第八章分子荧光光谱法320

1、第八章第八章 分子发光分析法分子发光分析法Molecular luminescence spectroscopy 概论概论 分子荧光和磷光光谱分析法分子荧光和磷光光谱分析法 化学发光分析法化学发光分析法First observed from quinine by Sir John Frederick William Herschel in 1845, blue fluorescence 450nm.Quinine SolutionBlue glass Filter 400nm8.1 概论概论George Gabriel Stokes （1819-1903）v 1858 E. Becquerel

2、 第一次发现磷光第一次发现磷光。Many materials emits fluorescencenLiquids, solids, gasOrganic compoundsnaromatic hydrocarbons(anthracene, perylene,naphthalene), fluorescein,rhodamines, aminoacids(tryptophan, tyrosine), etc.Inorganic compoundsnlanthanide ions (Eu3+, Tb3+), doped glasses (e.g. with Nd, Mn, Ce , Sn, C

3、u, Ag), crystals (ZnS, CdS, ZnSe, GaS), etc.Organometallic compoundsFluorophore Samples荧光灯管-电激发发光3-Br-Carbazole 磷光磷光荧光棒-化学反应发光水母-生物发光Photoluminescence 8.1.1 分子发光的类型分子发光的类型8.1.2 分子发光分析法的特点分子发光分析法的特点 基于化合物的荧光基于化合物的荧光/磷光测量而建立起来的分析方法称为分磷光测量而建立起来的分析方法称为分子荧光子荧光/磷光光谱法。磷光光谱法。灵敏度高灵敏度高, 比吸收光谱法低比吸收光谱法低13个数量级；个

4、数量级；试样量小试样量小, 线性范围宽；线性范围宽；选择性比吸收光谱法好，因为能产生紫外可见吸收的分子不选择性比吸收光谱法好，因为能产生紫外可见吸收的分子不一定发射荧光或磷光；一定发射荧光或磷光；应用范围不如吸收光谱法广应用范围不如吸收光谱法广; 在传感器在传感器, 生物医药和环境科学等方面的研究具有优越性。生物医药和环境科学等方面的研究具有优越性。 Ground singlet stateExcited state 121212122S+1=11212 S= 1 21 20 泡利不相容原理 S= 1 21 21M=2S+1321SJnL8.2 分子荧光和磷光光谱分析法分子荧光和磷光光谱分析法

5、8.2.1 基本原理基本原理激发后分子的多重性可能改变激发后分子的多重性可能改变( S/T两态两态). 单重态单重态: 所有电子自旋都配对的分子的电子状态。大多数有机所有电子自旋都配对的分子的电子状态。大多数有机物分子的基态是单重态。当基态一对电子中的一个被激发物分子的基态是单重态。当基态一对电子中的一个被激发到较高能级，其自旋方向没有改变，分子仍处于单重态。到较高能级，其自旋方向没有改变，分子仍处于单重态。 三重态三重态: 有两个电子的自旋不配对而平行的状态。激发三重态有两个电子的自旋不配对而平行的状态。激发三重态能量较激发单重态低。能量较激发单重态低。振动弛豫：振动弛豫：激发态分子由激发态

6、分子由同一电子能级同一电子能级中的较高振动能级转中的较高振动能级转至较低振动能级的过程，其效率较高，至较低振动能级的过程，其效率较高，10-14 10-12s内完成内完成。内转换：内转换：电子电子在在相同相同多重态的两个能级间，由高能级回到低多重态的两个能级间，由高能级回到低能级的过程。能级的过程。 系间窜越：系间窜越：不同不同多重态间进行的跃迁多重态间进行的跃迁, 激发态分子的电子自旋激发态分子的电子自旋发生倒转发生倒转: S1T1。在在10-210-6s内完成。内完成。无辐射跃迁过程：无辐射跃迁过程： 激发态分子的失活激发态分子的失活: : 激发态分子不稳定，要以辐射或无激发态分子不稳定，

7、要以辐射或无辐射跃迁的方式回到基态。辐射跃迁的方式回到基态。辐射跃迁辐射跃迁: 荧光荧光Fluorescence： 受光激发的分子从受光激发的分子从S1的的最低最低振动能级回到基态振动能级回到基态S0所所发出的辐射。寿命发出的辐射。寿命10-8 10-10s，是相同多重态之间的跃，是相同多重态之间的跃迁，跃迁几率、速度较大，速率常数迁，跃迁几率、速度较大，速率常数kf为为106109s-1。 磷光磷光Phosphorescence： 从从T1态的态的最低最低振动能级回到基态振动能级回到基态S0所发出的辐射。所发出的辐射。由于磷光的产生伴随自旋多重态的改变，辐射几率由于磷光的产生伴随自旋多重态的

