_酵母细胞的固定化

1、基础知识基础知识（一）（一） 固定化酶的应用实例固定化酶的应用实例生产高果糖浆生产高果糖浆（1）高果糖浆的生产原理：）高果糖浆的生产原理：葡萄糖异构酶葡萄糖异构酶果糖果糖葡萄糖葡萄糖(2)葡萄糖异构酶固定：葡萄糖异构酶固定：将葡萄糖异构酶固定在颗粒状载体将葡萄糖异构酶固定在颗粒状载体上，装入反应柱中。上，装入反应柱中。(3)高果糖浆的生产操作：高果糖浆的生产操作：从反应柱上端注入葡萄糖溶液，从从反应柱上端注入葡萄糖溶液，从下端流出果糖溶液，一个反应柱可连续下端流出果糖溶液，一个反应柱可连续使用半年。使用半年。 2.固定化酶的反应柱示意图固定化酶的反应柱示意图（二）固定化细胞技术（二）固定化细胞

2、技术1.将酶或细胞固定化的方法将酶或细胞固定化的方法（二）固定化细胞技术（二）固定化细胞技术1.将酶或细胞固定化的方法将酶或细胞固定化的方法包埋法包埋法（二）固定化细胞技术（二）固定化细胞技术1.将酶或细胞固定化的方法将酶或细胞固定化的方法将酶（或细胞）包埋将酶（或细胞）包埋在细微网格里在细微网格里包埋法包埋法（二）固定化细胞技术（二）固定化细胞技术1.将酶或细胞固定化的方法将酶或细胞固定化的方法将酶（或细胞）包埋将酶（或细胞）包埋在细微网格里在细微网格里包埋法包埋法化学结合法化学结合法（二）固定化细胞技术（二）固定化细胞技术1.将酶或细胞固定化的方法将酶或细胞固定化的方法将酶（或细胞）包埋将

3、酶（或细胞）包埋在细微网格里在细微网格里将酶（或细胞）相将酶（或细胞）相互连接起来互连接起来包埋法包埋法化学结合法化学结合法（二）固定化细胞技术（二）固定化细胞技术1.将酶或细胞固定化的方法将酶或细胞固定化的方法将酶（或细胞）包埋将酶（或细胞）包埋在细微网格里在细微网格里将酶（或细胞）相将酶（或细胞）相互连接起来互连接起来包埋法包埋法化学结合法化学结合法吸附法吸附法（二）固定化细胞技术（二）固定化细胞技术1.将酶或细胞固定化的方法将酶或细胞固定化的方法将酶（或细胞）包埋将酶（或细胞）包埋在细微网格里在细微网格里将酶（或细胞）相将酶（或细胞）相互连接起来互连接起来将酶（或细胞）吸附将酶（或细胞）

4、吸附在载体表面上在载体表面上包埋法包埋法化学结合法化学结合法吸附法吸附法【比较】酶和细胞的固定方法和特点【比较】酶和细胞的固定方法和特点固定对象固定对象酶酶细胞细胞适宜固定法适宜固定法化学结合法、化学结合法、物理吸附法物理吸附法包埋法包埋法特特 点点体积小，固定体积小，固定一种酶。一种酶。包埋法容易丢包埋法容易丢失失体积大，固定体积大，固定一系列酶。一系列酶。难以化学结合难以化学结合和吸附和吸附2.固定化酶和固定化细胞的联系与区别固定化酶和固定化细胞的联系与区别2.固定化酶和固定化细胞的联系与区别固定化酶和固定化细胞的联系与区别联系：联系：应用相同，都能催化某些反应应用相同，都能催化某些反应2

