实验十三血乳酸的测定与应ppt课件

1、实验十三实验十三 血乳酸的测定与运用血乳酸的测定与运用经过实验使学生掌握体内血乳酸的测定方法及该目的在运经过实验使学生掌握体内血乳酸的测定方法及该目的在运动实际中的运用和意义，为体育教学和运动训练提供指点。动实际中的运用和意义，为体育教学和运动训练提供指点。进一步稳定离心机、可调微量移液器、振荡器等仪器的根进一步稳定离心机、可调微量移液器、振荡器等仪器的根本操作。掌握实验对象取材、标本处置的方法与半自动生本操作。掌握实验对象取材、标本处置的方法与半自动生化分析仪的操作方法。化分析仪的操作方法。经过综合设计型实验的实验设计与研讨过程，提高学生的经过综合设计型实验的实验设计与研讨过程，提高学生的学

2、习兴趣，培育学生查阅文献资料、独立思索、创新思想、学习兴趣，培育学生查阅文献资料、独立思索、创新思想、动手操作、分析问题和处置问题的才干，使学生根本掌握动手操作、分析问题和处置问题的才干，使学生根本掌握从事普通科学研讨的方法。从事普通科学研讨的方法。1 1 实验目的实验目的2 2 实验原理实验原理乳酸是糖酵解供能系统的终产物，又是有氧代谢系统的乳酸是糖酵解供能系统的终产物，又是有氧代谢系统的重要氧化物质，运动时乳酸主要在骨骼肌中生成，然后重要氧化物质，运动时乳酸主要在骨骼肌中生成，然后透过细胞膜进入血液，并随血液循环到达身体的其他组透过细胞膜进入血液，并随血液循环到达身体的其他组织被代谢消除。

3、可在肝内经糖异生途径转变为葡萄糖，织被代谢消除。可在肝内经糖异生途径转变为葡萄糖，在供能体系中占有重要位置。与此同时，乳酸过多对酸在供能体系中占有重要位置。与此同时，乳酸过多对酸碱平衡的影响又成为负面效应，导致疲劳发生。碱平衡的影响又成为负面效应，导致疲劳发生。因此，运动时乳酸的生成、运动后乳酸的消除，以及运因此，运动时乳酸的生成、运动后乳酸的消除，以及运动训练和体育锻炼中血乳酸目的的运用成为运动生物化动训练和体育锻炼中血乳酸目的的运用成为运动生物化学研讨的重要内容之一。学研讨的重要内容之一。安静时，人体静脉血里的乳酸物质的量浓度为安静时，人体静脉血里的乳酸物质的量浓度为0.45-0.45-1

4、.3mmol/L1.3mmol/L。猛烈运动时，肌肉内糖的无氧分解加强，。猛烈运动时，肌肉内糖的无氧分解加强，血乳酸浓度显著升高，而且在某些工程中两者的相关系血乳酸浓度显著升高，而且在某些工程中两者的相关系数很大，其增长情况与运动强度、氧债、训练程度等要数很大，其增长情况与运动强度、氧债、训练程度等要素亲密相关，因此可直接用运动后血乳酸的浓度来评定素亲密相关，因此可直接用运动后血乳酸的浓度来评定无氧代谢的才干，如无氧代谢的才干，如400m400m跑后，血乳酸低于跑后，血乳酸低于10 mmol/L10 mmol/L阐阐明无氧代谢才干差；到达明无氧代谢才干差；到达14-15 mmol/L14-15

5、 mmol/L阐明无氧酵解才阐明无氧酵解才干强。干强。当今血乳酸不只用来评定速度耐力程度，还用来评定有当今血乳酸不只用来评定速度耐力程度，还用来评定有氧代谢才干，控制运动强度，预测成果等等。氧代谢才干，控制运动强度，预测成果等等。3 3 实验器材与试剂实验器材与试剂实验仪器实验仪器 采血针、吸血管、移液管、聚苯乙烯微量采血针、吸血管、移液管、聚苯乙烯微量细胞培育板、酶联免疫检测仪细胞培育板、酶联免疫检测仪 试剂试剂辣根过氧化物酶羊抗兔辣根过氧化物酶羊抗兔IgGIgG； 包被液：包被液：0.05 mol/L0.05 mol/L碳酸缓冲液碳酸缓冲液pHpH值为值为9.639.63：Na2CO30.