8、改变，辐射几率、速度远小于荧光，寿命长（速度远小于荧光，寿命长（10-4 10s）, 能量更低！能量更低！ 除极少数例外，通常在发生辐射跃迁之前便发除极少数例外，通常在发生辐射跃迁之前便发生了非辐射跃迁而回到生了非辐射跃迁而回到S1态，不论开始处于哪个激态，不论开始处于哪个激发发S态，最后到达态，最后到达S1最低振动能级。最低振动能级。所以荧光是来所以荧光是来自自S1态的最低振动能级的辐射跃迁。态的最低振动能级的辐射跃迁。3:30:24去活化演示ee吸收振动驰豫ee3:30:24去活化演示e内转换e产生荧光eS0S2S1Ground StateElectronsS1S2Phosphoresce

9、nceT1IntersystemCrossing n1iikkF(P)F(P)1 2. 荧光荧光磷光寿命及量子产率磷光寿命及量子产率KF（P）是荧光是荧光/ /磷光发射过程的速率常数磷光发射过程的速率常数Ki 是非辐射跃迁的速率常数是非辐射跃迁的速率常数发光寿命及量子产率是两个重要的参数发光寿命及量子产率是两个重要的参数. 物质分子发射荧光物质分子发射荧光/磷光的能力用荧光磷光的能力用荧光(磷光磷光)量子产率（量子产率（）表示：表示：激发分子总数磷光的分子数发射荧光 /PF n1iiFFFkkk 使使k kF F增大而使其他失活过程（系间窜越、外转换、内增大而使其他失活过程（系间窜越、外转换、

10、内转换）的速率常数转换）的速率常数减小都可使荧光增强。减小都可使荧光增强。 大多数荧光物质的量子产率在大多数荧光物质的量子产率在0.10.11 1之间；之间；f0.1具有具有分析应用价值。分析应用价值。 例如：例如：0.05mol/L的硫酸喹啉，的硫酸喹啉， F=0.55； 荧光素荧光素, F= 荧光荧光 磷光与分子结构的关系磷光与分子结构的关系 强荧光有机化合物具备以下特征强荧光有机化合物具备以下特征: 具有大的共轭具有大的共轭键结构；键结构； 具有刚性的平面结构；具有刚性的平面结构； 具有最低的单重激发态具有最低的单重激发态S1为为*型；型； 取代基团为给电子取代基。取代基

11、团为给电子取代基。 芳香族化合物的荧光最常见且最强芳香族化合物的荧光最常见且最强; 随着环的数目和稠合程度增加，大随着环的数目和稠合程度增加，大多数未取代芳烃荧光峰红移，多数未取代芳烃荧光峰红移，。简单杂环化合物不发荧光，但具有稠环。简单杂环化合物不发荧光，但具有稠环结构的杂环化合物都发荧光。结构的杂环化合物都发荧光。 芴芴 联苯联苯 N NN NCCOO-O-OCOCOO-O-OCH2OHCH3H3C化合物化合物 荧光强度荧光强度 苯苯 10 10 C6H5COOHC6H5NO230C6H5ClC6H5BrC6H5I750NO2O荧光减弱，磷光增强。荧光减弱，磷光增强。 NCH3H3C-O3

12、SNCH3H3CSO3-CCHHCCHHOHO-4. 最低电子激发单重态的性质最低电子激发单重态的性质 （p212） 大多数芳香化合物的激发态比基态极性大，大多数芳香化合物的激发态比基态极性大，溶剂极性增溶剂极性增大，则激发态能量降低，荧光波长红移并使荧光强度增强大，则激发态能量降低，荧光波长红移并使荧光强度增强。 除溶剂极性的影响之外，若溶剂和荧光物质发生了除溶剂极性的影响之外，若溶剂和荧光物质发生了特殊特殊的相互作用的相互作用，如形成氢键或使荧光物质电离状态改变，会使，如形成氢键或使荧光物质电离状态改变，会使荧光强度、荧光强度、波长改变。形成氢键能力越大，荧光波长发生更波长改变。形成氢键能

