第03章药物的鉴别实验

1、第三章第三章 药物的鉴别实验药物的鉴别实验 药物的鉴别实验是根据药物的分子结构、理化性质、药物的鉴别实验是根据药物的分子结构、理化性质、采用化学、物理化学或生物学方法来判断药物的真采用化学、物理化学或生物学方法来判断药物的真伪，是药品质量检验工作中的首项任务。伪，是药品质量检验工作中的首项任务。 药典所收载的药物鉴别实验方法，均为用来证实贮药典所收载的药物鉴别实验方法，均为用来证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物，藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物，而不是对未知物进行定性分析。而不是对未知物进行定性分析。 这些方法虽有一定的专属性，但不足以确证其结构，这些方法虽有一定的专属

2、性，但不足以确证其结构，因此不能赖以鉴别未知物。因此不能赖以鉴别未知物。第一节第一节 鉴别实验的项目鉴别实验的项目 第二节第二节 鉴别方法鉴别方法第三节第三节 鉴别实验的条件鉴别实验的条件内容内容第一节第一节 鉴别实验的项目鉴别实验的项目 一、药物的性状一、药物的性状 药物的性状（药物的性状（descriptiondescription）反应药物的特有）反应药物的特有物理性质，包括：外观、溶解度和物理常数等。物理性质，包括：外观、溶解度和物理常数等。外观外观指药品的外表感观和色泽，包括：药品的指药品的外表感观和色泽，包括：药品的集聚状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。集聚状态、晶型、色泽以及臭、

3、味等性质。例：例：维生素维生素B B1 1：“本品为白色结晶或结晶本品为白色结晶或结晶性粉末；有微弱的特臭，味苦；干燥品在空气性粉末；有微弱的特臭，味苦；干燥品在空气中迅即吸收约中迅即吸收约4%4%的水分的水分”溶解度溶解度溶解度作为药物的一种物理性质，在一定程溶解度作为药物的一种物理性质，在一定程度上反映药品的纯度。度上反映药品的纯度。中国药典中国药典采用采用“极易溶解、易溶解、略极易溶解、易溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶”来来描述药品的溶解性能。描述药品的溶解性能。方法：称取研成细粉的供试品或量取液体供方法：称取研成细粉的供试品或量取液体供试品

4、，置于试品，置于2525C C2 2C C一定容量的溶剂中，每一定容量的溶剂中，每隔隔5min5min强力振摇强力振摇30s30s；观察；观察30min30min内的溶解情内的溶解情况，如无目视可见的溶质颗粒或液滴，则为况，如无目视可见的溶质颗粒或液滴，则为完全溶解。完全溶解。物理常数物理常数物理常数是评价药物质量的主要指标之一。其物理常数是评价药物质量的主要指标之一。其测定结果对药品具有鉴别意义，也反映该药品测定结果对药品具有鉴别意义，也反映该药品的纯度。的纯度。中国药典中国药典收载的物理常数：相对密度、熔收载的物理常数：相对密度、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、吸点、凝点、比旋度、

5、折光率、黏度、酸值、吸收系数等。收系数等。熔点熔点l固体熔化成液体的温度、熔融同时分解的固体熔化成液体的温度、熔融同时分解的温度或在熔化时自初熔至全熔的一段温度。温度或在熔化时自初熔至全熔的一段温度。l要求报告要求报告“初熔初熔”（供试品在毛细管内开始（供试品在毛细管内开始局部液化出现明显液滴时的温度）和局部液化出现明显液滴时的温度）和“全熔全熔”（供试品全部液化时的温度）。（供试品全部液化时的温度）。l例例1 1雌二醇：雌二醇：“本品的熔点为本品的熔点为175175180180C”C”。l例例2 2醋酸地塞米松：醋酸地塞米松：“本品的熔点为本品的熔点为223223233233C C，熔融时同

