激活剂及抑制剂对酶活性的影响(修)

1、一、实验目的一、实验目的 1. 1.掌握激活剂及抑制剂对酶掌握激活剂及抑制剂对酶活性影响的原理。活性影响的原理。 2. 2.熟悉实验内容及操作步骤。熟悉实验内容及操作步骤。 3. 3.了解温度对酶活性的影响。了解温度对酶活性的影响。 二、实验原理二、实验原理 ( (一一) )激活剂对酶活性影响的原理激活剂对酶活性影响的原理 使酶由无活性变为有活性或使使酶由无活性变为有活性或使酶活性增加的物质称为酶的激活剂。酶活性增加的物质称为酶的激活剂。 激活剂是指无机离子，如金属离子激活剂是指无机离子，如金属离子Mg2+ +、Zn2+2+ 、酸根离子、酸根离子 Cl- 、 PO43- 和小分子有机物胆汁酸盐

2、、和小分子有机物胆汁酸盐、VC等。等。激活剂激活剂必需激活剂必需激活剂非必需激活剂非必需激活剂如：己糖激酶必需如：己糖激酶必需由由Mg2+ +激活激活 如：如：Cl- -是唾是唾 液淀粉酶的激活剂液淀粉酶的激活剂淀粉淀粉加碘呈色加碘呈色紫糊精紫糊精红糊精红糊精无色糊精无色糊精麦芽糖麦芽糖紫色紫色淀粉酶催化淀粉逐步水解淀粉酶催化淀粉逐步水解蓝色蓝色红色红色无色无色无色无色还原糖还原糖加激活剂加激活剂Cl- ( (1NaCl) )( (二二) )抑制剂对酶活性影响的原理抑制剂对酶活性影响的原理 能够有选择地使酶的活性降低能够有选择地使酶的活性降低或丧失，但不能使酶蛋白变性的物或丧失，但不能使酶蛋白

3、变性的物质称为酶的抑制剂。质称为酶的抑制剂。 抑制剂多与酶活性必需基团结抑制剂多与酶活性必需基团结合，直接或间接的影响酶的活性中心，合，直接或间接的影响酶的活性中心，从而抑制酶的活性。从而抑制酶的活性。 根据抑制剂与酶结合的紧密程根据抑制剂与酶结合的紧密程度不同，又分可逆性抑制和不可逆抑度不同，又分可逆性抑制和不可逆抑制剂。制剂。抑制剂抑制剂可逆性抑制剂可逆性抑制剂不可逆性抑制剂不可逆性抑制剂 抑制剂通过非共价键或酶抑制剂通过非共价键或酶- -底物底物复合物可逆性结合，使酶活性降低复合物可逆性结合，使酶活性降低或丧失。采用透析或超滤等物理方或丧失。采用透析或超滤等物理方法将抑制剂除去，恢复酶活

4、性。法将抑制剂除去，恢复酶活性。 抑制剂通常与酶活性中心上的必需基团形成共抑制剂通常与酶活性中心上的必需基团形成共价键，使酶失去活性。不能用透析、超滤等方法价键，使酶失去活性。不能用透析、超滤等方法将其除去，只能靠某药物才能解除，恢复酶活性。将其除去，只能靠某药物才能解除，恢复酶活性。重金属离子重金属离子Cu2+对唾液淀粉酶有抑制作用对唾液淀粉酶有抑制作用 1. Cl-对唾液淀粉酶具有激活作用。对唾液淀粉酶具有激活作用。 2.重金属离子，例如重金属离子，例如Cu2+对唾液淀对唾液淀粉酶有抑制作用，粉酶有抑制作用， 很多药物是酶的抑制剂，通过对很多药物是酶的抑制剂，通过对病原体内某些酶的抑制作用

5、或改变体病原体内某些酶的抑制作用或改变体内某些酶的活性而发挥其治疗功效，内某些酶的活性而发挥其治疗功效，了解酶的抑制作用是阐明药物作用机了解酶的抑制作用是阐明药物作用机制和设计研究新药的重要途径。制和设计研究新药的重要途径。激活剂及抑制剂对酶活性影响的意激活剂及抑制剂对酶活性影响的意义义 三、实验仪器与试剂三、实验仪器与试剂 1.1.仪器仪器 烧杯、试管、点滴板、滴管、烧杯、试管、点滴板、滴管、漏斗、刻度吸量管、洗耳球、水浴漏斗、刻度吸量管、洗耳球、水浴箱等。箱等。 2. 2.试剂试剂 1淀粉淀粉液、液、 1 NaCl溶液、溶液、1CuSO4溶液、溶液、 1NaSO4溶液、溶液、稀碘液、唾液。