13、力越大，荧光波长发生更大的位移，向短波移动大的位移，向短波移动。 例：奎宁在苯、乙醇、水中的荧光强度比为例：奎宁在苯、乙醇、水中的荧光强度比为1:30:10001:30:1000 另，含重原子的溶剂（碘乙烷、四溴化碳）使荧光体荧另，含重原子的溶剂（碘乙烷、四溴化碳）使荧光体荧光减弱。光减弱。 1. 1. 溶剂效应溶剂效应8 影响分子发光的环境因素影响分子发光的环境因素2. 2. 介质酸碱性的影响介质酸碱性的影响带有酸性或碱性取带有酸性或碱性取代基代基, , pHpH3. 3. 温度和黏度温度和黏度 温度影响非常大。温度降低会使荧光强度温度影响非常大。温度降低会使荧光强度增大；磷

14、光影响更大增大；磷光影响更大。4. 4. 有序介质的影响有序介质的影响另外，溶解氧的存在往往使荧光强度降低。另外，溶解氧的存在往往使荧光强度降低。 表面活性剂或环糊精属于有序介质，对分子的发表面活性剂或环糊精属于有序介质，对分子的发光特性有着显著的影响。光特性有着显著的影响。 荧光磷光的猝灭 Quenching of fluorescence/phosphorescence 发光分子与溶剂或溶质分子之间发生的使发光强发光分子与溶剂或溶质分子之间发生的使发光强度下降的物理或化学作用过程度下降的物理或化学作用过程( (狭义狭义) )。 使使荧光物质荧光强度下降荧光物质荧光强度下降/

15、/荧光量子产率下降的荧光量子产率下降的作用作用; ;荧光物质的荧光强度与浓度偏离线性关系荧光物质的荧光强度与浓度偏离线性关系( (广广义义).). 实质实质-与发光过程相互竞争从而缩短发光分子激与发光过程相互竞争从而缩短发光分子激发态寿命的过程发态寿命的过程. .猝灭剂猝灭剂-使发光分子发光强度下降的物质。使发光分子发光强度下降的物质。 卤素离子、重金属离子、氧分子、硝基化合物、卤素离子、重金属离子、氧分子、硝基化合物、重氮化合物、羰基化合物等吸电子极性物质。重氮化合物、羰基化合物等吸电子极性物质。 动态猝灭：Collisional quenching 猝灭剂与发光物质的猝灭剂与发光物质的激发

16、态激发态分子之间的相分子之间的相互作用。属碰撞作用，有能量转移和电荷转移。互作用。属碰撞作用，有能量转移和电荷转移。 静态猝灭：Static quenching 猝灭剂与发光物质的猝灭剂与发光物质的基态基态分子之间的相互分子之间的相互作用。形成不发光的络合物。作用。形成不发光的络合物。猝灭类型：荧光猝灭的主要原因是碰撞猝灭。荧光猝灭的主要原因是碰撞猝灭。* 转入三重态猝灭转入三重态猝灭 分子由于系间跨越跃迁，由单重态跃迁到三重态。转入分子由于系间跨越跃迁，由单重态跃迁到三重态。转入三重态的分子在常温下不易发光。三重态的分子在常温下不易发光。* 发生电子转移反应猝灭发生电子转移反应猝灭 某些猝灭

17、剂分子与荧光物质分子相互作用时，发生了电某些猝灭剂分子与荧光物质分子相互作用时，发生了电子转移反应，引起荧光猝灭。子转移反应，引起荧光猝灭。* 荧光物质自猝灭荧光物质自猝灭 在浓度较高的荧光物质溶液中，单重激发态的分子在发在浓度较高的荧光物质溶液中，单重激发态的分子在发荧光之前和未激发的荧光物质分子碰撞而引起的自猝灭。有荧光之前和未激发的荧光物质分子碰撞而引起的自猝灭。有些荧光物质在浓度较高时会形成二聚体或多聚体，使它们的些荧光物质在浓度较高时会形成二聚体或多聚体，使它们的吸收光谱发生变化，也引起溶液荧光强度的降低或消失。吸收光谱发生变化，也引起溶液荧光强度的降低或消失。 荧光猝灭法是利用随着

18、猝灭剂的加入，荧光体荧光猝灭法是利用随着猝灭剂的加入，荧光体荧光强度的减少与猝灭剂的浓度呈线性关系而用于荧光强度的减少与猝灭剂的浓度呈线性关系而用于测定猝灭剂的含量。测定猝灭剂的含量。猝灭现象的应用:0100000200000300000400000 380 400 420 440 460 480 500 Wavelength (nm)Emission of Anthracene 357 nm + 5 ul Ascaridole(cps)Dynamic Quenching Of Anthracene FluorescenceQuencher Is AscaridoleConcentration

