生长抑素输注对YY肽分泌的影响：关于肥胖症和急性期及恢复期神经性厌食症的研究

1、细胞分子生物学论文翻译姓名： 张均叶 专业： 食品工程 学号：6120111059 生长抑素输注对YY肽分泌的影响：关于肥胖症和急性期及恢复期神经性厌食症的研究摘要目的：神经性厌食症（AN）和肥胖症（OB）中L细胞产生的多种胃肠肽（包括食欲抑制肽YY（PYY）的变化。AN患者呈现出较高水平的PYY，而OB患者空腹和餐后PYY分泌功能明显减弱。据报道，生长抑素（生长激素释放抑制因子（SRIF）可抑制动物和健康人体内血浆PYY浓度，但SRIF输注对AN和OB患者自发性PYY分泌的效果不明确。方法：共18名青年女性受试者，其中7名急性期AN患者（A-AN），4名恢复期AN患者（R-AN），7名OB患

2、者。所有受试者均接受SRIF输注（9 ug/kg /h，静注60分钟），SRIF 输注前和输注后不同时间段分别采血样并检测各时间点的PYY水平。结果：SRIF可显著抑制R-AN和OB患者血浆PYY浓度，但不影响A-AN患者血浆PYY浓度。SRIF在OB患者体内的抑制作用可持续90分钟。停止R-AN患者SRIF输注后血浆PYY水平很快恢复到基础水平，而停止OB患者SRIF输注后，PYY水平在基线水平上有所上升。输液后R-AN患者PYY曲线下面积变化（AUC）显著高于A-AN和OB患者。A-AN和OB患者PYY曲线下面积变化存在显著差异。结论：这些结果表明，A-AN和OB患者体内分别存在着对SRI

3、F抑制作用低敏感和超敏感的L细胞。引言生长抑素（生长激素释放抑制因子（SRIF）主要以两种生物活性分子形式存在SRIF14和SRIF28，它们由共同的生长抑素前体分化而来。胃肠道是最大的SRIF来源，并使两种分子形式呈相对选择性分布。SRIF的生物学效应是由五个不同受体（SSTR1-5）介导的，它们广泛表达于包括胃肠道在内的中枢神经系统和外周神经系统。YY肽（PYY）是一种由36个氨基酸组成的肽，它由一种特殊肠内分泌细胞L细胞合成并释放到血液循环中，该细胞主要位于胃肠道前端。本研究描述了PYY的两种主要形式：PYY1-36和PYY3-36，在禁食和进食状态下以循环形式存在的肽主要是PYY3-3

4、6。营养物摄入、能量负荷、持续进食、营养成分合成都会使PYY水平迅速地升高。循环PYY水平首次升高发生在餐后摄食15分钟内，此时营养成分尚未达到远端胃肠道L细胞，表明此释放过程存在神经或激素调节机制。血浆PYY峰值通常出现在餐后1-2小时内，随后几个小时会保持稳定水平。PYY外周给药可减少啮齿类动物和正常体重人的食物摄入量。据报道，PYY对OB患者具有同样的食欲抑制作用，尽管该类患者在基准条件下表现出空腹和餐后较低的肽水平。据此，一些关于成人、儿童和婴幼儿的研究已报道了PYY浓度和肥胖指标之间的负相关性。除了OB患者，神经性厌食症（AN）患者在空腹和进餐刺激后PYY水平也会升高，这表明该肽可能

5、在饮食失调症中发挥着一定的病理生理作用。以前在动物模型中的研究已经表明，SRIF是一种有效的PYY分泌抑制剂。此外，SRIF还可抑制健康受试者餐后对PYY的反应性，目前SRIF对AN和OB患者PYY分泌的影响尚不明确。因此，基于上述情况，我们研究了输注SRIF14对A-AN、R-AN和OB患者自发性PYY释放的影响。材料和方法对象与方法对18名青年女性受试者（19-33岁A-AN 患者7例；17-32岁R-AN患者4例；17-29岁OB患者7例）进行研究。研究对象的临床和激素特性见表1。依据精神疾病诊断和统计手册IV-TR，所有AN患者均符合诊断标准。对AN患者采取一系列复杂处理，包括营养康复

6、、个体心理治疗、家庭疗法、住院和门诊患者行为咨询，使他们保持稳定且较低的正常体重，同时有至少6个月月经史，之后可以确诊R-AN。RAN患者症状持续15.84.0个月。所有患者知情同意参与这项研究，并获当地伦理委员会批准。OB患者（身体质量指数（BMI）30kg/m2）没有任何内分泌或精神疾病史或客观证据，并且在前6个月未服用任何药物。所有月经期R-AN和OB患者仅研究其月经早期卵泡期，A-AN患者均处于闭经期。表1研究对象人口统计学和激素特性。数据以平均值S.E.M表示。 *P0.01指R-AN；P0.01指A-AN。禁食一夜后，在两前臂留置两套插管，分别取血样并做药物注射。SRIF（SRIF