6、时分解熔融时同时分解”。比旋度比旋度l在一定波长与温度下，偏振光透过长在一定波长与温度下，偏振光透过长1dm1dm且每且每1ml1ml中含有旋光性物质中含有旋光性物质1g1g溶液时测得溶液时测得的旋光度称为比旋光度。的旋光度称为比旋光度。l比旋光度是反映手性药物特性及其纯度的比旋光度是反映手性药物特性及其纯度的主要指标，可用以区别药品、检查纯度或主要指标，可用以区别药品、检查纯度或测定制剂的含量。测定制剂的含量。l例：维生素例：维生素C C的比旋度为的比旋度为+20.5+20.5+21.5+21.5。吸收系数吸收系数l在给定的波长、溶剂和温度下，吸光物质在给定的波长、溶剂和温度下，吸光物质在单

7、位浓度、单位液层厚度时的吸收度称在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。为吸收系数。l中国药典中国药典收载的吸收系数为百分吸收收载的吸收系数为百分吸收系 数 ： 在 一 定 波 长 下 ， 溶 液 浓 度 为系 数 ： 在 一 定 波 长 下 ， 溶 液 浓 度 为1%(W/V)1%(W/V)，厚度为，厚度为1cm1cm时的吸光度，用时的吸光度，用 表表示。示。l吸收系数不仅可用于考察原料药的质量，吸收系数不仅可用于考察原料药的质量，同时可作为该药物制剂应用紫外分光光度同时可作为该药物制剂应用紫外分光光度法测定含量时的依据。法测定含量时的依据。1%1cmE 无机药物的鉴别：根据其组成的

8、阴离子和阳无机药物的鉴别：根据其组成的阴离子和阳离子的特殊反应。离子的特殊反应。 有机药物的鉴别：采用典型官能团反应。有机药物的鉴别：采用典型官能团反应。 鉴别实验只能证实是某一类药物，不能证实鉴别实验只能证实是某一类药物，不能证实是哪一种药物。是哪一种药物。 鉴别实验仅供确认药物质量标准中单一的化鉴别实验仅供确认药物质量标准中单一的化学药物，不适用于混合物或有干扰物质存在学药物，不适用于混合物或有干扰物质存在的情况。的情况。二、一般鉴别实验二、一般鉴别实验 有机氟化物的鉴别有机氟化物的鉴别 供试品供试品约约7mg7mg氧瓶燃烧法进氧瓶燃烧法进行有机破坏行有机破坏吸收液：吸收液：20mlH20

9、mlH2 2O-O-6.5mlNaOH6.5mlNaOH(0.01mol/L)(0.01mol/L)燃烧完全后，燃烧完全后，充分振摇，取充分振摇，取吸收液吸收液2ml2ml加茜素氟蓝加茜素氟蓝试液试液0.5ml0.5ml再加再加12%12%醋酸醋酸钠的稀醋酸钠的稀醋酸溶液溶液0.2ml0.2ml用水稀释至用水稀释至4ml4ml，加硝，加硝酸亚铈试液酸亚铈试液0.5ml0.5ml溶液显蓝紫溶液显蓝紫色色, ,并做空白并做空白对照试验对照试验方法方法原理原理有机氟化物经氧瓶燃烧法破坏，被碱性溶液吸有机氟化物经氧瓶燃烧法破坏，被碱性溶液吸收成为无机氟化物，与茜素氟蓝、硝酸亚铈在收成为无机氟化物，与茜

10、素氟蓝、硝酸亚铈在pH4.3pH4.3溶液中形成蓝紫色络合物。溶液中形成蓝紫色络合物。茜素氟蓝茜素氟蓝OOOHOHCH2NCH2COOHCH2COOHF- + Ce3+pH4.3蓝紫色蓝紫色OOOHOCH2NCH2COOHCH2COOHCeFOH有机酸的鉴别有机酸的鉴别 水杨酸盐水杨酸盐鉴别方法一：鉴别方法一：取供试品的稀溶液，加三氯化铁取供试品的稀溶液，加三氯化铁1 1滴，溶液显紫滴，溶液显紫色。色。原理：原理：本品在中性或弱酸性下，与本品在中性或弱酸性下，与FeClFeCl3 3生成配位化合生成配位化合物，中性时呈红色，弱酸性时呈紫色。物，中性时呈红色，弱酸性时呈紫色。COOHOH水杨酸水