19、 From 0M to 0.36M 一般说来，荧光猝灭法比直接荧光法更一般说来，荧光猝灭法比直接荧光法更灵敏，并具有更高的选择性；灵敏，并具有更高的选择性； 猝灭效应还可用以揭示猝灭剂的扩散速猝灭效应还可用以揭示猝灭剂的扩散速率，或在生物化学研究中用以推测小分子与率，或在生物化学研究中用以推测小分子与蛋白质蛋白质/DNA的结合位点、构象变化等。的结合位点、构象变化等。猝灭常数公式猝灭常数公式 动态猝灭方程动态猝灭方程100QKQkkkQkFFSVqifqF0和和F分别为不存在猝灭剂和猝灭剂浓度为分别为不存在猝灭剂和猝灭剂浓度为Q时的荧光强度。时的荧光强度。 0为没有猝灭剂存在时荧光分子的平均寿

20、命（为没有猝灭剂存在时荧光分子的平均寿命（s）.KSV为为Stern-Volmer猝灭常数（猝灭常数（mol L-1）.kq 为双分子猝灭速率常数（为双分子猝灭速率常数（L mol-1 s-1）.100QKQkSVq Stern-Volmer方程表明，方程表明， F0/F（或（或 0/ ）与猝灭剂的浓度与猝灭剂的浓度Q呈线性关系。呈线性关系。方程的方程的斜率斜率KSV即即猝灭常数。作为有效的猝灭常数。作为有效的猝灭剂猝灭剂, ,KSV约为约为1001000Lmol-1.w 静态猝灭方程静态猝灭方程10QKFFK为络合物的形成常数，且络合比为为络合物的形成常数，且络合比为1：1时才符合此式。时才

21、符合此式。区分方法：区分方法：* * 改变温度改变温度 温度升高，猝灭常数增大为动态猝灭，相反为静温度升高，猝灭常数增大为动态猝灭，相反为静态猝灭。态猝灭。* * 考察吸收光谱的变化考察吸收光谱的变化 吸收光谱变化为静态猝灭；不变化为动态猝灭。吸收光谱变化为静态猝灭；不变化为动态猝灭。* * 测量荧光寿命测量荧光寿命 猝灭剂加入荧光寿命不变为静态猝灭，改变为动猝灭剂加入荧光寿命不变为静态猝灭，改变为动态猝灭。态猝灭。F0/F and 0/QSlope=kq0=KSVF0/F QSlope=K0/1.01.0T1T2T1T2动态猝灭动态猝灭静态猝灭静态猝灭T1 0.05），荧光强度同浓度的线性关

22、系将向浓度轴偏离。3:30:27光源单色器1样品池单色器2检测器放大放大与与记录记录垂直方向8.2.2 荧光荧光/ /磷光分析仪器磷光分析仪器 荧光分光光度计可用于测绘激发光谱和荧光光谱荧光分光光度计可用于测绘激发光谱和荧光光谱, 并用于定并用于定量分析，量分析， 荧光分光光度计荧光分光光度计(spectrofluorometer) 荧光仪与分光光度计的主要差别：荧光仪与分光光度计的主要差别： 垂直测量方式，消除透射光影响垂直测量方式，消除透射光影响. 高灵敏度原因高灵敏度原因. 两个单色器（激发和发射）常用光栅两个单色器（激发和发射）常用光栅.3:30:27PerkinElme

23、r 第一单色器选择激发光波长第一单色器选择激发光波长,波长落于紫外区，称为激发单色波长落于紫外区，称为激发单色器。器。 第二单色器（荧光单色器）与激发光入射方向垂直，用来选择第二单色器（荧光单色器）与激发光入射方向垂直，用来选择荧光波长，把激发光所发射的容器表面的散射光、瑞利散射光、荧光波长，把激发光所发射的容器表面的散射光、瑞利散射光、拉曼散射光以及溶液中杂质荧光滤去，让荧光物质发出的荧光拉曼散射光以及溶液中杂质荧光滤去，让荧光物质发出的荧光通过照射到检测器上。通过照射到检测器上。可提高方法的选择性和准确度。可提高方法的选择性和准确度。 紫外紫外- -可见分光光度可见分光光度计吸收池计吸收池