7、14；意大利罗马雪兰诺思他宁）与50毫升正常生理盐水混合，以9ug/mg速率静脉注射，60分钟内注完（研究0-60分钟），分别在0、30、45、60、90、105、120、135、150分钟时采血。测定每个时间段血浆PYY水平。根据A-AN患者体内SRIF抑制GH 分泌的效应选择剂量。总之，输液前、中、后分别测定血清GH水平（比如0、30、60分钟）。在SRIF输注前30分钟，测定血浆雌二醇（E2）、游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、促甲状腺激素、 IGF1、免疫反应性胰岛素（IRI）基线水平。总血浆PYY（包括PYY1-36和PYY3-36）用市售RIA PYY（美国圣

8、查尔斯凌嘉研究所）测定。方法的灵敏度为10pg/ml；批内和批间变异系数分别为2.9和7.1。用化学发光免疫分析法测定血清GH水平（美国San Juan Capistrano州尼科尔斯诊断研究所），检测灵敏度是0.01ng/ml，批内和批间变异系数分别为4.4和8.6。用化学发光免疫分析法测定血清IGF1水平（尼科尔斯诊断研究所），检测灵敏度为6 ug/L，批内和批间变异系数分别为4.2和6.3。采用电化学发光免疫分析（ECLIA罗氏诊断公司）测定血清IRI，灵敏度为0.2uU/ml，批内和批间变异系数分别为4.2和8.2，本实验室正常范围为2.6-24.9uU/ml。采用电化学发光免疫分析（

9、ECLIA罗氏诊断公司）测定血清TSH，灵敏度为0.005uU/ml；批内和批间变异系数分别为5.4和8.7，正常范围为0.27-4.2uU/ml。采用电化学发光免疫分析（ECLIA罗氏诊断公司）测定血清FT4，检测灵敏度为0.30 pmol/L，批内和批间变异系数分别为4.8和6.6，正常范围为12-22 pmol/L。采用电化学发光免疫分析（ECLIA罗氏诊断公司）测定血清FT3，检测灵敏度为0.4pmol/L，批内和批间变异系数分别为5.1和9.0，正常范围为2.8-7.1 pmol/L。采用电化学发光免疫分析测定血清E2，检测灵敏度为18.4 pmol/L，批内和批间变异系数分别为4.

10、9和6.2，月经期卵泡期正常范围为90.1-716pmol/l。在测试过程中无不良反应。 图1急性期（A-AN）和恢复期（R-AN）神经性厌食症患者及肥胖症患者（OB）输注SRIF（9mg/kg/h静脉注射）1小时后血浆PYY浓度分布（均值S.EM）。条形表示时序和输注时间。见正文组内和组间统计学意义差异。统计分析用专业统计软件包（美国圣地亚哥Prism5 GraphPad软件）进行数据分析和图表制作。结果用平均值S.E.M表示。为了便于比较实验过程中PYY分泌情况，以绝对值或PYY曲线下面积（AUC）表示血浆PYY浓度。（AUC：停止SRIF输注后AUC检测值减去60分钟血浆PYY浓度，乘以

11、各患者90分钟检测值）。为了证明输注SRIF的有效性，通过计算AUC 衡量SRIF对血清GH水平抑制作用。（AUC：输注SRIF时AUC检测值减去60分钟血清GH浓度，乘以各患者60分钟检测值）。使用重复测定法对血浆PYY浓度进行组内和组间双向方差分析，之后进行Tukey检验。采用单因素方差分析比较三组PYY AUC以及研究对象的其他人口统计学和激素特性。对PYY基线水平与PYY AUC之间的相关性和其他参数进行线性回归分析。A P值0.05作为有统计学差异的界值。图2 A-AN、R-AN和OB患者输注1小时SRIF（9mg/kg/h静脉注射）后血浆PYY AUC均值S.EM。AUC：停药后曲

12、线下面积减去60分钟时血浆PYY浓度再乘以90分钟时各个体测定值。方括号和星号表示具有统计学差异的组别。 * P0.001。结果表1显示了A-AN、 R-AN和OB女性患者年龄、体重指数、PYY、 E2、 FT3、 FT4、 TSH、 IGF1、IRI的平均值S.E.M。也有关于A-AN和R-AN患者此状况持续时间的报道。输注SRIF后A-AN和R-AN患者血清GH水平明显受抑制。(在0和60分钟GH水平如下：A-AN患者为4.17 0.85，0.90 0 41ng/ml；R-AN患者为4.922.89，0.480 18 ng/ml，P0.01；AUC： A-AN患者-122.302.88 n

13、g/mlmin；R-AN患者-176.7050.64 ng/mlmin；在SRIF输注前后OB患者血清GH水平无显著统计差异(分别为0.070.02，0.050.01ng/ml；AUC：20.0011.10 ng/mlmin)，显示输注SRIF的有效性。 A-AN患者血清PYY基线浓度显著高于OB患者（分别为127.97.0和109.77.8 pg/ml，P0.001)，R-AN 患者同样如此(114.510.9 pg/ml)，尽管这种差异不具有统计学意义。OB患者血清PYY基线浓度高于R-AN患者，但不具有统计学意义。 在30150min时间段，R-AN患者血清PYY浓度显著低于A-AN患者

