等)5.流动相脱气流动相脱气,加柱后背压加柱后背压1.柱超载柱超载2.峰干扰峰干扰3.硅羟基作用硅羟基作用4.柱内烧结不锈钢失效柱内烧结不锈钢失效5.柱塌陷或构成短路通道柱塌陷或构成短路通道6.死体积或柱外体积过大死体积或柱外体积过大7.柱效下降柱效下降1.降低样品量降低样品量,添加柱直径采用较高容量的固定相添加柱直径采用较高容量的固定相2.清洁样品清洁样品,调整流动相调整流动相3.加三乙胺加三乙胺,用碱致钝化柱添加缓冲液或盐的浓度降低流动相用碱致钝化柱添加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值值,钝化样品钝化样品4.改换烧结不锈钢改换烧结不

13、锈钢,加在线过滤器加在线过滤器,过滤样品过滤样品5.改换色谱柱改换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件采用较弱腐蚀性条件6.衔接点降至最低衔接点降至最低,对一切衔接点作适宜调整对一切衔接点作适宜调整,尽能够采用细尽能够采用细内径的衔接纳内径的衔接纳7.用较低腐蚀条件用较低腐蚀条件,改换柱改换柱,采用维护柱采用维护柱1.进样体积过大进样体积过大2.在进样阀中呵斥峰扩展在进样阀中呵斥峰扩展3.数据系统采样速率太慢数据系统采样速率太慢4.检测器时间常数过大检测器时间常数过大1. 用流动相配样用流动相配样,总的样品体积小于第一峰总的样品体积小于第一峰的的15%2.进样前后排出气泡以降低分散进样前后排出气泡以降低分散3.设定速率应是每峰大于设定速率应是每峰大于10点点4.设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度