5、.固定化酶和固定化细胞的联系与区别固定化酶和固定化细胞的联系与区别联系：联系：应用相同，都能催化某些反应应用相同，都能催化某些反应区别：区别：1) 固定化细胞技术操作容易，成本低，固定化细胞技术操作容易，成本低，容易回收；容易回收；2) 固定化细胞技术对酶活性影响更小；固定化细胞技术对酶活性影响更小；3) 固定化细胞固定的一系列酶；固定化细胞固定的一系列酶；4) 由于大分子难以通过细胞膜，因此固由于大分子难以通过细胞膜，因此固定化细胞的应用有一定的限制；定化细胞的应用有一定的限制；思考思考将谷氨酸棒状杆菌生产谷氨将谷氨酸棒状杆菌生产谷氨酸的发酵过程变为连续的酶反应，应酸的发酵过程变为连续的酶反

6、应，应当固定（酶、细胞）；若将蛋白质变当固定（酶、细胞）；若将蛋白质变成氨基酸，应当固定（酶、细胞）。成氨基酸，应当固定（酶、细胞）。思考思考将谷氨酸棒状杆菌生产谷氨将谷氨酸棒状杆菌生产谷氨酸的发酵过程变为连续的酶反应，应酸的发酵过程变为连续的酶反应，应当固定（酶、当固定（酶、细胞细胞）；若将蛋白质变）；若将蛋白质变成氨基酸，应当固定（成氨基酸，应当固定（酶酶、细胞）。、细胞）。3. 固定化细胞的材料：固定化细胞的材料：固定化细胞时应当选用不溶于固定化细胞时应当选用不溶于水的多孔性载体材料，如明胶、琼水的多孔性载体材料，如明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯

7、酰胺等丙烯酰胺等1. 制备固定化酵母细胞制备固定化酵母细胞（1）酵母细胞的活化：）酵母细胞的活化：1g干酵母干酵母10mL蒸馏水蒸馏水50mL烧杯烧杯搅拌均匀搅拌均匀放置放置1h，使之活化。，使之活化。2. 实验设计实验设计思考思考2活化是指什么？活化是指什么？1. 制备固定化酵母细胞制备固定化酵母细胞（1）酵母细胞的活化：）酵母细胞的活化：1g干酵母干酵母10mL蒸馏水蒸馏水50mL烧杯烧杯搅拌均匀搅拌均匀放置放置1h，使之活化。，使之活化。2. 实验设计实验设计活化是指让处于休眠状态的微生活化是指让处于休眠状态的微生物重新恢复正常生活状态的过程。物重新恢复正常生活状态的过程。思考思考2活化

8、是指什么？活化是指什么？1. 制备固定化酵母细胞制备固定化酵母细胞（1）酵母细胞的活化：）酵母细胞的活化：1g干酵母干酵母10mL蒸馏水蒸馏水50mL烧杯烧杯搅拌均匀搅拌均匀放置放置1h，使之活化。，使之活化。2. 实验设计实验设计（2）配制）配制CaCl2溶液：溶液： 0.83gCaCl2150mL蒸馏水蒸馏水 200mL烧杯烧杯溶解备用。溶解备用。（3）配制海藻酸钠溶液：）配制海藻酸钠溶液：0.7g海藻酸海藻酸10mL水水50mL烧杯烧杯酒酒精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，使之溶化使之溶化蒸馏水定容到蒸馏水定容到10mL。（3）配制海藻酸钠溶液：）配

9、制海藻酸钠溶液：0.7g海藻酸海藻酸10mL水水50mL烧杯烧杯酒酒精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，使之溶化使之溶化蒸馏水定容到蒸馏水定容到10mL。思考思考3微火加热并不断搅拌的目微火加热并不断搅拌的目的是什么？的是什么？防止海藻酸钠焦糊。防止海藻酸钠焦糊。（3）配制海藻酸钠溶液：）配制海藻酸钠溶液：0.7g海藻酸海藻酸10mL水水50mL烧杯烧杯酒酒精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，使之溶化使之溶化蒸馏水定容到蒸馏水定容到10mL。思考思考3微火加热并不断搅拌的目微火加热并不断搅拌的目的是什么？的是什么？(4)海