11、杨酸6+ 4FeCl3COO-O-2Fe Fe + 12HCl鉴别方法二：鉴别方法二：取供试品的溶液，加稀盐酸，即析出白色水杨取供试品的溶液，加稀盐酸，即析出白色水杨酸沉淀，沉淀在醋酸铵试液中溶解。酸沉淀，沉淀在醋酸铵试液中溶解。酒石酸盐酒石酸盐方法：方法：取供试品的中性溶液，置洁净的试管中，加氨取供试品的中性溶液，置洁净的试管中，加氨制硝酸银试液数滴，置水浴中加热，银游离并制硝酸银试液数滴，置水浴中加热，银游离并附在试管内壁成银镜。附在试管内壁成银镜。原理：原理：COOHCHHOCOOHCHHO+Ag(NH+Ag(NH3 3) )2 2OHOHCOONH4CHOCOONH4CHO+ 2NH+

12、 2NH3 3 + 2H + 2H2 2O O2Ag +2Ag +供试品供试品约约50mg50mg加稀盐酸加稀盐酸1ml1ml，缓缓，缓缓煮沸使溶解，放冷煮沸使溶解，放冷加加0.1mol/L0.1mol/L亚硝亚硝酸钠溶液数滴酸钠溶液数滴加碱性加碱性-萘萘酚试液数滴酚试液数滴生成橙黄色到猩红色生成橙黄色到猩红色沉淀（视供试品不同）沉淀（视供试品不同）芳香第一胺类芳香第一胺类 方法：方法：原理：原理：+ NaNO2 + 2HClNH2R+ NaCl + 2H2OR-2ClN+ NaCl + H2ORN=NOH+ NaOHR-2ClNOH+方法：方法：供试品约供试品约10mg10mg加发烟硝酸加发

13、烟硝酸5 5滴滴置水浴上蒸干，置水浴上蒸干，得到黄色残渣得到黄色残渣加乙醇加乙醇2 23 3滴润湿滴润湿加固体加固体KOHKOH一小一小粒，显深紫色粒，显深紫色托烷生物碱类托烷生物碱类原理：原理：OROHO水解水解HOOCHO3HNO3HOOCHONO2O2NNO2托烷类托烷类三硝基衍生物三硝基衍生物KOH（C2H5OH）HOOCHONO2O2NNOHO莨菪酸莨菪酸醌型产物醌型产物KOHHOOCHONO2O2NNOHOHOOCHONO2O2NNOKO深紫色深紫色钠盐、钾盐、钙盐的焰色反应钠盐、钾盐、钙盐的焰色反应鉴别方法：鉴别方法：取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火取铂丝，用盐酸湿润后

14、，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显个离子的特征颜色。焰中燃烧，火焰即显个离子的特征颜色。钠离子钠离子: :鲜黄色；钾离子鲜黄色；钾离子: :紫色；钙离子紫色；钙离子: :砖红色。砖红色。原理：原理：钠的火焰光谱主要谱线：钠的火焰光谱主要谱线：589.0nm589.0nm、589.6nm589.6nm；钾的火焰光谱主要谱线：钾的火焰光谱主要谱线：766.49nm766.49nm、769.90nm769.90nm；钙的火焰光谱主要谱线：钙的火焰光谱主要谱线：622nm622nm、554nm554nm、442.67nm442.67nm与与602nm602nm。无机金属盐无机金属盐铵盐铵盐鉴别方