6、稀碘液、唾液。四、实验内容及操作步骤四、实验内容及操作步骤 1. 1.收集唾液收集唾液 用用少量少量（约（约35ml）冷冷水水漱口约漱口约1min，收集唾液，收集唾液至漏斗中，过滤，备用。至漏斗中，过滤，备用。 2.2.加样加样试剂（试剂（ ml ）试管试管1试管试管2试管试管3试管试管4蒸馏水蒸馏水1 ml2 ml1 ml1 ml1%NaCl1 ml1%CuSO41 ml1%淀粉淀粉1 ml1 ml1 ml1 ml1%Na2SO41 ml唾液唾液2 滴滴2 滴滴2 滴滴2 滴滴加碘现象加碘现象观察、记录实验现象。观察、记录实验现象。 3. 3. 振荡混匀，同时置于振荡混匀，同时置于3737水

7、浴中，每水浴中，每2min2min取出一滴，在点滴取出一滴，在点滴板上做碘的呈色反应。板上做碘的呈色反应。 当点滴板上有一孔呈现无色当点滴板上有一孔呈现无色时，取出水浴中的时，取出水浴中的4 4支试管，各管支试管，各管加碘液加碘液1 13 3滴，摇匀。滴，摇匀。 观察观察4 4支试管的颜色，比较反应支试管的颜色，比较反应速度。速度。 五、注意事项五、注意事项 1.1.刻度吸量管不能交叉使用，否则污刻度吸量管不能交叉使用，否则污染试剂，影响反应现象。染试剂，影响反应现象。 2.2.实验所用试管冲洗干净；编号实验所用试管冲洗干净；编号1 1、2 2、3 3、4 4的烧杯及滴管取淀粉水解液时不能交的

8、烧杯及滴管取淀粉水解液时不能交叉使用，否则污染试剂，影响反应现象。叉使用，否则污染试剂，影响反应现象。 3. 3. 做完做完实验实验所有试剂摆放好，取淀粉所有试剂摆放好，取淀粉的刻度吸量管冲洗干净，桌面擦干净，登的刻度吸量管冲洗干净，桌面擦干净，登记签名。记签名。 4.4.值日生听老师安排，认真打扫，经值日生听老师安排，认真打扫，经老师批准才能离开实验室。老师批准才能离开实验室。六、思考题六、思考题 1. 1.什么是激活剂和抑制什么是激活剂和抑制剂？本实验中的激活剂和抑制剂？本实验中的激活剂和抑制剂分别是什么？剂分别是什么？ 2.2.四支试管中加入四支试管中加入1Na2SO4的目的是什么？的目

9、的是什么？ 下次实验：下次实验： P76页页 血糖测定血糖测定实验报告明天交，请组长负起责实验报告明天交，请组长负起责任。谢谢同学们配合！任。谢谢同学们配合！实验现象分析实验现象分析 试管试管1 1遇碘呈无色，证明遇碘呈无色，证明Cl- -离子对唾液淀粉酶有激活离子对唾液淀粉酶有激活作用。作用。 试管试管2 2遇碘呈红色，证明唾液淀粉酶也能催化淀粉水遇碘呈红色，证明唾液淀粉酶也能催化淀粉水解，但比加入激活剂解，但比加入激活剂Cl- -离子水解慢。离子水解慢。 试管试管3 3遇碘呈蓝色，证明遇碘呈蓝色，证明Cu2+2+离子对唾液淀粉酶有抑离子对唾液淀粉酶有抑制作用，使酶活性丧失，淀粉不能水解。制作用，使酶活性丧失，淀粉不能水解。 试管试管4 4遇碘呈紫色，唾液淀粉酶催化淀粉水解比试管遇碘呈紫色，唾液淀粉酶催化淀粉水解比试管2 2更慢，证明更慢，证明Na+ 、 SO42-离子对唾液淀粉酶的催化活性离子对唾液淀粉酶的催化活性有干扰；同时也证明了有干