10、藻酸钠溶液与酵母细胞的混合：海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合：将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸入到注射器中。入到注射器中。(4)海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合：海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合：将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸入到注射器中。入到注射器中。思考思考4为什么要海藻酸钠溶液冷为什么要海藻酸钠溶液冷却后才能加入酵母细胞？却后才能加入酵母细胞？(4)海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合：海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合：将溶化的海藻酸钠

11、溶液冷却至室将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸入到注射器中。入到注射器中。思考思考4为什么要海藻酸钠溶液冷为什么要海藻酸钠溶液冷却后才能加入酵母细胞？却后才能加入酵母细胞？防止高温杀死酵母细胞。防止高温杀死酵母细胞。（5）固定化酵母细胞：）固定化酵母细胞：以恒定速度缓慢地将注射器以恒定速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到中的溶液滴加到CaCl2溶液中，溶液中，形成凝胶珠状颗粒。形成凝胶珠状颗粒。（6）冲洗：将固定的酵母细胞凝）冲洗：将固定的酵母细胞凝胶珠用蒸馏水冲洗胶珠用蒸馏水冲洗23次。次。（二）（二）固定化酵母细胞的发酵固定化酵母细胞的

12、发酵（二）（二）固定化酵母细胞的发酵固定化酵母细胞的发酵（6）冲洗：将固定的酵母细胞凝）冲洗：将固定的酵母细胞凝胶珠用蒸馏水冲洗胶珠用蒸馏水冲洗23次。次。（7）发酵：）发酵：150mL10葡萄糖葡萄糖固定化酵母细胞固定化酵母细胞200mL锥形瓶锥形瓶密封密封25发酵发酵24h。思考思考5发酵过程中锥形瓶为什么要发酵过程中锥形瓶为什么要密封？密封？思考思考6锥形瓶中的气泡和酒精是怎锥形瓶中的气泡和酒精是怎样形成的？样形成的？思考思考7在利用固定化酶或固定化细在利用固定化酶或固定化细胞进行生产的过程中，需要无菌操作胞进行生产的过程中，需要无菌操作吗？吗？思考思考5发酵过程中锥形瓶为什么要发酵过程

13、中锥形瓶为什么要密封？密封？思考思考6锥形瓶中的气泡和酒精是怎锥形瓶中的气泡和酒精是怎样形成的？样形成的？思考思考7在利用固定化酶或固定化细在利用固定化酶或固定化细胞进行生产的过程中，需要无菌操作胞进行生产的过程中，需要无菌操作吗？吗？酵母菌的酒精发酵需要缺氧条件。酵母菌的酒精发酵需要缺氧条件。思考思考5发酵过程中锥形瓶为什么要发酵过程中锥形瓶为什么要密封？密封？思考思考6锥形瓶中的气泡和酒精是怎锥形瓶中的气泡和酒精是怎样形成的？样形成的？思考思考7在利用固定化酶或固定化细在利用固定化酶或固定化细胞进行生产的过程中，需要无菌操作胞进行生产的过程中，需要无菌操作吗？吗？酵母菌的酒精发酵需要缺氧条

14、件。酵母菌的酒精发酵需要缺氧条件。酵母菌进行无氧呼吸产生的。酵母菌进行无氧呼吸产生的。思考思考5发酵过程中锥形瓶为什么要发酵过程中锥形瓶为什么要密封？密封？思考思考6锥形瓶中的气泡和酒精是怎锥形瓶中的气泡和酒精是怎样形成的？样形成的？思考思考7在利用固定化酶或固定化细在利用固定化酶或固定化细胞进行生产的过程中，需要无菌操作胞进行生产的过程中，需要无菌操作吗？吗？酵母菌的酒精发酵需要缺氧条件。酵母菌的酒精发酵需要缺氧条件。酵母菌进行无氧呼吸产生的。酵母菌进行无氧呼吸产生的。需要。需要。播放播放“酵母细胞的固定化酵母细胞的固定化.DAT”例例1下列有关固定化技术的叙述，正下列有关固定化技术的叙述，