15、法：鉴别方法：取供试品，加过量取供试品，加过量NaOHNaOH试液后，加热，即分试液后，加热，即分解，发生氨臭；遇湿润的红色石蕊试纸，能解，发生氨臭；遇湿润的红色石蕊试纸，能使之变蓝色，并能使硝酸亚汞试液湿润的滤使之变蓝色，并能使硝酸亚汞试液湿润的滤纸显黑色。纸显黑色。原理：原理：NH4+ + OH-NH3 + H2O4NH3 + 2Hg2(NO3)2 + H2OOHgHgNH2NO3 + 2Hg + 3NH4NO3氯化物氯化物鉴别一：鉴别一：取供试品溶液，加稀硝酸使成酸性，滴加取供试品溶液，加稀硝酸使成酸性，滴加AgNOAgNO3 3试液，生成白色凝乳状沉淀；沉淀加氨试液，生成白色凝乳状沉淀

16、；沉淀加氨试液即溶解，再加稀硝酸，沉淀复生成。试液即溶解，再加稀硝酸，沉淀复生成。鉴别二：鉴别二：取供试品少量置试管中，加等量取供试品少量置试管中，加等量MnOMnO2 2，混，混匀，加匀，加H H2 2SOSO4 4湿润，缓缓加热，即发生氯气，湿润，缓缓加热，即发生氯气，能使湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。能使湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。无机酸根无机酸根硫酸盐硫酸盐鉴别一：鉴别一：取供试品溶液，滴加取供试品溶液，滴加BaClBaCl2 2试液，即生成白色试液，即生成白色沉淀；沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。沉淀；沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。鉴别二：鉴别二：取供试品溶液，滴加醋酸铅试液，即生成白取供试

17、品溶液，滴加醋酸铅试液，即生成白色沉淀；沉淀在醋酸铵或色沉淀；沉淀在醋酸铵或NaOHNaOH试液中溶解。试液中溶解。鉴别三：鉴别三：取供试品溶液，加盐酸，不生成白色沉淀取供试品溶液，加盐酸，不生成白色沉淀（与硫代硫酸钠区别）。（与硫代硫酸钠区别）。硝酸盐硝酸盐鉴别一：鉴别一：取供试品溶液置试管中，加等量的硫酸，小取供试品溶液置试管中，加等量的硫酸，小心混合，冷后，沿管壁加硫酸亚铁试液，使心混合，冷后，沿管壁加硫酸亚铁试液，使成两液层，接界面显棕色。成两液层，接界面显棕色。鉴别二：鉴别二：取供试品溶液，加硫酸与铜丝加热，即发生取供试品溶液，加硫酸与铜丝加热，即发生红棕色的蒸气（红棕色的蒸气（NO

18、NO2 2）。）。鉴别三：鉴别三：取供试品溶液，滴加取供试品溶液，滴加KMnOKMnO4 4试液，紫色不应褪试液，紫色不应褪去（与亚硝酸钠区别）。去（与亚硝酸钠区别）。三、专属鉴别实验三、专属鉴别实验 l一般鉴别实验是以某些类别药物的共同化学结构一般鉴别实验是以某些类别药物的共同化学结构为依据，根据其相同的物理化学性质进行药物真为依据，根据其相同的物理化学性质进行药物真伪的鉴别，以区别伪的鉴别，以区别不同类不同类的药物的药物l药物的专属实验：在一般鉴别实验的基础上，根药物的专属实验：在一般鉴别实验的基础上，根据各种药物化学结构的差异及其所引起的物理化据各种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学

19、特性不同，来鉴别药物，以区别同类药物或具学特性不同，来鉴别药物，以区别同类药物或具有相同化学结构部分的各个药物单体，达到最终有相同化学结构部分的各个药物单体，达到最终确证药物真伪的目的。确证药物真伪的目的。以后各章详解以后各章详解第二节第二节 鉴别方法鉴别方法 l药物的鉴别方法的要求：专属性强 再现性好 灵敏度高、操作简便 快速常用鉴别方法：化学法 光谱法 色谱法 生物学法一、化学鉴别法一、化学鉴别法l要求：要求：反应迅速、现象明显；反应是否完全则不重要。反应迅速、现象明显；反应是否完全则不重要。l化学鉴别法：化学鉴别法：呈色反应呈色反应 沉淀生成反应沉淀生成反应 荧光反应荧光反应气体生成反应