14、（(P0.01），且A-AN患者持续高于OB患者（所有时间点P0.001)。除了90分钟时测定值，R-AN和OB患者PYY浓度无显著差异（P0.05；图1) 在30、45、60 min时，SRIF明显抑制了R-AN和OB患者血清PYY浓度，但对A-AN患者无影响(P0.001)。对OB患者这种抑制效应可持续到90分钟(P0.001；表1)。 SRIF输注060分钟时对R-AN和OB患者血清PYY抑制作用明显高于A-AN患者(分别为29.22.3，31.53.1%和14.54.2%, P0.001)。虽然R-AN和OB患者血清PYY浓度不存在显著差异（数据未显示）。 停止输注SRIF会导致R-A

15、N患者血清PYY浓度从60分钟时81.17.9 pg/ml 迅速升高到 90分钟时119.013.5pg/ml(P0.001)。停止输注SRIF会导致OB患者血清PYY浓度从60分钟时75.22.4 pg/ml缓慢升高到135分钟时99.112.6 pg/ml (P0.001；图1)。 R-AN患者PYY AUC (1674.9110.0 pg/mlmin)显着高于A-AN（782.3122.0 pg/mlmin，P 0.001）和OB（1072.7222.0 pg/mlmin，P 0.001）患者。A-AN和OB患者PYY AUC具有显著差异（P 0.001；图2）。停止输注SRIF后PYY

16、基础水平及PYY AUC与临床或激素指标之间具有一些相关性。有趣的是，PYY基线水平与BMI（r=0.52，P 0.01），IRI（r=0.61，P 0.05）和IGF1（r=0.49，P 0.05；图3）呈负相关。图3 PYY基线水平（所有数据）与BMI（r=0.52，P0.01；顶图）、IRI（r=0.61，P0.05；中图）、IGF1（r=0.49；P0.05；底图）之间的相关性。讨论在这项研究中，A-AN患者血浆PYY基线浓度明显高于OB患者，A-AN与R-AN 或OB与R-AN患者PYY基线水平差异无统计学意义。我们的数据证实AN患者和神经性贪食症患者PYY浓度与对照组没有显著差异。

17、本实验检测的患者数目较少，这可能是组间差异不具有统计学意义的原因。在此背景下进行的另一项检测患者较多的研究发现，AN患者比健康女孩PYY水平较高。R-AN患者代表的可能是不合适的对照组，且会限制我们的研究。据报道AN患者体重恢复可能与PYY水平下降相关。因此，如果对更多的体重恢复期患者进行评估，会发现PYY水平变化与体重恢复之间可能有更深刻的关系。BMI变化是否会导致PYY水平反向变化，为确定这一点必须对大量R-AN患者进行研究。我们的数据与以往OB研究是一致的，其PYY水平（空腹和餐后）低于对照组。结合先前研究结果，简言之，OB患者PYY水平低可能会导致食物摄入量增加；反之，AN患者PYY水

18、平高可能食物摄入量减少。 已知SRIF对很多胃肠胰激素的分泌和功能具有显著抑制作用。这项研究（首次）表明SRIF 可抑制R-AN和OB患者PYY分泌。该发现与以前动物模型和人体研究结果一致，其中SRIF是空腹和餐后PYY分泌的有效抑制剂。目前，SRIF对抑制PYY分泌的机制尚不清楚，但可能与SRIF受体激活有关，该受体广泛表达于胃肠道黏膜。通常，SRIF14已被视为唯一一种对肠道内分泌调节具有抑制作用的SRIF生物活性分子形式，而SRIF28仅限于调节垂体激素和胰岛素分泌。然而，与这种观点相反，奇泽姆和格林伯格证明SRIF28是SRIF介导对大鼠肠细胞PYY分泌抑制作用的主要生物活性分子形式；

19、在这方面，经胃泌素释放肽（GRP）PYY释放的主要调节激素刺激后，两种SRIF分子形式均可引起剂量依赖性的PYY分泌抑制作用。然而，SRIF28比SRIF14药效强300倍。有趣的是，通过激活SSTR5，这将介导GRP刺激的PYY分泌抑制效应。这种SRIF28异构体具有比SRIF14更高的亲和力。在这项研究中，只给予SRIF14输注后发现其对R-AN和OB患者PYY分泌具有30抑制作用，提示这些效果可能涉及其他SSTR异构体（例如SSTR1-4）。最后，我们的研究还没有阐明SRIF14和SSTR5之间的相互作用，使用药理剂量的SRIF能够显著抑制A-AN与R-AN患者生长激素的分泌。我们研究的主要发现是SRIF可抑制A-AN患者PYY的分泌且停止输注SRIF后不会有任何反弹（即PYY AUC减少）。这种模式与SRIF诱导的Prader-Willi综合征患者空腹和餐后PYY水平抑制有关，该病与A-AN患者均有高生长激素血症。有人可能会猜测A-AN患者体内存在一种改变SRIF灵敏性（低敏感性）的L细胞。另外，PYY分泌未改变的A-AN患者可能与一种未知的营养不良依赖的PYY抑制或刺激因子降低或升高相关，它导致L细胞持久激活。这种公认的