24、I0ItI0ItIF,p3:30:2 磷光分析仪器磷光镜磷光镜: :一种机械切光装置一种机械切光装置. .转筒式和转盘式。转筒式和转盘式。3:30:28 磷光仪中的磷光仪中的2种机械切光器种机械切光器8.2.3 荧光的常规测定方法荧光的常规测定方法 直接测量法直接测量法 间接测量法间接测量法 荧光衍生法荧光衍生法 荧光猝灭法荧光猝灭法 敏化荧光法敏化荧光法 多组分混合物的荧光分析多组分混合物的荧光分析 应用 无机物：已有无机物：已有70种元素可分析。种元素可分析。 鳌合物法：鳌合物法：Be Al B Ga Se Mg 与荧光物质缔合猝灭法：与荧光物质缔合猝灭法：F S Fe A

25、g 催化荧光法：催化荧光法：Cu Be Fe Os H2O2 有机物：有机物： 简单有机物与其他有机试剂作用后产生荧光简单有机物与其他有机试剂作用后产生荧光 芳族通常可直接测定芳族通常可直接测定3:30:288.2.4 磷光的测定方法磷光的测定方法 低温磷光分析低温磷光分析 由于激发三重态寿命长，激发态分子发生非辐射去活化过由于激发三重态寿命长，激发态分子发生非辐射去活化过程、与周围溶剂分子间发生碰撞和能量转移过程，或发生某程、与周围溶剂分子间发生碰撞和能量转移过程，或发生某些光化学反应的几率增大，这些都将使磷光强度减弱，甚至些光化学反应的几率增大，这些都将使磷光强度减弱，甚至完全消失。为减少

26、这些去活化过程的影响，通常在低温测量完全消失。为减少这些去活化过程的影响，通常在低温测量磷光。磷光。 低温磷光分析中，低温磷光分析中，液氮液氮是最常用的冷却剂。是最常用的冷却剂。因此要求所使用的溶剂，在液氮温度（因此要求所使用的溶剂，在液氮温度（77K77K）下）下具有足够的具有足够的粘度粘度并能并能形成透明的刚性玻璃体形成透明的刚性玻璃体，对分析试样具有对分析试样具有良好的溶解特性良好的溶解特性。溶剂应在所。溶剂应在所研究的光谱区域内没有很强的吸收和发射。研究的光谱区域内没有很强的吸收和发射。 试样的刚性可减少荧光的碰撞猝灭，试样的刚性可减少荧光的碰撞猝灭，磷光磷光强。强。KcIp 室温磷光

27、分析室温磷光分析3:30:28 由于低温磷光需要低温实验装置，溶剂选择的由于低温磷光需要低温实验装置，溶剂选择的限制及操作繁琐等因素，从而发展了多种室温磷光限制及操作繁琐等因素，从而发展了多种室温磷光法（法（RTPRTP）。）。 但是室温下，但是室温下，T T1 1态分子与溶剂碰撞失活，很难态分子与溶剂碰撞失活，很难产生磷光。除了分子的结构要求外，实验条件非常产生磷光。除了分子的结构要求外，实验条件非常苛刻苛刻, ,尤其是除氧。尤其是除氧。 室温下测量室温下测量吸附于固体基质上吸附于固体基质上的有机化合物的的有机化合物的磷光。所用的基质种类较多，有磷光。所用的基质种类较多，有纤维素载体纤维素载

28、体（如滤（如滤纸、玻璃纤维）、纸、玻璃纤维）、无机载体无机载体（如硅胶、氧化铝）以（如硅胶、氧化铝）以及及有机载体有机载体（如乙酸钠、聚合物、纤维素膜）等。（如乙酸钠、聚合物、纤维素膜）等。 理想的载体能将分析物质牢固地束缚在表面或基质中以理想的载体能将分析物质牢固地束缚在表面或基质中以增加其刚性，并能减小三重态的碰撞猝灭等非辐射去活化过增加其刚性，并能减小三重态的碰撞猝灭等非辐射去活化过程，而本身又不产生磷光背景。程，而本身又不产生磷光背景。1. 固体基质表面室温磷光（固体基质表面室温磷光（SS-RTP) 当溶液中表面活性剂的浓度达到临界胶束浓度后，便当溶液中表面活性剂的浓度达到临界胶束浓度