20、气体生成反应 使试剂褪色反应使试剂褪色反应测定生成物的熔点（繁琐、费时、应用少）测定生成物的熔点（繁琐、费时、应用少）二、光谱鉴别法二、光谱鉴别法l紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法原理：原理：多数有机药物分子含有能吸收紫外可见光的基团而多数有机药物分子含有能吸收紫外可见光的基团而显示特征吸收光谱，可作为鉴别的依据。显示特征吸收光谱，可作为鉴别的依据。常用方法：常用方法：l 测定最大吸收波长或同时测定最小吸收波长；测定最大吸收波长或同时测定最小吸收波长；l 规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸光度；光度；l 规定吸收波长和吸收系数法；规定吸收波长和吸收系数

21、法；l 规定吸收波长和吸光度比值法；规定吸收波长和吸光度比值法；l 经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。性。示例：地蒽酚的鉴别实验示例：地蒽酚的鉴别实验取含量测定下的供试品溶液，于取含量测定下的供试品溶液，于240240400nm400nm范围范围内测定吸光度，在内测定吸光度，在257nm257nm、289nm289nm与与356nm356nm处有最大处有最大吸收。在吸收。在257nm257nm与与289nm289nm处的吸光度比值应为处的吸光度比值应为1.061.061.101.10；在；在356nm356nm与与289nm289nm处的吸光度

22、比值应处的吸光度比值应为为0.900.900.940.94。l红外光谱鉴别法红外光谱鉴别法红外光谱法专属性很强，应用较广（固体、液红外光谱法专属性很强，应用较广（固体、液体、气体样品），主用于组分单一、结构明确体、气体样品），主用于组分单一、结构明确的原料药，特别适合于用其他方法不易区分的的原料药，特别适合于用其他方法不易区分的同类药物。同类药物。在用红外光谱进行鉴别时，在用红外光谱进行鉴别时，中国药典中国药典采用采用标准谱图对照法。标准谱图对照法。试样制备方法：试样制备方法：压片法压片法 糊法糊法 膜法膜法 溶液法溶液法注意问题：注意问题：l 固体药品的测定受晶型的影响固体药品的测定受晶型的

23、影响l 采用压片法时，盐酸盐样品需使用采用压片法时，盐酸盐样品需使用KClKCl基质。基质。l 傅立叶变化红外光谱仪系单光束型仪器，测定傅立叶变化红外光谱仪系单光束型仪器，测定时需采用干燥的氮气吹扫来消除二氧化碳和水时需采用干燥的氮气吹扫来消除二氧化碳和水汽的干扰。汽的干扰。l 本法对多组分药物或存在多晶现象的药物不适本法对多组分药物或存在多晶现象的药物不适用。用。 制剂的鉴别一般需采取提取分离后压片测试。制剂的鉴别一般需采取提取分离后压片测试。l 仪器间的分辨率的差异及操作条件的不同可能仪器间的分辨率的差异及操作条件的不同可能影响药品光谱图，应将测定药品用的仪器上获影响药品光谱图，应将测定药

24、品用的仪器上获得的聚苯乙烯薄膜光谱图与药典收录的得的聚苯乙烯薄膜光谱图与药典收录的聚苯乙聚苯乙烯薄膜光谱图加以烯薄膜光谱图加以比较。比较。l 中国药典中国药典红外光谱图的波数范围：红外光谱图的波数范围：40004000400cm400cm-1-1l近红外光谱鉴别法近红外光谱鉴别法通过测定被测物质在近红外谱区通过测定被测物质在近红外谱区7507502500nm2500nm的的特征光谱并利用适宜的化学计量学方法提取相特征光谱并利用适宜的化学计量学方法提取相关信息后，对被测物质进行定性、定量。关信息后，对被测物质进行定性、定量。近红外光谱特点：快速、准确、不破坏样品、近红外光谱特点：快速、准确、不破