15、正确的是（确的是（ ）A. 固定化酶只是在细胞内才能发挥作固定化酶只是在细胞内才能发挥作用用B. 固定化酶能提高酶的利用率固定化酶能提高酶的利用率C. 酶的固定是酶分离纯化的常用方法酶的固定是酶分离纯化的常用方法D.固定化酶的固定化方式就是吸附在固定化酶的固定化方式就是吸附在固体表面上。固体表面上。例例1下列有关固定化技术的叙述，正下列有关固定化技术的叙述，正确的是（确的是（ ）A. 固定化酶只是在细胞内才能发挥作固定化酶只是在细胞内才能发挥作用用B. 固定化酶能提高酶的利用率固定化酶能提高酶的利用率C. 酶的固定是酶分离纯化的常用方法酶的固定是酶分离纯化的常用方法D.固定化酶的固定化方式就是

16、吸附在固定化酶的固定化方式就是吸附在固体表面上。固体表面上。例例2. 关于固定化细胞的叙述，正确的是关于固定化细胞的叙述，正确的是A. 催化效率高，低耗能、低污染催化效率高，低耗能、低污染B. 对环境的条件非常敏感，容易失活对环境的条件非常敏感，容易失活C. 既能与反应物充分接触，又能与产物既能与反应物充分接触，又能与产物分离分离D. 成本低、操作简单，但反应效果可能成本低、操作简单，但反应效果可能很低很低例例2. 关于固定化细胞的叙述，正确的是关于固定化细胞的叙述，正确的是A. 催化效率高，低耗能、低污染催化效率高，低耗能、低污染B. 对环境的条件非常敏感，容易失活对环境的条件非常敏感，容易

17、失活C. 既能与反应物充分接触，又能与产物既能与反应物充分接触，又能与产物分离分离D. 成本低、操作简单，但反应效果可能成本低、操作简单，但反应效果可能很低很低例例3. 溶解海藻酸钠，最好采用溶解海藻酸钠，最好采用_加加热的方法热的方法A. 小火间断小火间断B. 小火持续小火持续 C. 大火间断大火间断D. 大火持续大火持续例例3. 溶解海藻酸钠，最好采用溶解海藻酸钠，最好采用_加加热的方法热的方法A. 小火间断小火间断B. 小火持续小火持续 C. 大火间断大火间断D. 大火持续大火持续例例4.关于酵母菌的叙述，正确的是关于酵母菌的叙述，正确的是A. 酵母菌在营养物质充足时、环境适宜酵母菌在营

18、养物质充足时、环境适宜时，依靠有性生殖进行繁殖时，依靠有性生殖进行繁殖B. 酵母菌的代谢类型时异养厌氧型酵母菌的代谢类型时异养厌氧型C. 酵母菌的生物膜系统包括细胞膜、核酵母菌的生物膜系统包括细胞膜、核膜、各种的细胞器膜等膜膜、各种的细胞器膜等膜D. 用酵母菌酿酒时，应先密封后通气用酵母菌酿酒时，应先密封后通气例例4.关于酵母菌的叙述，正确的是关于酵母菌的叙述，正确的是A. 酵母菌在营养物质充足时、环境适宜酵母菌在营养物质充足时、环境适宜时，依靠有性生殖进行繁殖时，依靠有性生殖进行繁殖B. 酵母菌的代谢类型时异养厌氧型酵母菌的代谢类型时异养厌氧型C. 酵母菌的生物膜系统包括细胞膜、核酵母菌的生物膜系统包括细胞膜、核膜、各种的细胞器膜等膜膜、各种的细胞器膜等膜D. 用酵母菌酿酒时，应先密封后通气用酵母菌酿酒时，应先密封后通气例例5. 将酵母菌的培养液由富氧状态变为将酵母菌的培养液由富氧状态变为缺氧状态，下面加快的一项是缺氧状态，下面加快的一项是A. CO2的释放的释放B.