29、后，便相互聚集形成胶束。由于这种胶束的多相性，改变了磷光相互聚集形成胶束。由于这种胶束的多相性，改变了磷光团的微环境和定向约束力，从而强烈影响了磷光团的物理团的微环境和定向约束力，从而强烈影响了磷光团的物理性质，减小了非辐射去活化过程的趋势，明显增加了三重性质，减小了非辐射去活化过程的趋势，明显增加了三重态的稳定性，从而实现在溶液中测量室温磷光。利用胶束态的稳定性，从而实现在溶液中测量室温磷光。利用胶束稳定因素、结合重原子效应、并对溶液除氧，是稳定因素、结合重原子效应、并对溶液除氧，是MS-RTPMS-RTP的的三个要素。三个要素。2. 胶束增稳室温磷光法（MS-RTP） 分析物质被激发后经过

30、系间跨越衰减至最低激发分析物质被激发后经过系间跨越衰减至最低激发三重态，当有某种合适的三重态，当有某种合适的能量受体能量受体存在时，发生了由存在时，发生了由分析物质到受体的三重态能量转移，最后通过分析物质到受体的三重态能量转移，最后通过测量受测量受体体所发射的磷光强度而间接测定该分析物质。所发射的磷光强度而间接测定该分析物质。 在这种方法中，分析物质本身不发磷光，而是引在这种方法中，分析物质本身不发磷光，而是引发受体发磷光。发受体发磷光。3. 敏化室温磷光分析（S-RTP） 含重原子的溶剂，由于重原子的高核电含重原子的溶剂，由于重原子的高核电荷增大了荷增大了S S0 0T T1 1吸收跃迁和吸

31、收跃迁和S S1 1T T1 1系间跨越跃系间跨越跃迁的几率，有利于磷光的发生和增大磷光的量迁的几率，有利于磷光的发生和增大磷光的量子产率。这种作用称为子产率。这种作用称为外部重原子效应外部重原子效应。 分子中引入重原子取代基，会发生分子中引入重原子取代基，会发生内部内部重原子效应重原子效应，导致磷光量子效率的提高。，导致磷光量子效率的提高。 重原子效应重原子效应 heavy-atom effect引入重原子引入重原子,荧光增强吗荧光增强吗? 荧光对微环境敏感，用于表征研究体系的理化性质，并可用于物质的定性或定量分定性或定量分析析。定性分析：定性分析：依据不同结构不同结构的物质所发射的荧发射的

32、荧光波长不同光波长不同；定量分析定量分析：同种物质的稀溶液，其产生的荧荧光强度与浓度呈线性关系。光强度与浓度呈线性关系。8.2.5 荧光荧光/磷光分析法的应用磷光分析法的应用灵敏度高、选择性好，可用于痕量分析，但是能发生荧光灵敏度高、选择性好，可用于痕量分析，但是能发生荧光的化学体系不多。的化学体系不多。在有机化合物中应用较广。芳香化合物多能发生荧光，在有机化合物中应用较广。芳香化合物多能发生荧光，可可直接测定直接测定。脂肪族化合物往往与荧光试剂作用后才可产生。脂肪族化合物往往与荧光试剂作用后才可产生荧光。荧光。无机物无机物已有已有70种元素可分析。种元素可分析。通过与荧光试剂作用生通过与荧光

33、试剂作用生成荧光螯合物而进行荧光分析，荧光试剂具有两个（或以成荧光螯合物而进行荧光分析，荧光试剂具有两个（或以上）与上）与M MZ+Z+形成螯合物的电子给体官能团结构。非过渡金形成螯合物的电子给体官能团结构。非过渡金属离子的荧光螯合物较多。属离子的荧光螯合物较多。 荧光法的应用荧光法的应用KcIp低温法低温法: :多环芳烃多环芳烃, VK, VB6, VE固表法固表法: : 多环芳烃多环芳烃, 杂环化合物杂环化合物3:30:28 与荧光法互补，主要用于测定有机化合物，如与荧光法互补，主要用于测定有机化合物，如石油产品、多环芳烃、农药、药物、临床、环境分石油产品、多环芳烃、农药、药物、临床、环境分析等方面。析等方面。Stokes位移大，干扰小。位移大，干扰小。磷光法的应用磷光法的应用8.3 化学发光化学发光Chemiluminescence (CL) 生物体化学发光现象的研究起源于古代，但是生物体化学发光现象的研究起源于古代，但是直到十九世纪末，这种现象与简单的有机反应相联直到十九世纪末，这种现象与简单的有机反应相联系才得到解释。许多有机反应可产生系才得到解释。许多有机反应可产生CL。1877年年 洛粉碱洛粉碱CL1905年年 洛粉碱类似物洛粉碱类似物1928年年 鲁米诺鲁米诺(luminol)1935年年 光泽精光泽精(lucigenin) 8.