免疫学实验------胶体金免疫层析工艺与技术

1、胶体金免疫层析技术胶体金免疫层析技术（colloidal gold immunochromatography assay, GICA） 20世纪80-90年代在酶联免疫吸附试验、乳胶凝集试验、单克隆抗体技术、胶体金免疫技术和新材料技术基础上发展了新型体外诊断技术胶体金免疫层析技术（colloidal gold immunochromatography assay, GICA）。 胶体金免疫层析技术 GICA是一种新型检测方法，具有简单快速、结果清晰，可通过肉眼判定结果、无需复杂操作技巧和特殊设备、灵敏度高、无污染、携带方便等优点。 己成为临床快速诊断领域发展的一个新方向，在发达国家己得到广泛应

2、用。疾病的快速诊断及药物残留分析疾病的快速诊断及药物残留分析类别类别应用领域应用领域检测的物质检测的物质人类医学人类医学各 级 医 院 , 血站,CDC,防疫站,诊断中心；家庭自检；商检系统；边检口岸；公安系统.传染病（乙肝五项,HIV, SARS等）标志物（AFP、肌钙蛋白、粪便血红蛋白等）女性妊娠 hCG(早孕)毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒）农牧业农牧业畜牧兽医站, 商检系统,边检口岸,农牧类院系和研究所传染病（禽流感,链球菌等）病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）环境环境环保监测部门,研究机构有害物质超标食品安全食品安全食品安全检测中心,各监管部门农兽药残留（磺胺类、瘦肉精等）,大肠杆菌

3、,黄曲霉素 胶体金（colloidal gold）也称金溶胶（goldsol），是金盐被还原成原子金后形成的金颗粒悬液。胶体金zeta电位可以使胶体金颗粒之间相互排斥，以维持胶体金的稳定状态。 基础金核双离子 内层负离子（AuC12） zeta电位 外层离子层 H+分散在胶体间的溶液中 胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功能，而不被坏其生物活性，可以与蛋白质等（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等非共价结合，形成胶体金标记物。 衬板样品垫金标垫吸收垫膜胶体金免疫层析试纸条的构成胶体金免疫层析试纸条类型：夹心法夹心法反应原理反应原理C 阴性B 阳性GICA有三种反应模式：夹心法，间接法，竞争抑制法。间接法

4、反应原理间接法反应原理C 阴性B 阳性阴性弱阳性阳性竞争抑制法反应原理检测线颜色强度与SD浓度负相关目的：目的：掌握间接试纸卡的检测原理，操掌握间接试纸卡的检测原理，操作方法及结果判定方法作方法及结果判定方法1 1、禽流感、禽流感H9H9亚型抗原检测试纸卡亚型抗原检测试纸卡2 2、禽流感抗体检测试纸卡、禽流感抗体检测试纸卡3 3、磺胺嘧啶残留检测试纸卡、磺胺嘧啶残留检测试纸卡4 4、禽流感、禽流感H9H9亚型病毒阳性对照亚型病毒阳性对照5 5、禽流感、禽流感H9H9亚型病毒阴性亚型病毒阴性对照对照6 6、禽流感抗体阳性对照禽流感抗体阳性对照7 7、磺胺嘧啶残留阳性对照磺胺嘧啶残留阳性对照8 8、磺胺嘧啶残留阴性对照磺胺嘧啶残留阴性对照实验材料：实验材料：1 1、加被检样品：加被检样品：100 ul/100 ul/孔，阳性、阴性对照。孔，阳性、阴性对照。2 2、5min5min后观察结果。后观察结果。实验步骤：实验步骤：结果判定：结果判定：1、禽流感、禽流感H9亚型抗原检测试纸卡：两条红线，阳亚型抗原检测试纸卡：两条红线，阳 性；一条红线，阴性；无红线，试纸失效。性；一条红线，阴性；无红线，试纸失效。2、禽流感抗体检测试纸卡：两条红线，阳性；一、禽流感抗体检测试纸卡：两条红线，阳性；一 条红线，阴性；无红线，试纸失效。条红线，阴性；无红线，试纸失效。