25、坏样品、既可离线检测，也可在线检测。既可离线检测，也可在线检测。近红外光谱鉴别法步骤近红外光谱鉴别法步骤：（1 1）建立参考谱库）建立参考谱库（2 2）数据预处理）数据预处理（3 3）数据评估）数据评估（4 4）数据库的验证（专属性和耐用性）数据库的验证（专属性和耐用性）l原子吸收法原子吸收法利用原子蒸汽可以吸收该元素作为空心阴极灯利用原子蒸汽可以吸收该元素作为空心阴极灯发出的特征谱线的特征，根据供试品溶液的最发出的特征谱线的特征，根据供试品溶液的最大吸收和特征谱线的强度减弱程度进行定性、大吸收和特征谱线的强度减弱程度进行定性、定量分析。定量分析。 核磁共振法核磁共振法通过测定供试品指定基团上

26、的质子峰的化学位通过测定供试品指定基团上的质子峰的化学位移移和耦合常数进行药物的鉴别和耦合常数进行药物的鉴别。三、三、X射线粉末衍射法射线粉末衍射法l化合物的晶体都有其特定的化合物的晶体都有其特定的X X射线衍射图谱。衍射射线衍射图谱。衍射极大点（或线）间的距离及其相对强度可用以进行极大点（或线）间的距离及其相对强度可用以进行结晶物质的定性或定量分析。结晶物质的定性或定量分析。d dhklhkl：面间距；：面间距；：掠射角；：掠射角；：X X射线波长射线波长l结晶物质的鉴别可通过比较供试品与已知物质的结晶物质的鉴别可通过比较供试品与已知物质的X X射线粉末衍射图谱来完成。射线粉末衍射图谱来完成

27、。l各衍射线的衍射角（各衍射线的衍射角（2 2）、相对强度、和面间距）、相对强度、和面间距是进行鉴别的依据。是进行鉴别的依据。) 3, 2, 1,(n nsin2hkld（布拉格方程）（布拉格方程） -form-form谷氨酸两种晶型的谷氨酸两种晶型的X X射线衍射光谱射线衍射光谱四、色谱鉴别法四、色谱鉴别法l利用不同物质在不同的色谱条件下，产生各自的特利用不同物质在不同的色谱条件下，产生各自的特征色谱行为（比移值征色谱行为（比移值R Rf f值或保留时间）进行鉴别。值或保留时间）进行鉴别。l采用与对照品在相同的条件下进行色谱分离，并进采用与对照品在相同的条件下进行色谱分离，并进行比较，根据两

28、者的保留行为和检测结果是否一致行比较，根据两者的保留行为和检测结果是否一致来验证药品的真伪。来验证药品的真伪。l 薄层色谱鉴别法薄层色谱鉴别法（Thin-layer Chromatography）l 与同浓度对照品溶液，在同一薄层板上点样、展开与检与同浓度对照品溶液，在同一薄层板上点样、展开与检视，供试品溶液所显主斑点的颜色与位置应与对照品的视，供试品溶液所显主斑点的颜色与位置应与对照品的主斑点一致，且主斑点的大小和颜色深浅也应大致相同。主斑点一致，且主斑点的大小和颜色深浅也应大致相同。离从基线至展开剂前沿距距离从基线至展开斑点中心fRl 采用供试品溶液与对照品溶液等体积混合，应显示单一、采用供试品溶液与对照品溶液等体积混合，应显示单一、紧密的斑点。紧密的斑点。l 选用与供试品化学结构相似的药物对照品溶液与供试品选用与供试品化学结构相似的药物对照品溶液与供试品溶液的主斑点比较，两者溶液的主斑点比较，两者比移比移值应不同。值应不同。l 将将项下两种溶液等体积混合，应显示两个清晰分离的项下两种溶液等体积混合，应显示两个清晰分离的斑点。斑点。l