6、15gNa2CO30.15g，NaHCO20.293gNaHCO20.293g，蒸馏水稀释至，蒸馏水稀释至100ml100ml；稀释液稀释液PBS-TweenPBS-Tween：NaCl8gNaCl8g，KCl0.2gKCl0.2g，KH2PO4 0.2gKH2PO4 0.2g，Na2HPO412H2O 2.9gNa2HPO412H2O 2.9g，Tween-20Tween-20，0.5ml0.5ml，蒸馏水加至，蒸馏水加至1000ml1000ml；洗涤液：同稀释液；洗涤液：同稀释液；封锁液：封锁液：0.5%0.5%质量分数质量分数BSABSA用用PBSPBS配制；配制；邻苯二胺溶液底物：邻苯

7、二胺溶液底物： 配制：配制：0.1 mol/L0.1 mol/L柠檬酸柠檬酸2.1g/100 ml2.1g/100 ml，取，取6.1 ml6.1 ml；0.2 0.2 mol/L Na2HPO412H2Omol/L Na2HPO412H2O7.163 g/100 ml7.163 g/100 ml，邓邻苯二胺，邓邻苯二胺8 8 mgmg溶解；临用前加溶解；临用前加30%30%体积分数体积分数H2O240 lH2O240 l； 终止液：终止液：2mol/L H2SO42mol/L H2SO4。4 4 实验方法与步骤实验方法与步骤4-54-5人一组，自在组合编组，选定一人担任小组长。人一组，自在组

8、合编组，选定一人担任小组长。查找国内外近十年有关运动训练中血乳酸变化的查找国内外近十年有关运动训练中血乳酸变化的文献资料并总结，以小组为单位进展讨论，拟定文献资料并总结，以小组为单位进展讨论，拟定实验的内容与目的。实验的内容与目的。根据拟定的实验内容与目的，讨论拟定运动实验根据拟定的实验内容与目的，讨论拟定运动实验对象的训练方案：运动方式、运动强度与时间等对象的训练方案：运动方式、运动强度与时间等包括学会训练实验动物。包括学会训练实验动物。详细制定实验步骤与方法，严厉按照实验步骤与详细制定实验步骤与方法，严厉按照实验步骤与要求进展实验。要求进展实验。设计本次实验方案设计本次实验方案实验对象的选

9、择不同工程运发动运动训练方式、强度、实验对象的选择不同工程运发动运动训练方式、强度、继续时间及取样时间的选择。继续时间及取样时间的选择。 血乳酸的实验测定方法选择血乳酸的实验测定方法选择 可采用酶联免疫吸附法可采用酶联免疫吸附法enzyme-linked immunosorbent enzyme-linked immunosorbent assay, ELISAassay, ELISA，或放射免疫法，或放射免疫法Radioimmuniassay,RLARadioimmuniassay,RLA测定。测定。确定实验数据的统计学处置方法。确定实验数据的统计学处置方法。 全血乳酸检测试剂盒法全血乳酸检

10、测试剂盒法 原理：以原理：以NAD+NAD+为氢受体，为氢受体，LDHLDH催化乳酸脱氢生成丙酮酸，催化乳酸脱氢生成丙酮酸，使使NAD+NAD+转化成转化成NADHNADH。其中。其中PMSPMS递氢使递氢使NBTNBT复原为紫色呈色物，复原为紫色呈色物，呈色物的吸光度在呈色物的吸光度在530nm530nm时与乳酸含量成线性关系。时与乳酸含量成线性关系。 资料与试剂：采血针、吸血管、离心管、台式离心机、资料与试剂：采血针、吸血管、离心管、台式离心机、超声清洗机、试管架、移液枪、超声清洗机、试管架、移液枪、TPTP头、水浴箱、可见光分头、水浴箱、可见光分光光度计、比色杯。光光度计、比色杯。空白管

11、空白管规范管规范管测定管测定管蒸馏水蒸馏水mlml0.020.023mmol/L3mmol/L规范液规范液mlml0.020.02上清液上清液mlml0.020.02酶工作液酶工作液mlml1 11 11 1显色剂显色剂mlml0.20.20.20.20.20.2混匀，混匀，3737水浴准确反响水浴准确反响1010分钟分钟 终止液终止液mlml2 22 22 2混匀，混匀，530nm530nm，1cm1cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度光径，蒸馏水调零，测各管吸光度 规范浓度为规范浓度为3mmol/L3mmol/L，稀释倍数为，稀释倍数为7 7倍倍表表3-17 3-17 全血乳酸检测试剂盒的操

12、作全血乳酸检测试剂盒的操作5 5 实验参考方案实验参考方案 实验对象：实验对象为运动人体科学专业学生实验对象：实验对象为运动人体科学专业学生1010名，采名，采用功率自行车进展大强度运动训练建立运动实验模型：用功率自行车进展大强度运动训练建立运动实验模型：采用半自动生化分析仪检测血液标本。采用半自动生化分析仪检测血液标本。 运动训练方案：运动模型的建模，采用功率自行车进展运动训练方案：运动模型的建模，采用功率自行车进展有氧运动训练运动方案可自行设计。继续运动有氧运动训练运动方案可自行设计。继续运动5 5分分钟，运动强度由心率控制，为实验对象最大心率达钟，运动强度由心率控制，为实验对象最大心率达

13、85-85-9595。 实验方法与步骤：实验方法与步骤： 包被抗原：用包被液将抗原做适当稀释，普通为包被抗原：用包被液将抗原做适当稀释，普通为1-10 1-10 g/g/孔，每孔加孔，每孔加200 l200 l，37 37 温育温育1 h1 h，或，或44冰箱放冰箱放置置16-18 h16-18 h。洗涤：倒尽板孔中液体，加洗涤：倒尽板孔中液体，加200l200l洗涤液，反复洗涤液，反复3 3次，最后次，最后将反响板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽。将反响板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽。加封锁液加封锁液200l200l，3737温育温育1h1h。洗涤同。洗涤同。采集受试者运动前与运动后血液

14、制成血清采集受试者运动前与运动后血液制成血清加被检血清：用稀释液将被检血清作几种稀释，每孔加被检血清：用稀释液将被检血清作几种稀释，每孔200l200l。同时作稀释液对照。同时作稀释液对照。3737温育温育12h12h，或室温放置，或室温放置2 h2 h。洗涤同。洗涤同。加辣根过氧化物酶羊抗兔加辣根过氧化物酶羊抗兔IgGIgG，每孔，每孔200l200l，3737温育温育1h1h，或室温放置或室温放置2h2h。洗涤同。洗涤同。加底物：邻苯二胺溶液加加底物：邻苯二胺溶液加200l200l，室温暗处，室温暗处5min5min。察看结果：。察看结果：用酶联免疫检测仪记录用酶联免疫检测仪记录A190

15、nmA190 nm读数。读数。 实验报告实验结果与分析内容实验报告实验结果与分析内容 实验结果：实验结果为实验对象运动后，血乳酸含量显著实验结果：实验结果为实验对象运动后，血乳酸含量显著升高，运动前血乳酸浓度为升高，运动前血乳酸浓度为0.45-1.3 mmol/L0.45-1.3 mmol/L，运动后即刻，运动后即刻为为10-15 mmol/L10-15 mmol/L，两者差别具有统计学意义，两者差别具有统计学意义P0.05P0.05。 实验结果分析：乳酸是糖酵解供能系统的终产物，又是有实验结果分析：乳酸是糖酵解供能系统的终产物，又是有氧代谢系统的重要氧化物质，运动时乳酸主要在骨骼肌中生氧代谢系统的重要氧化物质，运动时乳酸主要在骨骼肌中生成，可在肝内经糖异生途径转变为葡萄糖，在供能体系中占成，可在肝内经糖异生途径转变为葡萄糖，在供能体系中占有重要位置，可直接用运动后血乳酸的浓度来评定无氧代谢有重要位置，可直接用运动后血乳酸的浓度来评定无氧代谢的才干。如的才干。如400 m400 m跑后，血乳酸低于跑后，血乳酸低于10 mmol/L10 mmol/L阐明无氧代谢阐明无氧代谢才干差；到达才干差；到达14-15 mmol/L14-15 mmol/L阐明无氧酵解才干强。阐明无氧酵解才干强。6 6 本卷须知本卷须知 设计运动方案时，应留意检索文献资料